Это видео демонстрирует процедуру выделения весь мозг от взрослых дрозофил при подготовке к записи от отдельных нейронов с использованием стандартных технологий целом клетки. Она включает в себя образы GFP меченых клеток и нейронов рассматриваться во время записи.
Abstract
В этом видео мы продемонстрируем процедуру выделения весь мозг от взрослых дрозофил при подготовке к записи от отдельных нейронов. Мы начнем с описания рассекает решение и захвата взрослые самки, используемые в наших исследованиях. Процедура снятия весь мозг неповрежденным, в том числе и оптических долях, проиллюстрировано. Препарирование вышележащих трахеи также показано на рисунке. Изолированных мозг не только малой, но нуждается в особом уходе в обработке на данном этапе, чтобы предотвратить повреждение нейронов, многие из которых близки к внешней поверхности ткани. Мы покажем, как специальный держатель мы разработали для стабилизации мозга в записи камеры. Стандартный электрофизиологии создали используется для записи с отдельных нейронов или пары нейронов. Флуоресцентные изображения, рассматривается через микроскоп записи, от GAL4 линии вождения GFP выражение (GH146) показывает, как проекционных нейронов (PNS) отмечены в живой мозг. Высокая мощность Номарского изображение показывает зрения одного нейрона, которые преследуют за весь записи клетки. Когда мозг успешно удален без повреждения, большинство нейронов спонтанно активных, выпустив потенциалов действия и / или экспонирование спонтанных синаптических входа. Это, в месте подготовки, в котором все записи ячейки определили нейронов в мозг целиком могут быть объединены с генетических и фармакологических манипуляций, является полезной моделью для изучения клеточной физиологии и пластичность во взрослой ЦНС.
Protocol
I. Препарирование мозга от взрослых летать Нанесите небольшое снижение (~ 100 мкл) рассекает решение в центре 35 мм чашки Петри. Поймать взрослую самку использовании аспиратора. Под микроскопом рассекает, используйте две иглы шприца обезглавить летать. Место голову в небол…
Discussion
Изолированных целом подготовка мозга мы проиллюстрируем в этом видео позволяет оценить сотовой механизмы, лежащие возбудимости и синаптической передачи в выявленных нейронов, в том числе в обонятельных путей обработки, во взрослом мозге дрозофилы (Gu и О Дауд, 2006). Такой подход является дополните?…
Acknowledgements
Эта работа была поддержана NIH грант NS27501 к DKOD. Дополнительная поддержка для этой работы была предоставлена программа HHMI профессор Грант DKOD.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
#5 Foceps
Tool
FST by DUMONT
No. 11251-10
Be careful, never damage the fine tips of forceps
Papain
Reagent
Worthington
3126
20 U/ml activated by 1 mM L-cysteine
Dissecting microscope
SMZ-2B Model:C-PS
Nikon
Equipped with gooseneck fiber optic lights positioned a low angle
Needle & Syringe
PrecisionGlide®?, Becton Dickinson & Co
305175 & 309602
Cheap and durable
Upright microscope
Axioskop2 FS plus
Zeiss
Equipped with a fixed stage, 40X water immersion objective, Nomarski optics, and fluorescent lamp