Summary
توضح هذه الورقة تقنية بسيطة للحث على مستضد خيفي محددة استعطال في خلايا الدم المحيطية وحيدات النوى. ويمكن تطبيق هذه التقنية لتوليد خلايا سريريا المانحة غير alloreactive. ويمكن ضخ هذه الخلايا المناعية وإعادة تحسين تقليل سمية خيفي بعد زرع الخلايا الجذعية المكونة للدم.
Abstract
خيفي زرع الخلايا الجذعية المكونة للدم (AHSCT) توفر أفضل فرصة للعلاج لكثير من المرضى المصابين بأمراض الدموية الخلقية والمكتسبة. للأسف ، لا يمكن زرع الخلايا التائية alloreactive المانحة التي تعترف وأضرار صحية نتيجة أنسجة المريض في الطعم ضد المضيف المرض (GvHD) 1. واحد تحديا لAHSCT الناجح هو الوقاية من دون الإضرار GvHD يرتبط بها من الآثار المفيدة لخلايا تي المانحة ، ولا سيما إعادة المناعة والوقاية من الانتكاس. ويمكن منع GvHD من قبل المنظمات غير محددة استنفاد الخلايا التائية المانحة من ترقيع الخلايا الجذعية أو عن طريق إدارة المناعة الدوائية. للأسف هذه المقاربات زيادة العدوى والمرض الانتكاس 2-4. استراتيجية بديلة هو انتقائي alloreactive تستنفد خلايا تي المانحة بعد allostimulation من قبل خلايا المتلقي تقديم المستضد (APC) قبل الزرع. تحسن التجارب السريرية في وقت مبكر من هذه الاستراتيجيات allodepletion إعادة المناعي بعد HLA - متطابقة HSCT دون GvHD الزائدة 5 ، 6. ومع ذلك ، تتطلب بعض التقنيات المتخصصة allodepletion إنتاج المتلقي APC 6 و 7 و بعض النهج قد قبالة المستهدفة بما في ذلك آثار استنفاد الخلايا المانحة T الممرض محددة (8) وخلايا CD4 T التنظيمية 9. نهج واحد هو تعطيل بديلة من الخلايا التائية alloreactive المانحة عبر تحريض مستضد خيفي hyporesponsiveness محددة. ويتحقق ذلك من خلال تحفيز الخلايا المانحة APC مع المتلقي في الوقت الذي توفر إشارات الحصار شارك في تنشيط CD28 بوساطة 10 ، وهذا "alloanergization" نهج alloreactivity يقلل بنسبة 1-2 سجلات مع الحفاظ على الممرض واستجابات المستضد T - ورم الخلايا المرتبطة بها في المختبر 11 . كانت استراتيجية استخدمت بنجاح في 2 و 1 استكملت الدراسات التجريبية الجارية السريرية التي غرست في alloanergized الخلايا التائية المانحة خلال أو بعد HLA - متطابقة HSCT مما أدى إلى إعادة المناعي السريع ، والالتهابات الحادة وأقل القليل GvHD الحادة والمزمنة من المتلقين السيطرة التاريخية unmanipulated HLA - متطابقة زرع 12. هنا نحن لدينا وصف بروتوكول للجيل الحالي من الخلايا الدموية المحيطية وحيدات النوى (PBMC) التي تم alloanergized لHLA - متطابقة PBMC منشط غير ذات صلة. ويتحقق بواسطة Alloanergization allostimulation في وجود الاجسام المضادة ليغاندس B7.1 وB7.1 لعرقلة CD28 بوساطة costimulation. هذا الأسلوب لا يتطلب إنتاج APC مشجعا المتخصصة وبسيطة لتنفيذ ، لا تتطلب سوى واحد وفيفو السابقين خطوة قصيرة نسبيا الحضانة. على هذا النحو ، يمكن أن يكون النهج الموحد بسهولة للاستخدام السريري لتوليد الخلايا التائية المانحة alloreactivity مع انخفاض ولكن مع الاحتفاظ الممرض حصانة محددة لنقل بالتبني في تحديد AHSCT لتحسين مناعة دون إعادة GvHD المفرطة.
Protocol
Discussion
Disclosures
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
Acknowledgments
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Ficoll-Hypaque PLUS | GE Healthcare | 17-1440-02 | |
| RPMI 1640 | Invitrogen | 11875-093 | |
| Hepes 1M | Invitrogen | 15630-080 | |
| L-Glutamine 200mM | Invitrogen | 25030-081 | |
| Gentamicin | Invitrogen | 15750-060 | |
| Human AB serum (heat inactivated) | Gemini Bio Products | 100-512 | Use validated batches |
| Complete Culture Media (500ml) | 440ml RPMI 1640, 50ml AB serum, 5ml Hepes, 5 ml Glutamine, 167uL Gentamicin | ||
| Irradiator | GammaCell 1000 | ||
| T-25 Cell Culture Flasks with gas permeable caps | Corning | 3056 | |
| Humanized Monoclonal anti-B7.1 and anti B7.2 antibodies | See protocol text | ||
| U bottomed 96 well culture plates | BD Biosciences | 353077 | |
| Monoclonal CD3 antibody | Beckman Coulter Inc. | IM0178 | Reconstitute with 200ml distilled water |
| Monoclonal CD28 antibody | Beckman Coulter Inc. | IM1376 | Reconstitute with 200ml distilled water |
| CMV grade 2 antigen | Microbix | EL-01-02 | |
| Tritiated Thymidine | NEN | NET027 | |
| Scintillation Fluid | PerkinElmer, Inc. | 1205-440 | |
| Harvester | Tomtec | ||
| Printed Filtermat A | PerkinElmer, Inc. | 1450-421 | |
| Filter Bag | PerkinElmer, Inc. | 1450-432 | |
| 1450 MicroBeta TriLux Scintillation Counter | Wallac | ||
| null | |||
References
- Ferrara, J. L., Levy, R., Chao, N. J. Pathophysiologic mechanisms of acute graft-vs.-host disease. Biol Blood Marrow Transplant. 5, 347-356 (1999).
- Keever, C. A. Immune reconstitution following bone marrow transplantation: Comparison of recipients of T-cell depleted marrow with recipients of conventional marrow grafts. Blood. 73, 1340-1350 (1989).
- Bacigalupo, A. Increased risk of leukemia relapse with high-dose cyclosporine A after allogeneic marrow transplantation for acute leukemia. Blood. 77, 1423-1428 (1991).
- Horowitz, M. M. Graft-versus-leukemia reactions after bone marrow transplantation. Blood. 75, 555-562 (1990).
- Andre-Schmutz, I. Immune reconstitution without graft-versus-host disease after haemopoietic stem-cell transplantation: a phase 1/2 study. Lancet. 360, 130-137 (2002).
- Amrolia, P. J. Adoptive immunotherapy with allodepleted donor T-cells improves immune reconstitution after haploidentical stem cell transplantation. Blood. 108, 1797-1808 (2006).
- Amrolia, P. J. Selective depletion of donor alloreactive T cells without loss of antiviral or antileukemic responses. Blood. 102, 2292-2299 (2003).
- Perruccio, K. Photodynamic purging of alloreactive T cells for adoptive immunotherapy after haploidentical stem cell transplantation. Blood Cells Mol Dis. 40, 76-83 (2008).
- Mielke, S. Reconstitution of FOXP3+ regulatory T cells (Tregs) after CD25-depleted allotransplantation in elderly patients and association with acute graft-versus-host disease. Blood. 110, 1689-1697 (2007).
- Gribben, J. G. Complete blockade of B7 family-mediated costimulation is necessary to induce human alloantigen-specific anergy: a method to ameliorate graft-versus-host disease and extend the donor pool. Blood. 87, 4887-4893 (1996).
- Davies, J. K., Yuk, D., Nadler, L. M., Guinan, E. C. Induction of alloanergy in human donor T cells without loss of pathogen or tumor immunity. Transplantation. 86, 854-864 (2008).
- Davies, J. K. Outcome of alloanergized haploidentical bone marrow transplantation after ex vivo costimulatory blockade: results of 2 phase 1 studies. Blood. 112, 2232-2241 (2008).
