Dying hücreler komşu hücrelerle birlikte daralma bariyer fonksiyonunu bozmadan epitel dokuların ekstrüde. Gelişmekte zebrafish optik netlik epitel yaşam ekstrüzyon görselleştirmek için mükemmel bir sistem sağlar. Burada hücresel çözünürlükte larva zebrafish epidermisin neden ve görüntü ekstrüzyon yöntemleri açıklanmaktadır.
Epitel dokuların Homeostatik bakım bariyer fonksiyonunu bozmadan hasarlı hücreleri sürekli çıkarılmasını gerektirir. Çalışmalarımız, ölmekte olan hücrelerin kendi çıkışına neden olabilir herhangi bir boşluk kapanış ise epitel yaprak dışarı çıkar, aktin ve miyozin bir halka oluşturacak ve sözleşme canlı komşuları sinyalleri göndermek bulduk, bir süreç olarak adlandırılan hücre ekstrüzyon 1. Gelişmekte zebrafish optik netlik epitel yaşam ekstrüzyon görselleştirmek için mükemmel bir sistem sağlar. Burada larva zebrafish epidermiste neden ve görüntü ekstrüzyon yöntemi açıklanmaktadır. Ekstrüzyon görselleştirmek için, epidermisin yeşil floresan protein tek hücreli aşamasında ifade transgenik zebrafish embriyolar F-aktin kırmızı floresan proteini etiketli prob enjekte ve larvaları için G418 ek apopitoz indükleyen. Daha sonra apoptotik hücre ekstrüzyon sürecinde aktin dinamikleri ve epitelyal hücre davranışlarını gözlemlemek için dönen bir disk konfokal mikroskop zaman atlamalı görüntüleme kullanın. Bu yaklaşım bize canlı epitel ekstrüzyon işleminin araştırmak için izin verir ve apoptotik hücreleri ortadan kaldırmak için başarısızlık neden olduğu hastalık durumlarını incelemek için bir yol sağlayacak.
Burada açıklanan protokol canlı bir epitel doku ekstrüzyon işlemini görselleştirmek için basit ve kolay bir yöntem gösteriyor. Bu tür deney bize sabit doku analizleri önceden takdir aktin dinamiklerinin inceliklerini incelemek için izin verir ve bu nedenle, ortak immunofluorescent yöntemleri tamamlar. Biz, inflamatuar yanıtlar ya da hasar gören hücrelerin birikimine yol açacaktır beklediğimiz apoptotik hücreleri, uzaklaştırmak ve temizlemek için yetmezliği ile ilişkili ekstrüzyon süreci ve ç…
The authors have nothing to disclose.
Biz bilimsel tartışma, öneri ve görüşleriniz için Rosenblatt laboratuvar üyeleri teşekkür ederim. GFP transgenik zebrafish: Biz de nazik CK plazmid kodlama RFP-UtrCH ve David Grunwald veren Mary Halloran teşekkür etmek istiyorum. Ayrıca, Gretchen Kral ve Zebra balığı mükemmel bir bakım ve özen Utah Üniversitesi'nde Merkezi Zebra balığı Kaynak personeli. Bu çalışma, JR için OD002056-01 DP2 NIH-NIGMS NIH Direktörü Yeni Yenilikçisi Ödülü 1 tarafından desteklenmiştir. GTE NIH Multidisipliner Kanser Eğitim Programı Hibe 5T32 CA03247-8 tarafından desteklenmiştir.
Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
---|---|---|---|---|
RNeasy Mini Kit | Reagent | Qiagen | 74104 | |
mMessage mMachine SP6 Kit | Reagent | Ambion | AM1340 | |
Crossing Tanks | Tool | Thoren Aquatic Systems | ||
The Pipet Pump | Tool | Bel Art Products | F3789 | |
5 ¾ Pasteur Pipet | Tool | VWR | 14672-608 | |
Microinjection Mold | Tool | Adaptive Science Tools | I-34 | |
100x15mm Culture Plate | Tool | Fisher | 08-757-12 | |
Flamming/Brown Micropipet Puller | Tool | Sutter Instrument Company | Model P97 | |
Borosilicate Glass Capillaries with Filament | Tool | Sutter Instrument Company | B1400-78-10 | OD 1.0mm, ID 0.78mm, 10cm length |
Electrode Storage Jar | Tool | World Precision Instruments | E210 | |
Phenol Red | Reagent | Sigma | P0290 | 0.5% in DPBS |
Pressure-Controlled Microinjector and Micromanipulator | Tool | Harvard Apparatus | PLI-100 | |
35x10mm Culture Dish | Tool | Cellstar | 627-160 | |
G418 (Geneticin) | Reagent | GIBCO | 10131-035 | 50 mg/mL in dH20 |
Dumont #5 Forceps | Tool | Fine Science Tools | 11253-20 | |
12cm Pin Holder | Tool | Fine Science Tools | 26016-12 | |
Insert Pins | Tool | Fine Science Tools | 26007-02 and-03 | |
Glass Bottom Culture Dish with 1.5 coverglass | Tool | MatTek | P35G-1.5-10-C | |
Low Melt Agarose | Reagent | Fisher | BP1360-100 | |
Tricaine | Reagent | Sigma | A-5040 | |
Dissecting Microscope | Microscope | Leica | MZ6 | |
Dissecting Microscope | Microscope | Nikon | SMZ645 | |
Fluorescent Dissecting Microscope | Microscope | Olympus | S2X12 | |
Spinning Disc Confocal Microscope | Microscope | Nikon | Eclipse Ti | Outfitted with a Yokagawa spinning disc head |
CCD Camera | Camera | Andor | DV-885-VP | 1002x1004x8 micron square pixels |