Vi etablerade en ny mus modell av en hängande vikt för portalen triad ocklusion. Denna teknik kan vara användbar för framtida undersökningar av ischemi i murina lever modeller.
Akut leverskada till följd av ischemi kan uppstå under flera kliniska rutiner t.ex. lever transplantation, levertumör resektion eller trauma reparation och kan resultera i leversvikt, som har en hög dödlighet 1-2. Därför murina studier av leverischemi har blivit ett viktigt forskningsområde genom att ge möjlighet att utnyttja farmakologiska och genetiska studier 3-9. Specifikt villkorliga möss med vävnadsspecifik deletion av en gen (CRE, flox system) ger insikter i rollen av proteiner i vissa vävnader 10-13. På grund av tekniska svårigheter i samband med manuell fastspänning portalen triaden hos möss, utförde vi en systematisk utvärdering med en hängande vikt för portalen triad ocklusion som tidigare har beskrivits 3. Genom att använda en hängande vikt system vi placera en sutur runt vänstra grenen av portalen triaden utan att orsaka någon skada på hepatiska lober, eftersom ävenfinaste klämmor tillgängliga kan orsaka skador levervävnad grund av den nära platsen för levervävnad på kärlen. Dessutom är den högra grenen av den hepatiska triaden fortfarande perfusion således ingen intestinal överbelastning med denna teknik som blodflödet till höger hepatiska loberna bevaras. Vidare är portalen triaden endast manipuleras gång under hela kirurgiska proceduren. Som ett resultat av detta förfarande liknande pre-konditionering, med korta tider av ischemi och reperfusion, kan lätt utföras. Systematisk utvärdering av denna modell genom att utföra olika ischemi och tider reperfusion visade ett nära samband med leverischemi tid med leverskada mätt som alanin (ALAT) och aspartat (ASAT) leveraminotransferasnivåerna serumnivåer 3,9. Sammantaget visar dessa studier bekräftar mycket reproducerbara leverskada vid användning av hängdropp-vikt för hepatisk ischemi och reperfusion intermittent. Således kan denna teknik vara användbar för andra utredare räntored i studier lever ischemi hos möss. Därför videoklippet ger en detaljerad steg-för-steg beskrivning av denna teknik.
Föreliggande studie beskriver en teknik för att utföra ischemi i en murin modell med användning av en hängning-vikt för ocklusion av den vänstra porta hepatis triaden. Även om det är en enkel metod för att lära sig de följande fällor skall tas med i beräkningen. Ett mycket vanligt misstag i början är en djup söm som inkluderar portalen triaden och vena cava. Andningen och hjärtfrekvens avtar inom 15 minuter på grund av ökat motstånd och minskningen i återföra blod till hjärtat vilket resulterar i en tidig död hos möss. Det bästa sättet att förhindra bland annat av vena cava är att lokalisera vena cava innan stygn för att hålla rätt loberna ner med en pincett. En annan viktig fråga är att vikterna är inte tung, vilket kan resultera i för mycket stress på vänster och höger portal rättegång som också stoppar blodflödet till rätt lober. Därför är mängden vatten i Eppendorf-rör bör justeras till musen vikt och ärRAMTIDA innehavare av verk bör placeras distalt från sömmen plats. På den motsatta om vikterna är av lågt blodtryck inte helt stoppas. Båda misstag lätt kan spåras av en ytterligare färgförändring till svagt i höger lob eller otillräcklig färgförändring av median och vänster lober, respektive. Därför lever färgförändringen efter att tillämpa de vikterna bör kontrolleras var 10: e minut. En annan vanlig kirurgisk komplikation är att den skadande av levern med nålen. Därför rätt loberna ska hållas ned med en mild tång så att spetsen av nålen lätt kan ses och tas med en nål hållare. Om dessa fällor i början tas med i beräkningen den hängdropp-vikt för hepatisk ischemi tillhandahåller en mycket reproducerbart skada på grund av ischemi genom att minimera variabiliteten för leverskada associerad med fastspänning av portalen triaden. Genom användning av en hängande vikt-systemet, är portalen triaden endast manipuleras gång under helakirurgiskt ingrepp, vilket orsakar signifikant mindre skada på de hepatiska lober. Dessutom uppträder ingen lever och tarm överbelastning med denna teknik. Mer vävnad trauma sker genom att ta bort och ersätta fartyg klämmor, särskilt med återapplicering av klämman under flera ischemi cykler som under ischemisk prekonditionering. Användningen av hängande vikter som är i en avlägsen plats från levervävnad, enligt våra observationer, ger fördelen av tillförlitlig ocklusion och samtidigt förhindra vävnad trauma på grund av manipulation av lever lober genom återapplicering en klämma. Sammantaget ger denna studie genomförbarheten av hängningen vikt för portalen triad ocklusion under ischemi, vilket minimerar variationen och begränsningar i samband med fastspänning. Därför denna teknik kan vara av intresse för andra forskare som anser att studera leverischemi.
The authors have nothing to disclose.
De nuvarande studierna stöddes av USA: s National Institutes of Health bidrag R01-HL092188, R01-DK083385 och R01HL098294, och Foundation för anestesi utbildning och forskning (FAER) beviljar HKE och DFG (Deutsche Forschungsgemeinschaft) Forskning Fellowship (GR2121/1- 1) och American Heart Association Bidrag till AG.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
Sodium Pentobarbital (Fatal Plus) | Vortech Pharmaceutical Ls, Ltd | V.P.L. 9372 | 4 mg/mL in saline |
Suture, Prolene 8.0 | Ethicon, USA | M8739 | reusable |
dissecting microscope | Leica | n/a | consider generous working distance |
Heating Table | Rt, Effenberger, Germany | n/a | only and single provider |
Surgical instruments | WPI, Dumont | Forceps, needle holder | |
Coagulator | Erbe, ICC50, Tuebingen, Germany | n/a | Different providers of coagulators |
Table 1. Specific reagents and equipment.