신생아 설치류 척추 코드의 electrophysiological 녹음을 측정하는 데 사용되는 세포 흡입 전극의 제조 및 사용의 데모 체외에서
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이 논문에서
요약
초록
신경 circuitries와 운동의 발전은 신생아 쥐 척수 중앙 패턴 발생기 (CPG) 동작을 이용하여 공부하실 수 있습니다. 우리는 해부 쥐 척수 코드에서 흡입 CPG 활동을 검사하는 데 사용되는 전극, 또는 상상의 운동을 조작하는 방법을 보여줍니다. 설치류 척추 코드는 인공 뇌척수에 배치되고 복부 뿌리는 흡입 전극으로 그려져있다. 전극은 상용 흡입 전극을 수정하여 구성되어 있습니다. 무거운 은색 와이어는 상용 전극에 의해 주어진 표준 와이어 대신 사용됩니다. 상업 전극에 유리 팁은 증가 내구성 플라스틱 팁로 대체됩니다. 우리는 일관성과 재현성있게, 튜빙의 특정 크기로 만들어진 손으로 그린 전극과 전극을 준비합니다. 데이터는 증폭기 및 neurogram 수집 소프트웨어를 사용하여 수집됩니다. 각각, 기계 및 전기 간섭을 방지하기 위해 녹음은 패러데이 케이지 내에서 공기 테이블에 수행됩니다.
프로토콜
절연 척추 코드의 Electrophysiological 녹음 신경 회로 1 유전자 및 개발 변경 사항을 확인할 수 있습니다. 우리는 이전에 신생아 마우스 척추 코드 2을 해부하다하는 방법을 보여주었다. 여기 우리는 고립 척추 코드 3 상상의 운동을 기록에 유용 흡입 전극을 준비하는 방법을 제시한다.
플라스틱 튜브 전극의 끝은 저온 알코올 램프 3-5 사용 손으로 아주 좋은 팁을 그립 수 있습니다. 플라스틱 관 (PE90, 클레이 애덤스 Intramedic TM)는 가단 형태로 튜브를 부드럽게하기 위해 화염을 통해 실시하고 있습니다. 튜브가 녹기 시작하고 더 투명 해짐에 따라 그것은 열원과 종료가 부드럽게 떨어져 행진에서 제거됩니다. 불꽃에서 튜브를 제거하는시기는 플라스틱이 붕괴하거나 그려하면서 분할하지 않습니다 확보하는 것이 중요합니다. 튜빙의 얇은 부분은 원하는 내경에 따라 면도날로 절단 등 표본이나 코드의 segmental 수준의 나이에 의해 결정. 튜브에 O - 링을 배치의 용이성을 위해, 45 ° 삭감은 면도날로 튜브의 두께 끝에 이루어집니다. 물미 및 O - 링은 전극의 배럴당 전극 팁을 첨부하기 위해 두꺼운 끝에 설치되어 있습니다.....
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토론
신경 시스템 개발은 격리 쥐 척수 코드를 사용하여 공부하실 수 있습니다. 신경 전달 물질의 존재에 상상의 운동은 패턴 전기 활동을 1,3의 형태로 척수에서 생성할 수 있습니다. 이러한 리듬 파열은 0.2-0.5 Hz에서에서 생산하고 왼쪽, 오른쪽과 flexor - 신근 alternations에서 패턴입니다. 다른 발달 단계에,이 활동의 견고하고 패턴 1 다릅니다. 유전자 변이는 또한이 활동을 3,5,7의 patterning을 방해하실 수 있습니다. 이 활동의 유전자 변형과 발달 연구는 중앙 패턴 생성 회로의 조직에 대한 통찰력을 제공하며 일반적으로 신경 발달의 연구를 알려줍니다.
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공개 사항
관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.
감사의 글
사무엘 L. 파프는 생물 학적 연구 솔크 연구소에서 유전자 발현 연구소에서 교수와 하워드 휴즈 의학 연구소의 탐정이다. 이 작품은 크리스토퍼와 다나 리브 재단에 의해 지원되었다. 조 Belcovson, 켄트 Schnoeker와 솔크 연구소에서 멀티미디어 자원에 마이크 설리반은 사진 촬영 및 편집 지원을 제공했습니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| PTFE Sub Lite Wall 튜빙 (소형 튜빙) | Zeus | 36AWG | 0.005”ID x 0.003” Wall (소형 부품) 0.003”에서 0.006” 규격으로도 제공됨 |
| 대형 튜빙 (0.86mm (0.34”)) | BD Biosciences | 427420 | 0.86mm (0.34”) O.D. 1.27mm (.050”) |
| 전극 배럴 | A-M Systems | 573000 | |
| 접착제 | JB Weld | ||
| 접착제: 실리콘 코킹제 | |||
| 납 및 인하기 | |||
| 표백제 | |||
| 자일렌 | |||
| 은선: 0.010” | A-M Systems | ||
| 곤충 핀: Austerlitz 0.1mm | Fine Science Tools | 26002-10 | |
| 마그네틱 스탠드 | Narishige International | GJ-8 | |
| 마이크로매니퓰레이터 | Narishige International | MN 151 | |
| 미니보드 (헤드스테이지) | Grass Technologies | F-15EB/B1 | |
| Polyview 어댑터 유닛 | Grass Technologies | PVA 8 | |
| 양극 휴대용 Physiodata 증폭기 시스템 | Grass Technologies | 15LT | |
| 아날로그-디지털 변환 카드 | National Instruments | 6035E | |
| 에어 테이블; Vibraplane | Kinetic Systems |
참고문헌
- Gallarda, B. W., Sharpee, T. O., Pfaff, S. L., Alaynick, W. A. Defining rhythmic locomotor burst patterns using a continuous wavelet transform. Ann N Y Acad Sci. 1198, 133-139 (2010).
- Meyer, A., Gallarda, B. W., Pfaff, S., Alaynick, W. Spinal cord electrophysiology. J Vis Exp. , (2010).
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재인쇄 및 허가
