Hele Cell Opnamen van Brain van Adult Drosophila
Summary
Deze video toont de procedure voor het isoleren van hele hersenen van volwassen Drosophila als voorbereiding voor het opnemen van enkele neuronen met behulp van standaard hele cel-technologie. Het bevat beelden van GFP gelabelde cellen en neuronen bekeken tijdens het opnemen.
Abstract
In deze video, tonen we de procedure voor het isoleren van hele hersenen van volwassen Drosophila als voorbereiding voor het opnemen van enkele neuronen. We beginnen met het beschrijven van de oplossing ontleden en inname van de volwassen vrouwtjes in onze studies. De procedure voor het verwijderen van de hele hersenen intact, met inbegrip van zowel optische kwabben, wordt geïllustreerd. Dissectie van de bovenliggende trachea wordt ook getoond. De geïsoleerde brein is niet alleen klein, maar heeft speciale zorg in de behandeling in dit stadium om schade aan de neuronen te voorkomen, waarvan vele zich dicht bij de buitenkant van het weefsel. We laten zien hoe een speciale houder ontwikkeld wordt gebruikt om de hersenen in de opname kamer te stabiliseren. Een standaard elektrofysiologie opgezet wordt gebruikt voor het opnemen van enkele neuronen of paren van neuronen. Een TL-beeld, gezien door de opname microscoop, uit een GAL4 lijn rijden GFP-expressie (GH146) illustreert hoe projectie neuronen (PNS) worden geïdentificeerd in de live hersenen. Een hoog vermogen Nomarski beeld toont een weergave van een enkel neuron die wordt gericht op hele cel opnemen. Wanneer de hersenen met succes is verwijderd zonder schade, de meerderheid van de neuronen zijn spontaan actief, vuren actiepotentialen en / of de uitstalling van spontane synaptische input. Deze in situ voorbereiding, waarin whole cell-opname van de geïdentificeerde neuronen in de hele hersenen kunnen worden gecombineerd met genetische en farmacologische manipulaties, is een bruikbaar model voor het verkennen van cellulaire fysiologie en plasticiteit in het volwassen CZS.
Protocol
Discussion
De geïsoleerde hele brein voorbereiding illustreren we in deze video laat de beoordeling van cellulaire mechanismen die ten grondslag liggen prikkelbaarheid en synaptische transmissie in geïdentificeerde neuronen, inclusief die in de olfactorische verwerking paden, in de volwassen Drosophila hersenen (Gu en O Dowd, 2006). Deze aanpak is complementair aan van de neuronale activiteit studie in de hersenen van intacte volwassen Drosophila (Wilson et al 2004), in vrijwel dezelfde manier opnamen van neuronen in een plakje hersenen van zoogdier…
Acknowledgements
Dit werk werd ondersteund door een NIH subsidie NS27501 naar DKOD. Extra ondersteuning voor dit werk werd geleverd door een HHMI professor Grant Program voor DKOD.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| #5 Foceps | Tool | FST by DUMONT | No. 11251-10 | Be careful, never damage the fine tips of forceps |
| Papain | Reagent | Worthington | 3126 | 20 U/ml activated by 1 mM L-cysteine |
| Dissecting microscope | SMZ-2B Model:C-PS | Nikon | Equipped with gooseneck fiber optic lights positioned a low angle | |
| Needle & Syringe | PrecisionGlide®?, Becton Dickinson & Co | 305175 & 309602 | Cheap and durable | |
| Upright microscope | Axioskop2 FS plus | Zeiss | Equipped with a fixed stage, 40X water immersion objective, Nomarski optics, and fluorescent lamp | |
| Patch clamp amplifier | 200 B | Molecular device | ||
| Digidata D-A converter | 1322A | Molecular device |
References
- Gu, H., O Dowd, D. K., K, D. Cholinergic synaptic transmission in Adult Drosophila Kenyon cells in situ. Journal of Neuroscience. 26, 265-272 (2006).
- Wilson, R. I., Turner, G. C., Laurent, G. Transformation of olfactory representations in the Drosophila antennal lobe. Science. 303, 366-370 (2004).
