Das Papier beschreibt ein vereinfachtes Verfahren zur Hornhaut-und Verbrauchssteuern zu retinalen Gewebe aus dem Augapfel von menschlichen Leichen Spendern auszuhöhlen. Die hier beschriebene Technik wird verbrauchsteuerpflichtige guter Qualität zu Geweben zur Transplantation oder chirurgische Zwecke oder Forschungszwecke ohne Beschädigung anderer Gewebe des Augapfels verwendet werden zu helfen.
Enukleation ist der Prozess, das Abrufen des Augapfels aus einer Leichenspender Verlassen der Rest der Welt ungestört. Exzision bezieht sich auf den Abruf von Augengewebe, insbesondere Hornhaut, indem er getrennt von dem Augapfel. Ausweiden ist der Prozess des Entfernens der inneren Organe hier genannten Netzhaut. Der Augapfel besteht aus der Hornhaut, der Lederhaut, den Glaskörper, die Linse, der Iris, der Netzhaut, der Aderhaut, Muskeln etc. (Suppl. Abbildung 1). Wenn ein Patient aus Hornhautschäden leiden, muss die Hornhaut entfernt werden und ein gesundes muss man durch keratoplastischer Operationen transplantiert werden. Genetische Störungen oder Defekte in der Netzhaut-Funktion kann beeinträchtigt Vision. Menschliche Auge Globen kann für verschiedene chirurgische Verfahren wie Augen-Banking, Transplantation menschlicher Hornhaut oder Lederhaut und Forschung auf Augengeweben verwendet werden. Allerdings gibt es wenig Informationen über die menschliche Hornhaut und Netzhaut-Exzision, wahrscheinlich aufgrund der limited Zugang zu menschlichen Geweben. Die meisten Studien beschreiben ähnliche Verfahren an Tiermodellen durchgeführt. Forscher verlassen sich auf die Verfügbarkeit von gut präpariert und gut erhaltenen Augengeweben um das Wissen über menschliche Auge Entwicklung, Homöostase und Funktion zu verlängern. Da wir hohe Menge an okularen Globen, aus denen ca. 40% erhalten (Tabelle 1) von ihnen zu Forschungszwecken verwendet werden, sind wir in der Lage, sehr große Menge von Experimenten an diesen Geweben führen, definieren Techniken, um Verbrauchsteuern und bewahren Sie sie regelmäßig.
Die Hornhaut ist eine avaskuläre Gewebe, das die Übertragung von Licht auf die Netzhaut ermöglicht und zu diesem Zweck sollte immer ein gutes Maß an Transparenz. Innerhalb der Hornhaut, hilft der Limbus Region, die ein Reservoir der Stammzellen ist, den Wiederaufbau von Epithelzellen und beschränkt die Wucherung der Bindehaut Aufrechterhaltung Hornhaut Transparenz und Klarheit. Die Größe und th ickness der Hornhaut sind entscheidend für die klare Vision, wie Änderungen in einer von ihnen ablenken, unklare Vision führen könnte. Die Hornhaut besteht aus 5 Schichten: a) Epithel, b) Bowman-Schicht, c) Stroma, d) Descemetschen Membran und e) Endothel. Alle Schichten sollten einwandfrei funktionieren, um sicherzustellen, klare Vision 4,5,6. Die Aderhaut ist die Zwischenschicht zwischen der Tunika Sklera und der Retina, auf der Innenseite durch die Bruch-Membran begrenzt und ist verantwortlich für den Blutfluss in die Augen. Die Choroidea hilft auch, um die Temperatur und liefert Nahrung zu den äußeren Schichten der Netzhaut 5,6 zu regeln. Die Retina ist eine Schicht von Nervengewebe, das die Rückseite des Augapfels (Suppl. 1) umfasst und besteht aus zwei Teilen: einem lichtempfindlichen Teil und einen nicht-empfänglichen Teil. Die Netzhaut hilft, das Licht von der Hornhaut und der Linse zu erhalten und wandelt sie in der chemischen Energie schließlich an das Gehirn mit Hilfe des Sehnervs 5,6 übertragen.
ove_content "> Das Ziel dieses Papiers ist es, ein Protokoll für die Präparation des Hornhaut-und Netzhaut-Gewebe aus menschlichen Auges Globen stellen. Vermeidung von Kreuzkontaminationen in das umgebende Gewebe und die Erhaltung RNA-Integrität ist von fundamentaler Bedeutung als solche Gewebe zu Forschungszwecken ausgerichtet sind unverzichtbar an (i) die Charakterisierung der Transkriptom der Augengewebe, (ii) Isolierung von Stammzellen für die regenerative Medizin-Projekte, und (iii) Bewertung der histologischen Unterschiede zwischen den Geweben von normal / den betroffenen Fächern. In diesem Beitrag beschreiben wir die Technik, die wir derzeit zur Entfernung Die Hornhaut, die Aderhaut und Netzhaut-Gewebe aus einem Augapfel. Hier bieten wir Ihnen ein detailliertes Protokoll für das Sezieren des menschlichen Augapfels und der Entfernung der Hornhaut und Netzhaut-Gewebe. Das dazugehörige Video wird den Forschern helfen, eine geeignete Technik für den Abruf lernen von kostbaren menschlichen Geweben, die schwer zu finden sind regelmäßig.Sowohl richtige Exzision und Haltbarmachung von Hornhaut und Netzhaut-Gewebe sind kritisch, da kleinere Mängel wie endotheliale Schäden oder hohe Anzahl von Descemet-Falten können Transplantatversagen der Hornhaut während Temperaturänderungen oder falscher Handhabung kann die Integrität der retinalen Gewebe Kompromittierung führen. Das Ziel dieser Arbeit ist es zu zeigen, wie Hornhaut und Netzhaut-Gewebe optimal isoliert werden kann, ohne Schäden oder Veränderungen zu induzieren, die ihre Verwendung zur Transpl…
The authors have nothing to disclose.
Diese Arbeit wurde teilweise durch Zuschüsse der Regione Veneto (Ricerca Sanitaria Finalizzata n.292/2008 und Ricerca Sanitaria Finalizzata 2009) unterstützt. Die Autoren danken Dr. C. Griffoni für die 2009/2010 zusammengefasste Daten über die Verwendung von menschlichen Auges Globen.
Materials for excision of cornea and retina.
Product description | Dimensions | Company / Institute |
Guarded disposable scalpel | Blade size 15 | Swann-Morton |
Sterile bandages | 5 cm X 5 cm, 8 layered, 5 pcs | Artsana |
Sterile disposable medical towel | 35 X 50 cm | U.Jet |
Sterile scissors | Blades 24 mm / overall length. 95 mm curved, blunt | e.janach |
Sterile forceps | Stainless steel -100 mm 11 X 2 ruled by 0.70 mm teeth | e.janach |
Corneal claw – Disposable medical device | NIIOS (Hippocratech) | |
Preparations | ||
PBS | 100 ml PBS [10x] in 900 ml d/w (distilled water) | Sigma-Aldrich |
Na-thiosulphate | 1 gm Na-thiosulphate in 1 litre of PBS [1x] | Sigma-Aldrich |
I-PVP | 5 gm I-PVP in 1 litre d/w | Sigma-Aldrich |
Table 2. The table describes the materials used for excision of cornea and retina and the company they are received from.
Materials for storage medium (2000 ml).
Components | Supplier | Catalogue number | Concentration | Quantity |
MEM (1X) liquid | Invitrogen | 32360-034 | 1900 ml | |
Sodium pyruvate | Invitrogen | 11360-039 | 1mM (10ml/l) | 20 ml |
L-glutamine | Invitrogen | 25030-032 | 2mM (10ml/l) | 20 ml |
Antibiotic/antimycotic | Sigma-aldrich | A5955-20ML | 10ml/l | 20 ml |
Newborn calf serum | Invitrogen | 26010-74 | 2% (20 ml/l) | 40 ml |
Table 3. Materials for storage medium.
Preparation of storage medium
Add all the ingredients using the specific concentrations as given above in a jar and mix well. Filter them using pore size of 0.2 micron filter (Millipore, Milan, Italy) with help of a peristaltic pump. Preserve the medium in the bottles at RT.
Materials for transport medium (2000 ml).
Components | Supplier | Catalogue number | Concentration | Quantity |
MEM (1X) liquid | Invitrogen | 32360-034 | 1800 ml | |
Sodium pyruvate | Invitrogen | 11360-039 | 1mM (10 ml/l) | 20ml |
L-glutamine | Invitrogen | 25030-032 | 2mM (10 ml/l) | 20ml |
Newborn calf serum | Invitrogen | 26010-74 | 2% (20 ml/l) | 40 ml |
Dextran t500 | Pharmacosmos | 551005004007 | 6% (60 gm/litre) | 120 g/l |
Table 4. Material for transport medium.
Preparation of transport medium
Add Dextran 6% in ~ 1.5 litre of MEM and leave it overnight. Add the rest of ingredients in the media and filter using 0.2 micron filter (Millipore, Milan, Italy) using a vacuum pump. Preserve the medium in the bottles at RT.