وهناك طريقة التدفق cytometric لتحديد وتحليل الجزيئي للتمايز في مرحلة معينة الأسلاف محمر الفئران والسلائف ، ومباشرة في طازجة تحصد الماوس نخاع العظم والطحال أو الكبد الجنين. في مقايسة يعتمد على سطح الخلية علامات CD71 ، Ter119 ، وحجم الخلية.
دراسة تكون الكريات الحمر يهدف إلى فهم الكيفية التي تتشكل الخلايا الحمراء من الأسلاف في وقت سابق للدم ومحمر. على وجه التحديد ، وينظم معدل تكوين الخلايا الحمراء التي إرثروبويتين هرمون (EPO) ، التي يتم تشغيلها بواسطة التوليف نقص الأكسجة الأنسجة. وثمة تهديد لائق نتائج الأوكسجين في الأنسجة من الزيادة السريعة في المكتب ، والقيادة زيادة في معدل الكريات الحمر ، وهي عملية تعرف باسم الاجهاد استجابة الكريات الحمر. الزيادة الناتجة في عدد خلايا الدم الحمراء المنتشرة يحسن نسيج تسليم الأوكسجين. فعال الاجهاد استجابة الكريات الحمر وبالتالي حاسمة بالنسبة لبقاء والتعافي من الظروف الفسيولوجية والمرضية مثل علو شاهق ، وفقر الدم ، والنزف ، والعلاج الكيميائي أو زرع الخلايا الجذعية.
الفأر هو مفتاح نموذجا لدراسة تكون الكريات الحمر وردها الإجهاد. تكون الكريات الحمر الماوس النهائي (للبالغين من نوع) يأخذ مكان في كبد الجنين بين أيام الجنينية 12.5 و 15.5 ، في الطحال حديثي الولادة ، والكبار في الطحال ونخاع العظام. الطرق التقليدية لتحديد الأسلاف محمر في الأنسجة تعتمد على قدرة هذه الخلايا أن يؤدي إلى نشوء مستعمرات الخلايا الحمراء في وسائل الاعلام عندما مطلي شبه الصلبة المحتوية على المكتب. ويتم تحديد ذريتها السلائف محمر على أساس معايير شكلية. أيا من هذه الأساليب الكلاسيكية تسمح بالوصول إلى أعداد كبيرة من الخلايا محمر تمايز في مرحلة محددة للدراسة الجزيئية. نقدم هنا طريقة تدفق cytometric لتحديد ودراسة التمايز المرحلة الخاصة الأسلاف محمر والسلائف ، ومباشرة في سياق نسيج الماوس معزولة حديثا. في مقايسة يعتمد على علامات سطح الخلية CD71 ، Ter119 ، وعلى تدفق cytometric المعلمة 'إلى الأمام مبعثر" ، والتي هي وظيفة من حجم الخلية. يمكن استخدام مقايسة CD71/Ter119 لدراسة الأسلاف محمر خلال استجابتها لإجهاد الكريات الحمر في الجسم الحي ، على سبيل المثال ، أو فقر الدم في الفئران الفئران الموجودة في ظروف انخفاض الأكسجين. ويمكن أيضا أن تستخدم لدراسة الأسلاف محمر مباشرة في أنسجة الفئران المعدلة وراثيا أو الأجنة ، بغية تقييم الدور المحدد للمسار الجزيئية تكون الكريات الحمر في تعديل.
منهجية تدفق cytometric التحقيق في وقت واحد يسمح لأي وظيفة الخلوية التي قد يتم الكشف عن الأجسام المضادة مع مضان ، مترافق محددة أو يجند ، بما في ذلك علامات سطح الخلية ، والتعبير من البروتين ، وبقاء الخلية ، مما يشير إلى الخلية باستخدام الفوسفات محددة الأجسام المضادة (3)…
The authors have nothing to disclose.
نشكر التدفق الخلوي UMass الأساسية : ريتشارد Konz ، Giehl تيد غوسلين باربرا ، قو أوجدتها وKrupoch تامي. وقد تم تمويل هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة / NHLBI RO1 HL084168 (MS) ، والمعاهد الوطنية للصحة CA – T32 130807 (JRS). كما استخدمت الموارد الأساسية التي تدعمها أبحاث الغدد الصماء السكري DK32520 منح المركز.
Name of the reagent | Company | Catalogue number |
---|---|---|
Fas-biotin | BD Pharmingen | 554256 |
Streptavidin-APC | Molecular Probes | S868 |
40 μm sterile cell strainer | Fisherbrand | 22363547 |
Polystyrene round-bottom tubes for FACS staining | BD Falcon | 352008 |
U-bottom 96 well plate | BD Falcon | 353910 |
ChromePure Rabbit IgG | Jackson ImmunoResearch | 015-000-003 |
CD71-FITC (stock 0.5mg/ml) | BD-Biosciences | 553266 |
Ter119-PE (stock 0.2mg/ml) | BD-Biosciences | 553673 |
7AAD | BD-Biosciences | 559925 |
DAPI powder | Roche | 236276 |
FITC Rat Anti-Mouse CD41 MWReg30 | BD Pharmingen | 553848 |
FITC Rat Anti-Mouse CD45R/B220 RA3-6B2 | BD Pharmingen | 553087 |
FITC Rat Anti-Mouse CD411b/Mac-1 M1/70 | BD Pharmingen | 557396 |
FITC Rat Anti-Mouse Ly-6G and Ly-6C (Gr-1) RB6-8C5 | BD Pharmingen | 553126 |
FITC Hamster Anti-Mouse CD3e 145-2C11 | BD Pharmingen | 553061 |
APC BrdU Flow kit | BD Pharmingen | 557892 |
Annexin V-biotin | BD Pharmingen | 556418 |