В этом протоколе мы объединим RNAi-опосредованной генов с<em> В естественных условиях</em> Диурез анализ, чтобы изучить эффекты нокдауна генов интерес имеет на комаров выделение жидкости.
Это видео демонстрирует протокол эффективный метод, чтобы нокдаун гена в частности насекомых и провести новые биопроб для измерения скорости экскреции. Этот метод может быть использован для получения более глубокого понимания процесса диурез у насекомых и особенно полезен при изучении диурез в питающимися кровью членистоногих, которые могут занимать огромное количество жидкости в одной еды кровь.
Это RNAi-опосредованной генной нокдаун в сочетании с в тесте диурез естественных условиях была разработана Хансен лабораторию для изучения влияния RNAi-опосредованной нокдаун аквапорин генов комара Aedes aegypti диурез 1.
Протокол установки из двух частей: первая демонстрация показывает, как построить простое устройство инъекции комаров и, как подготовить и ввести в дсРНК грудной клетки комаров для RNAi-опосредованной генной нокдаун. Вторая демонстрация показывает, как можно определитьвыделение ставок в использовании комаров в естественных условиях биопроб.
Протокол RNAi использоваться была разработана в лаборатории Александр Райхель из Университета Калифорнии Riverside 6,7 и похож на протокол опубликован Гарвер и Dimopoulos 4. Экспериментальный подход показано в этом видео, протокол может быть использован для изучения генов, участвующи?…
The authors have nothing to disclose.
Авторы выражают благодарность Виктории Карпентер ее критические замечания этого протокола.
Name of reagent or equipment | Company | Catalogue number | Comments |
MEGAscript T7 High Yield Kit | Ambion, Inc. | AM1334 | |
PBS buffer | Sigma-Aldrich | P4417 | |
Plastic tubing | Local vendor | PVC | |
1 ml plastic pipette tip | VWR | 83007-376 | Blue tip |
1 ml syringe | Becton, Dickinson and Company | 309602 | |
Scissors | Local vendor | ||
Metal needle | Carolina Biologicals | 654307 | Size 5 |
Fly pad | Genesee Scientific | 789060 | |
Battery-powered aspirator w/ collection vial | UPMA Labs | IPMM 2000 | |
Fine tip forceps | World Precision Instruments | 14095 | |
Glass capillary needles | World Precision Instruments | 1B200-6 | |
Stereo dissection microscope | Leica Microsystems | S6D | |
Analytical precision balance | Mettler Toledo | AB54S | |
Sucrose | Sigma-Aldrich | 84097 | |
One pint waxed lined cardboard cups | Local vendor | Manufactured soup cups | |
Mesh net | Local vendor | plastic fly gauze |