涡固定，局部照射，组织移植
Summary
一个有效的方法是明确和一贯的涡虫之间的大小为嫁接组织描述。还包括如何结合局部照射活体动物，铅屏蔽的固定化技术用于移植，可适应的描述。
Abstract
涡虫，淡水涡虫，已被证明是一个功能强大的系统解剖的后生再生和干细胞生物学1,2。涡虫再生的任何丢失或损坏的组织，是由成人干细胞可能称为neoblasts 3。虽然已明确显示，这些干细胞是多能干细胞和奇能够再造一个完整的动物4，在干细胞的细胞行为的人口和动态异质性在很大程度上仍然悬而未决。由于大量干细胞广泛分布在整个涡虫的身体计划，需要操纵分子和功能的研究在体内的干细胞亚群的先进方法。
组织移植和局部照射两种方法，可以为进一步研究分离涡虫干细胞亚群。每种技术都有明显的优势。 ţ问题移植允许引进的干细胞，成一个天真的主机，是天生的基因不同，或此前已治疗药物。另外，局部照射使干细胞内的一台主机，并列组织的干细胞缺乏的隔离，没有伤口的引进，臀位或任何组织的完整性。使用这两种方法，一个可以探讨的细胞自主和非自主因素，控制干细胞的功能，如增殖，分化和迁移。
5,6两个组织移植和局部照射7已被用于定义许多正在研究的问题，今天依然对涡虫再生的历史。然而，这些技术仍然未得到充分利用，由于以前的方法费时费力，不一致的性质。这里提出的协议，代表一个大的进步，在减少时间ND努力要再现嫁接或部分照射的动物产生大的人数接近100％的功效。我们涵盖文化的大型动物，固定化，局部照射，组织移植的准备，和动物复苏的优化。此外，这里所描述的工作表明局部照射方法为使用最广泛研究的涡，Schmidtea地中海的首次应用。此外，高效的组织移植在涡虫，打开门的功能测试天真或处理的干细胞亚群在复育实验，这早已是金标准方法化验成人干细胞的潜力在哺乳动物8。这些技术的广泛采用，无疑会导致更好地了解的组织稳态和再生过程中的成体干细胞的细胞行为。
Protocol
Discussion
固定化的重要性
固定是迄今为止对这些过程的任何成功完成最关键的一步。如果涡虫是不当的固定部分照射之前，他们可能将下方的铅屏蔽，产生不一致的，混杂的结果。此外，如果动物没有得到充分固定移植后，主机的蠕虫病毒可能会搬走的移植组织，导致移植失败，在妥善医治主机。适当的固定是通过调整浓度或chloretone治疗的长度和滤纸的温度和湿度对涡虫休息。然而，?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
笔者想涡移植的宝贵意见，以及过去和现在的桑切斯实验室成员感谢千代子小林和Kiyokazu阿加塔对这些技术的发展过程中的宝贵讨论。这项工作是由美国国立卫生研究院训练津贴（5T32 HD0791）主计长办公室和美国国立卫生研究院R37GM057260亚撒支持。 ASA是霍华德·休斯医学研究所的研究员。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
| General Purpose Transfer Pipette | Samco | 691 |
| Capillary tubes (ID 0.75 mm) | FHC | 30-30-0 |
| Capillary tubes (OD 0.7 mm) | FHC | 30-50-08 |
| Parafilm M | VWR | 52858-076 |
| Kimwipes 34155 | VWR | 500029-891 |
| Black filter paper | Schleicher & Schuell | 10310809 |
| Whatman #2 filter paper 1002-055 | Fisher Scientific | 09-810B |
| Whatman #3 filter paper 1003-185 | Fisher Scientific | 09-820E |
| Cigarette rolling paper | Zig-Zag, original | NA |
| Petri dishes | VWR | 82050-544 |
| Forceps DUMONT, INOX #5 | FST | 11251-20 |
| Chloretone | Sigma Aldrich | 112054 |
| Casein | Sigma Aldrich | C3400 |
| Lead Shields | Alpha Systems Corp., Bluffdale, UT | Custom design |
| XRAD-320 Biological Irradiator | Precision X-Ray, North Branford, CT | NA |
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