一个<em>在体外</em>脑型疟疾封存模型描述<sup> 1</sup>。<em>恶性疟原虫</em>受感染的红细胞被选中人脑微血管内皮细胞结合。选定的寄生虫表现出不同的表型。选择过程中可以使用各种应用<em> P。恶性疟原虫</em>株和血管内皮细胞株。
大多数人患疟疾死亡血阶段的恶性疟原虫的寄生虫引起的。脑型疟疾,最危及生命的并发症的疾病,特点是由恶性疟原虫感染的红血球细胞色素滋养体阶段大脑微血管 2-4(iRBC)的积累。这微血管阻塞(封存),导致酸中毒,缺氧和有害的炎性细胞因子(审查5 )。封存还发现,在人体2,3最微血管组织。其中iRBC附着于血管壁的机制仍然知之甚少。
永生化人脑微血管内皮细胞株(HBEC 5I)已被用来作为一个在体外血脑屏障模型。然而, 恶性疟原虫 iRBC附加只有糟糕HBEC – 5I 在体外 ,不像密集sequestrat离子在脑疟疾病例发生。因此,我们开发了一个平移检测选择(丰富)各种体育为了获得高约束性寄生虫,更能代表体内发生的人口恶性疟原虫株粘附HBEC – 5I。
寄生虫文化的一个样品色素滋养体阶段(iRBC和未受感染的红细胞混合物)洗涤和孵育生长在培养皿上HBEC – 5I层。孵化后,菜是轻轻洗涤uRBC和未绑定iRBC。新鲜uRBC添加到少数iRBC HBEC – 5i和孵育过夜。裂殖阶段寄生虫爆裂,裂殖子reinvade红细胞和这些环阶段的寄生虫是收获的翌日。寄生虫培养,直到获得足够的材料(一般为2至4周),并可以进行新一轮的选择。根据不同的 P. 恶性疟原虫株,需要4至第7轮的选择,以获得一个人口大多数寄生虫绑定HBEC – 5I。几个星期后,正逐步失去约束力的表型,说明变异表面抗原基因表达的开关,从而需要保持经常选择HBEC – 5I的表型。
综上所述,我们开发了一种选择检测呈现P.恶性疟原虫的寄生虫更“脑型疟疾的粘合剂”表型。我们能够选择4 P. 3 恶性疟原虫株HBEC – 5I。此实验也成功地被用来选择对人体皮肤和肺血管内皮细胞结合的寄生虫。更重要的是,这种方法可以用来选择组织特异性寄生虫种群,以确定寄生虫配体结合脑血管内皮细胞的候选人。此外,该法可用于屏幕上公认的反封存药品7。
脑型疟疾的特点是体育封存恶性 iRBC大脑内的微血管2,3。然而, 在体外培养的P.恶性不佳cytoadhere HBEC – 5I,人类大脑微血管内皮细胞模型。在这里,我们开发了一个简单的检测,以丰富HBEC – 5I结合,更表现型“一样在体内”的人口。三出4 P。恶性疟原虫株成功地使用这种方法选择。此外,HB3也HDMEC和HPMEC选择,这表明,这个协议可以用于各种寄生虫和内皮细胞类型。
不同的假设可以解释的缺乏约束力DD2应变。最有可能的事实,这种寄生虫线knobless,它深刻地阻碍了cytoadherence 13,14 。
我们建议选择亲一起培养未选中的寄生虫塞斯提供比较控制。例如,这将使比较转录的约束性和非约束性的寄生虫,发现寄生虫配位候选人的希望。
TNF是在高级别脑型疟疾患者中发现一种细胞因子,并已显示诱导HBEC – 5I( 克拉森等人,在准备和8,15,16)的表面蛋白的表达。在这种情况下,势必iRBC金额是在正常的HBEC – 5I相似,而激活HBEC – 5I。
这种“封存模式”也可以用来研究iRBC和内皮细胞之间的分子间相互作用,以及公认的反cytoadherence药物的效果。在这种情况下,我们建议在较小的井,如“8以及玻片”(BD 354628)或“CultureWell”(Sigma公司C7735 – 20EA),电镀HBEC – 5I。
The authors have nothing to disclose.
我们感谢HBEC – 5I细胞旧金山康达尔,技术转让办公室,乔治亚州亚特兰大疾病预防控制中心。这项工作是由威康信托基金会(4年博士助学金交流,并在基础生物医学科学高级研究金的JAR,授予编号084226)。