Isolamento de DNA genômico de Tails rato

Summary

Protocol

1. Cortar pedaços da cauda (3mm) e as orelhas marca.
2. Adicionar 720 m l STE e 30 m l Proteinase K (10 ações mg / ml).
3. Incubar a 55 ° C em bloco de aquecimento e vortex a cada hora durante 3 horas a velocidade máxima por 10 segundos.
4. Inativar proteinase K a 70 ° C por 5 minutos.
5. Saciar em gelo durante 5 minutos.
6. Centrífuga DNA da cauda por 10 minutos na velocidade máxima.
7. Decantar em novo tubo contendo 720 m l Isopropanol.  
8. DNA precipitar invertendo o tubo ou vórtex.
9. Spin down DNA por 5 minutos na velocidade máxima. Remover o sobrenadante.
10. Lavar pellet com etanol 70%.
11. Spin down DNA genômico 5 minutos à velocidade máxima. Remover o sobrenadante.
12. Permitir DNA para secar por 1-2 minutos.
13. Ressuspender DNA no 100-200 l m dependendo do tamanho do pellet.
14. Coloque o tubo a 55 ° C por 1 hora para facilitar a dissolução do DNA.  

Materials

Name	Type	Company	Catalog Number	Comments
STE	Buffer			100 mm Tris; pH 8.5 /5 mM EDTA /0.2% SDS /200 mM NaCl / in H2O
TE	Buffer			100 mM Tris; pH 5.0 /1 mM EDTA /10 mM NaCl