Detta meddelande innehåller uppgifter om noggrannheten och reproducerbarheten av BioSpec-nano UV-VIS spektrofotometer för dsDNA och protein kvantifiering. Även med extremt små volymer (1 till 2 L), är reproducerbarheten utmärkt, medan den automatiserade torka funktion förbättrar genomströmning och ger minimal överföring för mer exakt resultat.
Nukleinsyra kvantifiering förfaranden har avancerat kraftigt under de senaste tre decennierna. Fler och fler, molekylärbiologer kräver konsekvent små volymer analys av nukleinsyra prover för sina experiment. Den BioSpec-nano ger en möjlig lösning på problemen med felaktiga, icke reproducerbara resultat inneboende i dagens DNA-kvantifiering, via specialiserade optik och en känslig PDA detektor. Den BioSpec-nano har också automatiserade funktioner så att montering, mätning och städning görs av instrumentet, och därmed eliminera tråkiga, repetitiva och inkonsekvent placering av fiberoptiska element och manuell rengöring.
I denna studie har data som presenteras på kvantifiering av DNA och protein, samt på mätning reproducerbarhet och noggrannhet. Automatiserad prov kontakt och snabb scanning gör att mätning i tre sekunder, vilket ger en utmärkt genomströmning. Dataanalys utförs med hjälp av den inbyggda funktioner i programvaran. Den formel som används för beräkning av DNA-koncentrationen är:
Exempel Koncentration = DF · (OD260-OD320) · NACF (1)
Där DF = faktor provspädning och NACF = nukleinsyra koncentration faktor.
Nukleinsyran koncentrationsfaktor är satt i enlighet med analyten vald 1.
Protein koncentration resultat kan uttryckas som mikrogram / ml eller som mol / l genom att ange E280 och molekylära värden vikt respektive. När rester värden för Tyr, trp och cystein (SS bond) förs in i e280Calc fliken är extinktionskoefficienten värden beräknas enligt E280 = 5500 x (Trp rester) + 1490 x (Tyr rester) + 125 x (cystein SS bond) . Det E280 Värdet används av programvaran för koncentrationen beräkning.
Förutom att koncentrationen bestämning av nukleinsyror och protein, kan BioSpec-nano kan användas som en Ultra Micro-volym spektrofotometer för många andra analyter eller som en vanlig spektrofotometer med 5 celler mm vägsträckan.
Den BioSpec-nano har utvecklats för att lösa aktuella frågor som ingår i DNA-kvantifiering, såsom inkonsekventa resultat och tidskrävande manuellt arbete. Varje mätning tar bara 3 sekunder, vilket gör att en erfaren molekylärbiolog att analysera ca 3-6 flera prover i en minut. Den unika torkar funktion som inte bara förbättrar genomströmning av mätning, den eliminerar också behovet av manuell rengöring av piedestaler, vilket resulterar i försumbar överföring mellan mätningarna. Vidare uppgav tester med bara 2 våtservetter för DNA-prover som innehåller 1000 ng / mikroliter, överföring mindre än 2 ng / mikroliter.
Tillgången till ett 5 mm sträckenhet cell ger en möjlighet att analysera späda nukleinsyra och prover protein och utökar användningen av detta instrument för andra applikationer.
The authors have nothing to disclose.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
BioSpec-nano | Shimadzu | |||
Calf Thymus DNA | Sigma Aldrich | |||
Bovine Serum Albumin | Sigma Aldrich |