זה פרוטוקול וידאו מדגים את הבידוד והרחבת גזע כמו תאים mutliforme resected בניתוח גליובלסטומה אדם (GBM) רקמת הגידול בשיטת neurosphere תרבות assay.
גזע דמויי תאים היו מבודדים גידולים כגון, שד ריאות בערמונית, במעי הגס ואת המוח. הנושא הקריטי בכל גידולים אלה, במיוחד mutliforme גליובלסטומה (GBM), היא לזהות לבודד תאים סרטניים באוכלוסיה ייזום (ים) לחקור את תפקידם ביצירת התקדמות הגידול, והישנות. הגידול הבנת ייזום אוכלוסיות תאים יספקו רמזים למציאת גישות טיפוליות יעיל עבור גידולים אלה. Assay neurosphere (NSA) בשל הפשטות שלה reproducibility שימש שיטת הבחירה של בידוד התפשטות של רבים זה תאים סרטניים. פרוטוקול זה מדגים את שיטת התרבות neurosphere לבודד להרחיב גזע דמויי תאים כריתה כירורגית של הרקמה האנושית הגידול GBM. הנהלים כוללים העיכול הכימי הראשוני ניתוק מכני של רקמת הגידול, ולאחר מכן ציפוי ההשעיה וכתוצאה מכך תא בודד בתרבות NSA. לאחר 7-10 ימים, neurospheres העיקרי של 150-200 מיקרומטר בקוטר ניתן לצפות ומוכנים להמשך passaging והתרחבות.
כדי לבודד גזע עצביים ועל ובתאים של מבוגר נורמלי מוח עוברית 1, 2, 3, 4 ו הגידול גם גזע דמויי תאים של רקמות סרטן כגון 5 הריאות, הערמונית, 6, 7 השד והמוח 8, 9 assay neurosphere כבר שימוש תכוף כפי השיטה של בחירה. שימוש assay זה פשוט לשחזור, אפשר ליצור מספר בלתי מוגבל של תאים מרקמת הגידול resected המראים מאפיינים דומים כמו תאים סומטיים גזע; multipotency vivo לשעבר, את היכולת ליצור גידולים חדשים על ההשתלה, עצמית והתחדשות. תאים אלה יוכלו לשמש כדי לחקור את סרטן בסיסי ביולוגיה של התא, כולל תא אל תא אינטראקציות, וכן, בידול הגירה, הפלישה מוות של תאים. בנוסף, הגידול מבודדים גזע דמויי תאים לספק כלי רב ערך כדי ללמוד כיצד ליצור גידולים, התקדמות, נסיגה וגם לפענח את המנגנונים הסלולר הנובעת שבסופו של דבר יכול לספק תובנות טיפוליותאפשרויות.
The authors have nothing to disclose.
עבודה זו נתמכה על ידי מענקים ממרכז פלורידה לחקר גידול במוח; פרסטון א ג'וניור וולס מרכז לטיפול גידול במוח.
Name of the reagent | Type | Company | Catalogue number | Comments |
NeuroCult NSC Basal Medium (Human) | Medium | Stem Cell Technologies | 05750 | |
NeuroCult NSC Proliferation Supplements (Human) | Medium supplement | Stem Cell Technologies | 05753 | |
%0.05 trypsin-EDTA | Reagent | Gibco | 25300-062 | |
*MEM | Reagent | Gibco | 41500-018 | HEM component |
*HEPES | Reagent | Sigma | H4034 | HEM component |
*Distilled water | Reagent | Gibco | 15230-147 | |
**DNase I | Reagent | Roche | 104159 | |
**Soybean trypsin inhibitor | Reagent | Sigma | T6522 | |
Pen/Strep | Reagent | Gibco | 15140-122 | |
No. 10 scalpel blade | Surgical tool | BD | 371610 | |
Petri Dish | Culture ware | BD Falcon | 353003 | |
Small forceps | Surgical tools | Fine Science Tools | 11050-10 | |
Cell strainer | Sieve | BD Falcon | 352340 | |
T25 flask | Culture ware | Nalge Nunc international | 136196 | |
T80 flask | Culture ware | Nalge Nunc international | 178905 | |
15 ml tubes | Culture ware | BD Falcon | 352096 | |
50 ml tubes | Culture ware | BD Falcon | 352070 | |
EGF | Growth factor | R&D | 2028-EG | |
b-FGF | Growth factor | R&D | 3139-FB | |
Heparin | Growth factor | Sigma | H4784 | Reconstituted in PBS |
* To make HEM, mix 1x10L packet of MEM and160ml of 1M HEPES and bring the volume to 8.75 L using distilled water. Set the final PH to 7.4 and store it at 4°C.
** To prepare trypsin inhibitor solution, first make 10 ml of DNase I solution (100 mg DNase dissolved in 100 ml of HEM) and then add 0.14 g of trypsin inhibitor to DNase solution and finally make the volume up to 1 Liter using HEM. Keep aliquots of the final products in -20°C freezer.