이 프로토콜에서 우리는 함께 RNAi – 중재 유전자 입을를 결합<em> 생체내에서</em관심있는 유전자의 효과 최저를 공부하기> 이뇨 분석은 모기 유체 배설에 있습니다.
Abstract
이 비디오 프로토콜은 곤충에서 특정 유전자를 분해하고 배설 률을 측정하는 소설 bioassay를 수행하기위한 효과적인 기법을 보여줍니다. 이 방법은 곤충의 이뇨 과정의 이해를 얻는 데 사용하며 단일 혈액 식사에서 액체의 엄청난 양의 걸릴 수있는 혈액 먹이를 arthropods의 이뇨의 연구에 특히 유용합니다.
생체내의 이뇨 분석에서와 결합된 이러한 RNAi – 중재 유전자 최저는 Aedes aegypti 모기 이뇨 1 aquaporin 유전자의 RNAi-매개 최저의 효과를 연구하기 위해 한센병 연구소에 의해 개발되었다.
프로토콜은 두 부분의 설정은 다음과 같습니다 첫 번째 데모는 간단한 모기 분사 장치를 구성하는 방법과 RNAi – 중재 유전자 최저에 대한 모기의 흉부에 dsRNA를 준비하고 주입하는 방법을 보여줍니다. 두 번째 데모를 결정하는 방법을 보여줍니다생체내의 bioassay에를 사용하여 모기의 배설 속도.
Protocol
부 전 – 성인 Aedes aegypti 모기에 RNAi – 중재 유전자 최저. 실험 개요는 그림 1을 참조하십시오. 1. dsRNA 합성 관심과 제어 dsRNAs의 유전자에 대한 구체적인 dsRNAs을 합성. 주 : 우리는 3 '특정 cDNA 2 월말과 5 부착된 T7 뇌관 시퀀스로'에서 끝 (5'-TAA 전술 GAC TCA CTA 위치한 300-500 기본 쌍의 범위에서 PCR 단편을 위해 개발 primers를 추천 TAG GG-3 ')….
Discussion
사용되는 RNAi 프로토콜은 캘리 포니 아주 리버 사이드 6,7 대학에서 알렉산더 Raikhel의 연구실에서 개발 Garver 및 Dimopoulos 사에 의해 출판 프로토콜과 비슷했습니다. 이 비디오 프로토콜에 표시된 실험적 접근 방법은 생체내 환경에의 곤충 이뇨에 관련된 유전자를 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 곤충, Malpighian의 tubules의 배설 기관은 이뇨를위한 '단순'모델 시스템으로…
Drake, L. L., Price, D. P., Aguirre, S. E., Hansen, I. A. RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes. J. Vis. Exp. (65), e3479, doi:10.3791/3479 (2012).