Den begränsande faktorn i användningen av den vuxna<em> Drosophila</em> Öga för att studera neurodegeneration och cellbiologi är svårt avbildning av intracellulära processer. Vi beskriver dissektion av enstaka ommatidia att generera ett ärligt uppsåt primära neuronala cellodling, som kan bli föremål för behandling och avancerad bildbehandling.
Bananfluga Drosophila melanogaster har gjort ovärderliga bidrag till neurovetenskaplig forskning och har använts allmänt som en modell för neurodegenerativa sjukdomar på grund av dess kraftfulla genetik 1. Flugan ögat i synnerhet har orgeln i valet för neurodegeneration forskning, är den mest lättillgängliga och livet onödigt del av Drosophila nervsystemet. Men den stora varning av intakt ögon är svårigheten, på grund av den intensiva autofluorescens av pigment, i bildbehandling intracellulära förlopp, såsom autophagy dynamik 2, som är utomordentligt viktig för förståelsen av neurodegeneration.
Vi har nyligen använt dissekering och kultur av enstaka ommatidia 3 det har varit viktigt för vår förståelse av autophagic dysfunktioner i en fluga modell av Dentatorubro-Pallidoluysian Atrofi (DRPLA) 3, 4.
Vi rapporterar nu en omfattande beskrivning av denna teknik (Figur 1), anpassat från elektrofysiologiska studier 5, vilket sannolikt kommer att öka dramatiskt möjligheten att flyga modeller för neurodegeneration. Denna metod kan anpassas till bilden leva subcellulära händelser och för att övervaka effektivt läkemedel administration på ljusmätare celler (Fig. 2). Om den används i kombination med mosaik tekniker 6-8, kan svaren från genetiskt olika celler analyseras parallellt (Fig. 2).
Den enda ommatidium dissektion som presenteras här gör att insamlingen av djupare cellbiologiska information om processer som neurodegeneration, när modelleras i Drosophila ögat. Den fotoreceptor nervceller är mer lättillgängliga än andra nervceller och de cytoplasman är särskilt stor, och därför lämplig att studera vesikler dynamik, i samma celler som används skickligt i många modeller för att kvantifiera neurodegeneration in vivo. Den kritiska aspekten av dissektion är främst förm?…
The authors have nothing to disclose.
Vi tackar Bernard Charroux för diskussioner. Detta arbete har finansierats av KCL Biomedicinska School.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
---|---|---|---|
Portable CO2 Dispenser | Flystuff | 59-150 | Refills also available |
DUMONT Tweezer No 5 | AGAR Scientific | T5034 | |
3-Well Glass Slide | EMS | 71561-01 | |
Micro scissors | VWR | HAMMHSB516-09 | |
Schneider’s Medium | VWR | 733-1663 | |
LysoTracker Red DND-99 | Invitrogen | L7528 | |
Superfrost Slides | VWR | 631-0108 | |
Vectashield with Dapi | Vector Labs | H-1200 | |
Coverslips | VWR | 631-1336 |