היכולת לתפעל האדם גזע עצביים / מבשר תאים (hNSPCs) במבחנה מאפשרת לחקור את השירות שלהם, כמו השתלות תאים למטרות טיפוליות לחקור ההתפתחות העצבית האנושית. פרוטוקול זה מציג שיטה culturing ו hNSPCs passaging בתקווה reproducibility גדל והולך של מחקרים תא גזע אנושיים.
Abstract
היכולת לתפעל האדם גזע עצביים / מבשר תאים (hNSPCs) במבחנה מספק אמצעי לחקור את השירות שלהם, כמו השתלות תאים למטרות טיפוליות, כמו גם לחקור תהליכים בסיסיים רבים של ההתפתחות העצבית הפתולוגיה האנושית. פרוטוקול זה מציג שיטה פשוטה של culturing ו hNSPCs passaging בתקווה סטנדרטיזציה בטכניקה זו והגדלת reproducibility המחקר תא גזע אנושיים. HNSPCs אנו משתמשים נותקו מן cadaveric בקורטקס המוח לאחר הלידה על ידי משאב לאומי אנוש עצבית לתאי גזע גדל כמו תרבויות חסיד על צלוחיות מצופה פיברונקטין (פאלמר et al, 2001;.. שוורץ et al, 2003). אנחנו תרבות hNSPCs שלנו DMEM: F12 סרום ללא מדיה בתוספת EGF, FGF ו PDGF ומעבר להם 01:02 בערך כל שבעה ימים. שימוש בתנאים אלה, רוב התאים בתרבות לשמור על מורפולוגיה דו קוטבית להביע סמנים של מובחן בתאי גזע עצביים (כגון nestin ו Sox2).
Protocol
הערה: לקבלת culturing שגרתית של hNSPCs שלנו, אנו משנים 50-100% של התקשורת בכל יום אחר, ובדרך כלל מעבר להם 01:02 פעם בשבוע. תרבות התקשורת מכיל סיביות 9500 20%, 1X גורמים אנטיביוטי / antimycotic, וצמיחה (EGF, FGF, ואת כל PDGF ב 40 ng / ml) ב DMEM: F12 התקשורת הבסיס. הכנת Flas…
Discussion
מצאנו כי פרוטוקול זה מספק אמין של תרבויות hNSPCs. גורם אחד קריטי עבור התאים שלנו היא שהם צריכים להיות כל הזמן כמו תרבויות צפוף למדי, ולא ניתן passaged עד כדי כך התאים דלילה. בידיים שלנו, תרבויות דליל לצמוח באיטיות רבה או לחלוטין הפסקת חלוקת. מסיבה זו, אנו בדרך כלל לפצל התרבויות שלנו 01:02 או…
Acknowledgements
המחברים מודים בתודה ד"ר פיליפ שוורץ ח של המשאבים הלאומיים האדם עצבית לתאי גזע בבית החולים לילדים, אורנג' קאונטי מכון המחקר למתן hNSPCs והדרכה ראשונית culturing שלהם.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
BIT-9500 (BSA, Insulin, Transferrin)
Reagent
Stem Cell Technologies
09500
Antibiotic-Antimycotic
Reagent
Invitrogen
15240-062
DMEM:F12 (1X)
Reagent
Invitrogen
11330-032
EMEM (1X)
Reagent
Mediatech
MT-10-010-CV
Distributed by Fisher under the indicated catalog #
Fetal Bovine Serum
Reagent
Invitrogen
10437-028
FGF, human basic recombinant
Reagent
Peprotech
100-18B
PDGF-AB
Reagent
Peprotech
100-00AB
EGF, human recombinant
Reagent
BD Biosciences
CB40052
Distributed by Fisher under the indicated catalog #
Cell Culture Flask, 25 cm2
Tool
Corning
10-126-28
Distributed by Fisher under the indicated catalog #
Fibronectin, human, natural
Reagent
BD Biosciences
CB40008A
Distributed by Fisher under the indicated catalog #
Human Neural Stem/Precursor Cells
Cells
National Human Neural Stem Cell Resource http://www.nhnscr.org/default.htm
Nethercott, H. N., Maxwell, H., Schwartz, P. H., Loring, J. F., Wesselschmidt, R. W., Schwartz, P. H. Neural stem cell culture.Human Stem Cell Manual: A Laboratory Guide. , (2007).