Summary
Bu yazıda, insan periferik kan mononükleer hücrelerinde alloantigen özel anerji ikna etmek için basit bir teknik anlatılmaktadır. Tekniği olmayan alloreactive donör hücreleri oluşturmak için klinik olarak uygulanabilir. İnfüzyon bu hücrelerin bağışıklık sulandırıldıktan geliştirmek ve allojeneik hematopoietik kök hücre transplantasyonu sonrası toksisite azaltabilir.
Abstract
Allojeneik hematopoietik kök hücre transplantasyonu (AHSCT), doğumsal ve edinsel hematolojik hastalığı olan birçok hasta için tedavi en iyi şansı sunar. Ne yazık ki, sağlıklı bir hasta dokuları tanımak ve zarar alloreactive donör T hücrelerinin nakli Graft-versus-Host Hastalığı (GvHD 1) neden olabilir. Bir meydan okuma başarılı AHSCT donör T hücrelerinin, özellikle bağışıklık sulandırıldıktan ve nüks önleme yararlı etkileri ilişkili bozulma olmadan GvHD önlenmesidir. GvHD donör T hücrelerinin, kök hücre greft ya da farmakolojik immünosupresyon yönetimi tarafından non-spesifik tükenmesi ile önlenebilir. Ne yazık ki bu yaklaşımlar artış enfeksiyon ve hastalık nüksü 2-4. Alternatif bir strateji alloreactive donör T hücrelerinin nakli öncesinde alıcı antijen sunan hücreler (APC), allostimulation sonra seçici tüketmek için. Bu allodepletion stratejilerin Erken klinik çalışmalarda aşırı GvHD 5, 6 olmadan HLA-uyumsuz HSCT sonra bağışıklık sulandırıldıktan geliştirdi. Ancak, bazı allodepletion teknikleri uzman alıcı APC üretim 6, 7 gerektiren ve bazı yaklaşımlar-hedef dışı etkileri patojen donör-spesifik T hücreleri 8 ve CD4 tükenmesi de dahil olmak üzere düzenleyici hücreleri 9 T olabilir Bir alternatif bir yaklaşım alloreactive donör T hücrelerinin inaktivasyon alloantigen-özel düşük yanıt indüksiyon yoluyla. CD28 aracılı ortak stimülasyon sinyalleri 10 abluka sağlarken alıcı APC ile uyarıcı donör hücreleri tarafından sağlanır. Patojen ve tümör ilişkili antijen T hücre yanıtları in vitro 11 korurken Bu "alloanergization" yaklaşımı 1-2 günlükler alloreactivity azaltır . 2 alloanergized donör T hücrelerinin tarihsel kontrol alıcıları daha hızlı immün sulandırıldıktan, birkaç enfeksiyonlar ve daha az şiddetli akut ve kronik GvHD HLA-uyumsuz HSCT sırasında veya sonrasında infüze edildiği 1 devam eden klinik pilot çalışmalar tamamlanmış ve istihdam stratejisinin başarıyla olmuştur HLA-uyumsuz nakli 12 unmanipulated. İşte biz, HLA-uyumsuz ilgisiz stimülatörü PBMC alloanergized olan periferik kan mononükleer hücreleri (hücre) üretimi için mevcut protokol açıklar. Alloanergization ligandlar monoklonal antikor varlığı allostimulation elde CD28 aracılı üzere onaylanmıştır engellemek için B7.1 ve B7.1. Bu teknik uzman Stimülatörü APC üretim gerektirmez ve sadece bir tek ve nispeten kısa ex vivo inkübasyon adım gerektiren gerçekleştirmek için basit değildir. Gibi yaklaşım kolayca donör T hücreleri azalır alloreactivity ancak aşırı GvHD olmadan bağışıklık sulandırıldıktan geliştirmek için AHSCT ayarı evlatlık transferi için istinat patojen-spesifik bağışıklık oluşturmak için klinik kullanım için standart olabilir.
Protocol
Discussion
Disclosures
Çıkar çatışması ilan etti.
Acknowledgments
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Ficoll-Hypaque PLUS | GE Healthcare | 17-1440-02 | |
| RPMI 1640 | Invitrogen | 11875-093 | |
| Hepes 1M | Invitrogen | 15630-080 | |
| L-Glutamine 200mM | Invitrogen | 25030-081 | |
| Gentamicin | Invitrogen | 15750-060 | |
| Human AB serum (heat inactivated) | Gemini Bio Products | 100-512 | Use validated batches |
| Complete Culture Media (500ml) | 440ml RPMI 1640, 50ml AB serum, 5ml Hepes, 5 ml Glutamine, 167uL Gentamicin | ||
| Irradiator | GammaCell 1000 | ||
| T-25 Cell Culture Flasks with gas permeable caps | Corning | 3056 | |
| Humanized Monoclonal anti-B7.1 and anti B7.2 antibodies | See protocol text | ||
| U bottomed 96 well culture plates | BD Biosciences | 353077 | |
| Monoclonal CD3 antibody | Beckman Coulter Inc. | IM0178 | Reconstitute with 200ml distilled water |
| Monoclonal CD28 antibody | Beckman Coulter Inc. | IM1376 | Reconstitute with 200ml distilled water |
| CMV grade 2 antigen | Microbix | EL-01-02 | |
| Tritiated Thymidine | NEN | NET027 | |
| Scintillation Fluid | PerkinElmer, Inc. | 1205-440 | |
| Harvester | Tomtec | ||
| Printed Filtermat A | PerkinElmer, Inc. | 1450-421 | |
| Filter Bag | PerkinElmer, Inc. | 1450-432 | |
| 1450 MicroBeta TriLux Scintillation Counter | Wallac | ||
| null | |||
References
- Ferrara, J. L., Levy, R., Chao, N. J. Pathophysiologic mechanisms of acute graft-vs.-host disease. Biol Blood Marrow Transplant. 5, 347-356 (1999).
- Keever, C. A. Immune reconstitution following bone marrow transplantation: Comparison of recipients of T-cell depleted marrow with recipients of conventional marrow grafts. Blood. 73, 1340-1350 (1989).
- Bacigalupo, A. Increased risk of leukemia relapse with high-dose cyclosporine A after allogeneic marrow transplantation for acute leukemia. Blood. 77, 1423-1428 (1991).
- Horowitz, M. M. Graft-versus-leukemia reactions after bone marrow transplantation. Blood. 75, 555-562 (1990).
- Andre-Schmutz, I. Immune reconstitution without graft-versus-host disease after haemopoietic stem-cell transplantation: a phase 1/2 study. Lancet. 360, 130-137 (2002).
- Amrolia, P. J. Adoptive immunotherapy with allodepleted donor T-cells improves immune reconstitution after haploidentical stem cell transplantation. Blood. 108, 1797-1808 (2006).
- Amrolia, P. J. Selective depletion of donor alloreactive T cells without loss of antiviral or antileukemic responses. Blood. 102, 2292-2299 (2003).
- Perruccio, K. Photodynamic purging of alloreactive T cells for adoptive immunotherapy after haploidentical stem cell transplantation. Blood Cells Mol Dis. 40, 76-83 (2008).
- Mielke, S. Reconstitution of FOXP3+ regulatory T cells (Tregs) after CD25-depleted allotransplantation in elderly patients and association with acute graft-versus-host disease. Blood. 110, 1689-1697 (2007).
- Gribben, J. G. Complete blockade of B7 family-mediated costimulation is necessary to induce human alloantigen-specific anergy: a method to ameliorate graft-versus-host disease and extend the donor pool. Blood. 87, 4887-4893 (1996).
- Davies, J. K., Yuk, D., Nadler, L. M., Guinan, E. C. Induction of alloanergy in human donor T cells without loss of pathogen or tumor immunity. Transplantation. 86, 854-864 (2008).
- Davies, J. K. Outcome of alloanergized haploidentical bone marrow transplantation after ex vivo costimulatory blockade: results of 2 phase 1 studies. Blood. 112, 2232-2241 (2008).
