בפרוטוקול זה אנו משלבים RNAi בתיווך להשתקת גנים עם<em> In vivo</em> Assay diuresis ללמוד מציאה השפעות של גנים של עניין יש על הפרשת נוזל יתושים.
Abstract
זה פרוטוקול וידאו מדגים טכניקה יעילה מציאה גן מסוים חרק ולנהל המבדק חדשנית למדוד את קצב הפרשת. בשיטה זו ניתן להשתמש כדי להשיג הבנה טובה יותר של תהליך diuresis ב חרקים שימושית במיוחד בחקר diuresis בדם, האכלה פרוקי רגליים כי הם מסוגלים לקחת כמויות עצומות של נוזל הדם בארוחה אחת.
מציאה זו RNAi בתיווך גנים בשילוב עם ב assay diuresis vivo פותחה על ידי המעבדה הנסן כדי לחקור את ההשפעות של מציאה RNAi בתיווך של גנים אקווה פורין על diuresis Aedes יתוש aegypti1.
הפרוטוקול מוגדר ב-לשני חלקים: ההפגנה הראשונה מדגים כיצד לבנות מכשיר פשוט זריקה יתוש וכיצד להכין ולהזריק dsRNA לתוך בית החזה של יתושים על מציאה RNAi בתיווך גנים. הפגנה 2 מתארת כיצד לזהותוהפרשה שיעורי יתושים באמצעות המבדק ב vivo.
Protocol
חלק א – RNAi בתיווך מציאה גן בוגר Aedes aegypti יתושים. לסקירה הניסוי ראו תרשים 1. 1. dsRNA סינתזה לסנתז dsRNAs ספציפיים כנגד הגנים של dsRNAs ריבית ושליטה. הערה: אנו ממליצים primers מתפתחות ע?…
Discussion
פרוטוקול RNAi משמש פותחה במעבדה של אלכסנדר Raikhel באוניברסיטת קליפורניה בריברסייד 6,7, והוא דומה הפרוטוקול שפורסם על ידי Garver ו Dimopoulos 4. הגישה הניסיונית המוצגת פרוטוקול הווידאו הזאת יכולה לשמש כדי לחקור גנים המעורבים diuresis חרק בסביבה vivo. איברי ההפרשה של חרק?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
המחברים מודים ויקטוריה קרפנטר להערות ביקורתיות שלה של פרוטוקול זה.
Drake, L. L., Price, D. P., Aguirre, S. E., Hansen, I. A. RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes. J. Vis. Exp. (65), e3479, doi:10.3791/3479 (2012).