Summary
Protocol
- Cut Schwanz Stück (3mm) und markieren den Ohren.
- Add 720 m l STE und 30 m l Proteinase K (10 mg / ml Stammlösung).
- Inkubation bei 55 ° C auf Heizblock und Wirbel jede Stunde für 3 Stunden bei Höchstgeschwindigkeit für 10 Sekunden.
- Inactivate Proteinase K bei 70 ° C für 5 Minuten.
- Quench auf Eis für 5 Minuten.
- Centrifuge tail DNA für 10 Minuten bei voller Geschwindigkeit.
- Dekantieren in neue Röhrchen mit 720 m l Isopropanol.
- Niederschlag DNA durch Invertieren des Röhrchens oder Vortexen.
- Spin down DNA für 5 Minuten bei voller Geschwindigkeit. Überstand entfernen.
- Wash-Pellet mit 70% Ethanol.
- Spin down genomische DNA 5 Minuten bei voller Geschwindigkeit. Überstand entfernen.
- Lassen DNA für 1-2 Minuten trocknen lassen.
- Resuspendieren DNA in 100-200 m l je nach Größe der Pellets.
- Das Röhrchen bei 55 ° C für 1 Stunde zu erleichtern Auflösung der DNA.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
STE | Buffer | 100 mm Tris; pH 8.5 /5 mM EDTA /0.2% SDS /200 mM NaCl / in H2O | ||
TE | Buffer | 100 mM Tris; pH 5.0 /1 mM EDTA /10 mM NaCl |