نحن هنا وصف منخفضة التكلفة، والسريع، وإجراء تثبيت للرقابة وموحدة تستخدم لامتصاص العرق 4٪ perfused عبر الأوعية الدموية: من خلال قلب فأر للحصول على الحفاظ على أفضل وجه ممكن من الدماغ.
هدف التثبيت هو بسرعة وبشكل موحد المحافظة على الأنسجة في حالة الحياة مثل. في حين وضع الأنسجة مباشرة في أعمال مثبت جيدا لقطع صغيرة من الأنسجة، وعينات أكبر مثل الدماغ سليمة تشكل مشكلة لتثبيت غمر لأن مثبت لا تصل الى جميع مناطق الأنسجة في نفس المعدل 5،7. في كثير من الأحيان، والتغيرات في الاستجابة لنقص الأكسجة تبدأ قبل أن تتمكن من الحفاظ على النسيج 12. ميزة perfusing مباشرة مثبت من خلال الدورة الدموية هو أن هذه المادة الكيميائية يمكن أن تصل بسرعة كل ركن من أركان الحي باستخدام شبكة الطبيعية الأوعية الدموية. من أجل الاستفادة من الدورة الدموية أكثر فاعلية، لا بد من الحرص على تطابق الضغوط الفسيولوجية 3. من المهم أن نلاحظ أن الضغوط النفسية هي التي تعتمد على الأنواع المستخدمة. تقنيات لتثبيت نضح تختلف تبعا للنسيج إلى أن تكون ثابتة، وكيف ستتم معالجة الأنسجة تثبيت التالية. في هذا الفيديو، ونحن تصف منخفضة التكلفة، والسريع، وإجراء تثبيت للرقابة وموحدة تستخدم لامتصاص العرق 4٪ perfused عبر الأوعية الدموية: من خلال قلب فأر للحصول على الحفاظ على أفضل وجه ممكن من الدماغ لالمناعية. والميزة الرئيسية لهذه التقنية (مقابل بالجاذبية النظم) هو أن يتم استغلال الدورة الدموية بأكبر قدر من الفعالية.
ملاحظات إضافية لعملية جراحية ناجحة:
The authors have nothing to disclose.
وقد تم تمويل هذا العمل من قبل مركز تكنولوجيا الاتصالات العصبية (CNCT)، ومركز الموارد P41 بتمويل من المعهد الوطني للتصوير الطبية الحيوية والهندسة الحيوية (NIBIB، P41 EB002030) وبدعم من المعاهد الوطنية للصحة (NIH).
Equipment | Company | Catalogue number | Comments |
Anesthetic: | |||
Ketamine/xylazine mixture (Anesthetic may vary per laboratory / institution) | Ketaset | NDC 0856-2013-01 | 10 mL vial |
Surgery: | |||
Needle tip, 27 GA x 1.25″ | Materiel Services | 25251 | |
Large blunt/blunt curved scissors (~14.5 cm) | Fine Science Tools | 14519-14 | |
Straight iris scissors | Fine Science Tools | 14058-11 | |
Standard tweezers | Fine Science Tools | 11027-12 | |
Pair of fine (Graefe) tweezers | Fine Science Tools | 11050-10 | |
1 large hemostat forceps – curved or straight (~19 cm) | surgicaltools.com | 17.21.51 | |
2 standard hemostat forceps – straight serrated (14 cm) | Fine Science Tools | 13013-14 | |
1 modified hemostat (with 15-gauge hole filed through the tip) | Fine Science Tools | 13013-14 | |
15-gauge blunt or olive-tipped needle (perfusion needle) | Fisnar | 5601137 | |
Perfusion: | |||
HyPerfusion system or equivalent | |||
Phosphate buffered saline, pH 7.4 | |||
4% Paraformaldehyde in 0.1 M Phosphate Buffer, pH 7.4 | |||
Shallow glass or plastic tray, approximately 10″ x 10″ | |||
Crushed ice | |||
Water bath (37 °C) | |||
Timer | |||
50 ml syringe | Medline Industries | NPMJD50LZ | |
Dissection: | |||
Pair of standard sharp/blunt straight scissors (~12 cm) | Fine Science Tools | 14054-13 | |
Medium curved or straight rongeurs (14-16 cm) or skull bone removal pliers | Fine Science Tools | 16020-14 | |
Straight iris scissors (~9 cm) | Fine Science Tools | 14058-11 | |
Micro-spatula (double 2″ flat ends, one rounded, one tapered to 1/8″) | Fine Science Tools | 10091-12 | |
Post-Fixation & Storage: | |||
50 ml glass vial | |||
40 ml HEPES-Buffered Hanks Solution (HBHS) with sodium azide (90mg/l) |