Summary

Optische Aufnahme überschwellige neuronale Aktivität mit Single-Cell-und Single-Spike Auflösung

Published: September 05, 2012
doi:

Summary

Das Verständnis der Funktion des zentralen Nervensystems in Wirbeltieren erfordert Aufnahmen aus, weil viele Neuronen kortikale Funktion entsteht auf der Ebene der Populationen von Neuronen. Hier haben wir ein optisches Verfahren zur überschwelligen neuronale Aktivität mit Single-Cell-und Single-Spike Auflösung aufzeichnen beschreiben, gedithert Random-Access-Scans. Diese Methode records somatischen Fluoreszenz-Calcium-Signale von bis zu 100 Neuronen mit hoher zeitlicher Auflösung. Ein Maximum-Likelihood-Algorithmus deconvolves die darunterliegende überschwellige neuronale Aktivität von den somatischen Fluoreszenz Calcium Signale. Diese Methode erkennt zuverlässig Spikes mit hohen Erkennungsraten Wirkungsgrad und eine geringe Rate der False Positives und kann verwendet werden, um neuronale Populationen zu untersuchen<em> In vitro</em> Und<em> In vivo</em>.

Abstract

Signalisieren von Informationen in dem Vertebraten zentralen Nervensystems wird oft von Populationen von Neuronen statt einzelner Neuronen durchgeführt. Auch Ausbreitung überschwellige spiking Tätigkeit umfasst Populationen von Neuronen. Empirische Studien zu kortikalen Funktion direkt erfordern daher Aufnahmen von Populationen von Neuronen mit hoher Auflösung. Hier beschreiben wir ein optisches Verfahren und eine Entfaltungs-Algorithmus auf neurale Aktivität von bis zu 100 Neuronen mit Single-Cell-und Single-Spike-Auflösung aufzeichnen. Diese Methode beruht auf dem Nachweis der transienten Anstieg der intrazellulären Kalziumkonzentration somatischen mit überschwelligen elektrischen Spitzen (Aktionspotentiale) in kortikalen Neuronen verbunden. Hohe zeitliche Auflösung der optischen Aufnahmen wird durch eine schnelle Random-Access-Scanning-Technik mit akusto-optische Deflektoren (bevollmächtigten Anweisungsbefugten) 1 erreicht. Zwei-Photonen-Anregung der Calcium-sensitiven Farbstoff Ergebnisse in hoher räumlicher Auflösung in undurchsichtigen Gehirn tisSue 2. Rekonstruktion der Spitzen von den Fluoreszenz-Calcium-Aufnahmen durch eine Maximum-Likelihood-Methode erreicht. Simultane elektrophysiologische und optische Aufnahmen zeigen, dass unsere Methode zuverlässig erkennt Spikes (> 97% Spike Detektionseffizienz) weist eine geringe Rate an falsch positiven Spitzen-Detektionssignals (<0,003 Spikes / s) und einer hohen zeitlichen Genauigkeit (etwa 3 ms) 3. Diese optische Methode der Spitzen-Detektionssignals können verwendet werden, um neuronale Aktivität in vitro und in vivo in narkotisierten Tieren 3,4 aufzuzeichnen.

Protocol

Ein. Optischer Aufbau (Abbildung 1) Für Zwei-Photonen-Anregung ein Infrarot gepulstes Lasersystem mit Femtosekunden-Pulsen verwendet wird. Eine hohe Laserausgangsleistung (teilweise> 2W bei 890 nm Wellenlänge) ist erforderlich, um die großen Verluste durch die optischen Komponenten des Systems eingebracht wird, ausgeglichen. Ein prechirper bestehend aus zwei Prismen verleiht eine negative Gruppengeschwindigkeitsdispersion (GVD) auf die Laserpulse vor den akustooptischen Ablenker (bevollmächti…

Discussion

Dithered Random-Access-Scans indirekt erkennt überschwellige Spiking-Aktivität aus dem Anstieg der intrazellulären Calcium-somatischen mit jedem Spike in einem Neuron Somata verbunden. Der Anstieg der intrazellulären Calcium durch fluoreszierende Kalzium Farbstoffe nachgewiesen. Die Grenzen der geditherten Random-Access-Überprüfung ergeben weitgehend aus der begrenzten Signal-zu-Rausch-Verhältnis der Calcium Fluoreszenzsignalen. Das Signal-zu-Rausch-Verhältnis wird wiederum durch Lichtschäden, die es nicht erla…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Wir danken Dr. Randy Chitwood für die kritische Durchsicht des Manuskripts. Diese Arbeit wurde von der Whitehall-Stiftung und der Alfred P. Sloan Foundation Zuschüsse für HJK unterstützt.

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments (optional)
      Optical components are listed in order, starting from the laser
Titan:Sapphire Laser Coherent Inc. Chameleon Ultra 2 High power output recommended (>2W at 900 nm)
Achromatic lens f = 30 mm Thor labs AC254-030-B Anti-reflection (AR) coating for 650-1050 nm
Achromatic lens f = 100 mm Thor labs AC254-100-B AR 650-1050 nm
lens f = 75 mm Thor labs LA1608-B AR 650-1050 nm
lens f = 175 mm Thor labs LA1229-B AR 650-1050 nm
Achromatic lens f = 300 mm Thor labs AC254-300-B AR 650-1050 nm
Achromatic lens f = 100 mm Thor labs AC254-100-B AR 650-1050 nm
Achromatic lens f = 100 mm Thor labs AC254-100-B AR 650-1050 nm
Acousto-optical deflectors Intraaction Corp ATD 6510CD2  
Reflective diffraction grating Newport 53-011R 100 grooves/mm for AODs with 65 MHz bandwidth and scan angle of 45 mrad
21.6 mm Brewster prisms Lambda Research Optics Inc. IBP21.6SF10  
Colored Glass Schott BG-39  
Dichroic mirror Chroma Technology Corp Z532RDC  
Photomultiplier modules Hamamatsu H9305-03  
DAC-ADC board National Instruments PCI-6115  
Oregon Green 488 Bapta-1 AM Invitrogen O-6807  

References

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Cite This Article
Ranganathan, G. N., Koester, H. J. Optical Recording of Suprathreshold Neural Activity with Single-cell and Single-spike Resolution. J. Vis. Exp. (67), e4052, doi:10.3791/4052 (2012).

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