В этом видеоролике показано вскрытие процедуры для обработки поджелудочной железы человека в различных форматах хранения. Анатомические ориентация сохраняется в течение поджелудочной регионов позволяют определить состав региональных островок и плотности.
Это рассечение и процедуры отбора образцов, был разработан для сети поджелудочной доноров органов с диабетом (nPOD) в рамках программы стандартизации подготовки поджелудочной железы оправился от трупных доноров органов. Поджелудочная железа состоит из 3 основных регионов (голова, тело, хвост), а затем серийных поперечных срезов всей медиальной к поперечной оси. Переменный разделы предназначены для фиксированного парафина и свежезамороженной блоков и остатков образцов фарш для оснастки замороженных препаратов образца, с или без РНКазы ингибиторов ДНК, РНК или белка изоляции. Основная цель процедуры вскрытия поджелудочной железы, чтобы попробовать все поджелудочной железы при сохранении анатомической ориентации.
Эндокринные клетки неоднородность с точки зрения островок состав, размер, и количество сообщается на человека островков по сравнению с грызунами островки 1. Большинство человеческих островков из поджелудочной железы головы, тела и хвоста регионов состоят из инсулина containinг β-клеток, затем нижние пропорции глюкагон содержащие α-клеток и соматостатин-содержащие δ-клетками. Панкреатический полипептид содержащих ПП клетки и грелина содержащих клетки эпсилон также присутствуют, но в небольших количествах. В отличие от крючковатыми область содержит островков, которые в основном состоят из панкреатический полипептид, содержащий клетки PP 2. Эти региональные различия островок возникают развития различий. Поджелудочная железа развивается из брюшной и спинной поджелудочной почки в кишки и после поворота желудка и двенадцатиперстной кишки, брюшной движется доли и сливается с спинной 3. Вентральной доли является задняя часть головы, включая крючковатыми процесса, а спинной доли приводит к остальной части органа. Региональные изменения поджелудочной железы также сообщил, с хвостом области, имеющие высшее островок плотность по сравнению с другими регионами и спинной доли производные компоненты проходят выборочный атрофии сахарным диабетом 1 типа <sдо> 4,5.
Дополнительная органов и тканей часто оправился от доноров органов и включать поджелудочной железы лимфатических узлов, селезенки и поджелудочной железы, не лимфатических узлов. Эти образцы будут восстановлены с подобными форматами, как и для поджелудочной железы с добавлением изоляции криоконсервированных клеток. При проксимальной части двенадцатиперстной кишки входит поджелудочной железы, слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки могут быть собраны для парафиновых и замороженных блоков и оснастки фарш замороженные препараты.
Целью этой процедуры является определение стандартной обработки поджелудочной железы, которые могут быть согласованы на нескольких сайтах сбор и таким образом позволяет сравнение результатов, полученных разными группами. Вскрытие метод основан на стандартной хирургической патолог…
The authors have nothing to disclose.
Авторы благодарят доноров, семей и органов заготовительных организаций, участвующих в этом исследовании и Мария Мартино и Ирина Kusmartseva за экспертную помощь. Эта работа финансировалась по делам несовершеннолетних исследований диабета Foundation (MC-T., MA) в поддержку сети поджелудочной доноров органов с диабетом.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
Dissection instruments including scalpels with 22 blades | Various | Various | |
Centrifuge tubes (15 and 50 ml) | Fisher Scientific | 05-539-5, 430828 | Sterile |
Cryotubes(1.8 ml) | VWR North America | 89004-300 | Sterile, bar codes optional |
RNAlater | Ambion | AM7021 | |
Surgical Pathology Ink | |||
Cassettes | Mercedes Medical | CAS ECO109 | |
10% Neutral Buffered Formalin | Fisher Scientific | 23-245-685 | |
OCT Freezing Media | TissueTek | 4583 | |
Molds | ThermoScientific | 58952 | Various sizes |
Isopentane | Fisher Scientific | O3551-4 | OCT chilling bath |
Dry ice | OCT chilling bath | ||
Liquid nitrogen in Dewar flask | Snap freezing cryovials | ||
Cell culture dish (100mm) | Corning | 430167 | Sterile |
Hyclone DMEF | ThermoScientific | SH30023.01 | Sterile, store refrigerated, glutamine included |
Fetal Bovine Serum | Cellgro | 35-010-CV | Sterile, store frozen aliquots |
Penicillin/Streptomycin/Antifungal | GIBCO | 15240-062 | Sterile, store frozen aliquots |
Type 9 Paraffin | Richard-Allan Scientific | 8337 | |
1X D-PBS | GIBCO | 14190-144 | Sterile |
16% Paraformaldehyde | EM Sciences | 15710 | Make fresh, store refrigerated |
8% Glutaraldehyde | EM Sciences | 16019 | Make fresh, store refrigerated |
Biosafety Level 2 hood | Various | ||
Ultra-low freezer | Various | ||
Sakura Cassette Printer | Sakura | ||
Sakura VIP300 | Sakura | Automatic paraffin processor | |
Paraffin Embedding Station | ThermoFisher |
Table 1. Specific reagents and equipment.