Decellularization e Recellularization di fegati interi
Summary
Decellularization perfusione è una tecnica innovativa per la produzione di ponteggi fegato intero che conserva la composizione della matrice extracellulare l'organo e la microarchitettura. Qui, il metodo di preparazione di ponteggi intero organo utilizzando decellularization perfusione e conseguente ripopolamento con epatociti è descritto. Trapianti di fegato funzionale e trapiantabili possono essere generati utilizzando questa tecnica.
Abstract
Il fegato è un organo complesso che richiede perfusione costante per la consegna di sostanze nutritive e di ossigeno e la rimozione dei rifiuti per sopravvivere 1. Gli sforzi per ricreare o imitare la microstruttura fegato con motivi up utilizzando l'ingegneria dei tessuti e le tecniche di microfabbricazione non hanno avuto successo finora a causa di questa sfida di design. Inoltre, biomateriali sintetici utilizzati per creare impalcature per le applicazioni di tessuto epatico di ingegneria sono stati limitati nell'indurre la rigenerazione dei tessuti e la riparazione in gran parte a causa della mancanza di motivi specifici delle cellule vincolante che avrebbe indotto le funzioni cellulari corretta 2. Tessuti Decellularized nativo vasi sanguigni della pelle come 3 e 4 invece hanno trovato molte applicazioni in ingegneria dei tessuti, e hanno fornito una soluzione pratica per alcune delle sfide. Il vantaggio di matrice decellularized nativa è che si conserva, in una certa misura, la composizione originale e la microstruttura, migliorando quindi l'attaccamento delle cellule e riorganizzazione 5.
In questo lavoro si descrivono i metodi per eseguire perfusione-decellularization del fegato, come ad esempio che un fegato intatto bioscaffold che mantiene la struttura dei vasi sanguigni principali si ottiene. Inoltre, si descrivono i metodi per recellularize questi bioscaffolds con adulti epatociti primari, la creazione di un trapianto di fegato che è funzionale in vitro, ed ha l'accesso nave nella misura necessaria per il trapianto in vivo.
Protocol
Discussion
Il metodo di perfusione decellularization qui descritto produce una intera impalcatura del fegato che ha la stessa struttura lordo e la microarchitettura vascolare del fegato nativo. Il ponteggio ha una composizione simile a quello della matrice extracellulare del fegato nativo. Il metodo recellularization raggiunge ripopolamento del patibolo con celle ad alta efficienza e le cellule rimangono vitali e funzionali durante il periodo di coltura in vitro testati. Con l'aggiunta di cellule nonparenchymal nel tr…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Gli autori desiderano ringraziare Jack Milwid per la progettazione della camera di perfusione in vitro. Questo lavoro è stato supportato anche da finanziamenti del NIH americano, R01DK59766 e R01DK084053 a MY, R00DK080942 di KU, US NSF cbet-KU e 0.853.569 per il Shriners Hospitals for Children per BEU (non concedere. 8.503). Riconosciamo inoltre il supporto e il Shriners ospedali per bambini.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sodium dodecyl sulfate | Sigma-Aldrich | L4390 | ||
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | T8787 | ||
| Masterflex L/S Digital Drive | Cole-Parmer | EW-07523-80 | ||
| Masterflex L/S Standard pump head | Cole-Parmer | EW- 07013-81 | ||
| Bubble trap | Radnoti | 130149 |
References
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