القدرة على التعامل مع الإنسان الجذعية العصبية / السلائف الخلايا (hNSPCs) في المختبر يسمح للتحقيق في فائدتها وزرع الخلايا لأغراض علاجية واستكشاف التنمية العصبية البشرية. هذا البروتوكول يمثل طريقة زراعة وhNSPCs الركض وتأمل في زيادة استنساخ الإنسان من أبحاث الخلايا الجذعية.
Abstract
القدرة على التعامل مع الإنسان الجذعية العصبية / السلائف الخلايا (hNSPCs) في المختبر يوفر وسيلة لتحقيق فائدتها وزرع الخلايا لأغراض علاجية وكذلك لاستكشاف العديد من العمليات الأساسية للتنمية البشرية وعلم الأمراض العصبية. هذا البروتوكول يمثل طريقة بسيطة للزراعة وhNSPCs الركض وتأمل في توحيد هذه التقنية وزيادة استنساخ الإنسان من أبحاث الخلايا الجذعية. وقد عزل hNSPCs نستخدمها من جثي قشرات الدماغ بعد الولادة من قبل الإنسان الجذعية العصبية الوطنية الموارد ونمت الخلايا والثقافات ملتصقة على قوارير مغلفة مع فبرونيكتين (بالمر وآخرون ، 2001 ؛. شوارتز وآخرون ، 2003). نحن ثقافتنا hNSPCs في DMEM : F12 المصل خالية من وسائل الإعلام تستكمل مع EGF ، جمعية جيل المستقبل ، ولهم والمرور PDGF 01:02 تقريبا كل سبعة أيام. باستخدام هذه الظروف ، فإن الغالبية العظمى من الخلايا في ثقافة الحفاظ على التشكل الثنائي القطب وأعرب عن علامات المفاضلة الخلايا الجذعية العصبية (مثل nestin وsox2).
Protocol
ملاحظة : للحصول على زراعة الروتيني للhNSPCs دينا ، ونحن تغيير 5-10 ٪ من وسائل الإعلام كل يوم والمرور عليها عادة 1:02 مرة في الأسبوع. وسائل الإعلام على الثقافة بت 9500 بنسبة 20 ٪ ، 1X عوامل المضادات الحيوية / مضاد فطري ، والنمو (EGF ، جمعية جيل المستقبل ، ولكل PDGF في 40 نانوغرام / مل…
Discussion
لقد وجدنا أن هذا البروتوكول يتيح الثقافات موثوق hNSPCs. أحد العوامل الحاسمة لخلايانا هو أنها تحتاج إلى أن تبقى ، لأن الحضارات كثيفة الى حد ما ولا يمكن passaged إلى النقطة التي كانت الخلايا متفرق. في أيدينا ، والثقافات متفرق تنمو ببطء شديد أو الكف تماما عن الانقسام. لهذا السبب ، فإننا عا?…
Acknowledgements
الكتاب الامتنان الدكتور فيليب H. شوارتز من العصبية الوطنية الجذعية البشرية الموارد خلية في مستشفى للأطفال ، أورانج كاونتي معهد البحوث لتوفير التعليم الأولي وhNSPCs في زراعة بهم.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
BIT-9500 (BSA, Insulin, Transferrin)
Reagent
Stem Cell Technologies
09500
Antibiotic-Antimycotic
Reagent
Invitrogen
15240-062
DMEM:F12 (1X)
Reagent
Invitrogen
11330-032
EMEM (1X)
Reagent
Mediatech
MT-10-010-CV
Distributed by Fisher under the indicated catalog #
Fetal Bovine Serum
Reagent
Invitrogen
10437-028
FGF, human basic recombinant
Reagent
Peprotech
100-18B
PDGF-AB
Reagent
Peprotech
100-00AB
EGF, human recombinant
Reagent
BD Biosciences
CB40052
Distributed by Fisher under the indicated catalog #
Cell Culture Flask, 25 cm2
Tool
Corning
10-126-28
Distributed by Fisher under the indicated catalog #
Fibronectin, human, natural
Reagent
BD Biosciences
CB40008A
Distributed by Fisher under the indicated catalog #
Human Neural Stem/Precursor Cells
Cells
National Human Neural Stem Cell Resource http://www.nhnscr.org/default.htm
Nethercott, H. N., Maxwell, H., Schwartz, P. H., Loring, J. F., Wesselschmidt, R. W., Schwartz, P. H. Neural stem cell culture.Human Stem Cell Manual: A Laboratory Guide. , (2007).