Bu video standart tüm hücre teknolojisini kullanarak tek nöronlar kayıt için hazırlık yetişkin Drosophila tüm beyinleri izole etmek için prosedürü göstermektedir. Bu kayıt sırasında görüntülenen GFP etiketli hücreleri ve nöronlar görüntülerini içerir.
Abstract
Bu video, tek bir nöron kayıt için hazırlık yetişkin Drosophila tüm beyinleri izole etmek için prosedürü göstermektedir. Biz diseksiyon çözüm ve çalışmalarda kullanılan yetişkin dişiler yakalama anlatarak başlar. , Hem de optik loblar da dahil olmak üzere, bütün beyin sağlam kaldırarak için prosedür gösterilmiştir. Üstteki trakea Diseksiyon de gösterilir. Izole beyin sadece küçük değil, ama bu aşamada ele nöronlara zarar görmesini önlemek için özel bakım ihtiyacı olan birçok dokusunun dış yüzeyine yakın. Biz, bizim geliştirdiğimiz özel bir tutucu kayıt odasında beyin stabilize etmek için nasıl kullanıldığını gösteriyor. Standart bir elektrofizyoloji kadar, tek bir nöron nöron veya çift kayıt için kullanılır. Bir floresan görüntü kayıt mikroskobu (GH146) projeksiyon nöronları (PNS) canlı beyinde nasıl tanımlanır göstermektedir GFP ifade sürüş GAL4 hattı üzerinden izlenebilmektedir. Yüksek güç Nomarski görüntü tüm hücre kayıt için hedeflenen tek bir nöronun bir görünümdür. Beynin zarar vermeden başarılı bir şekilde kaldırıldığı zaman, nöronların çoğunluğu aksiyon potansiyelleri ve / ateş veya kendiliğinden sinaptik giriş sergileyerek, kendiliğinden aktif. Bu, tüm beyin tespit nöronları tam hücre kayıt farmakolojik ve genetik manipülasyonlar ile kombine edilebilir hangi yerinde hazırlanması, yetişkin MSS hücresel fizyolojisi ve plastisite keşfetmek için yararlı bir model.
Protocol
Erişkin sinek I. beyin Diseksiyon 35 mm Petri kabında merkezi çözüm diseksiyon küçük bir damla (~ 100 ul) yerleştirin. Aspiratörü kullanarak yetişkin dişi yakalayın. Diseksiyon mikroskobu altında, sinek başını kesmek için iki şırınga iğneleri kullanın. Petri kabındaki tuzlu su diseksiyon küçük bir damla (papain eklenmiş) yerleştirin baş. Çanak alt bakan burnumun ile pozisyon kafa. 1 iğne ile sol bileşik göz kapsayan manikür tutun. 2, s…
Discussion
Bu video göstermek izole tüm beyin hazırlama uyarılabilirlik ve yetişkin Drosophila beyin (Gu ve O Dowd, 2006), koku işleme yolları da dahil olmak üzere tespit nöronlar, sinaptik iletim altında yatan hücresel mekanizmaları değerlendirme sağlar. Bu yaklaşım, uyanık davranmak memeliler kayıtları tamamlayıcı memeli bir beyin dilim nöronların kadar aynı şekilde kayıtları, bozulmamış yetişkin Drosophila (Wilson ve ark 2004) beyindeki nöronal aktivitenin çalışma tamamlayıcı. Memeli dilimlerine göre yerinde sin…
Acknowledgements
Bu çalışma için bir NIH hibe DKOD NS27501 tarafından desteklenmiştir. HHMI Profesör DKOD Programı Hibe tarafından bu iş için ek destek sağlanmıştır.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
#5 Foceps
Tool
FST by DUMONT
No. 11251-10
Be careful, never damage the fine tips of forceps
Papain
Reagent
Worthington
3126
20 U/ml activated by 1 mM L-cysteine
Dissecting microscope
SMZ-2B Model:C-PS
Nikon
Equipped with gooseneck fiber optic lights positioned a low angle
Needle & Syringe
PrecisionGlide®?, Becton Dickinson & Co
305175 & 309602
Cheap and durable
Upright microscope
Axioskop2 FS plus
Zeiss
Equipped with a fixed stage, 40X water immersion objective, Nomarski optics, and fluorescent lamp