Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

Azoxymethane (AOM) ve Dekstran Sülfat Sodyum (DSS) ile Modelleme Kolit-İlişkili Kanser

doi: 10.3791/4100 Published: September 11, 2012

Summary

Biz hızla pro-inflamatuar ajan dekstran sülfat sodyum (DSS) üç kür takip ve sürekli insan kolit görülenler ile morfolojik ve moleküler benzerlikleri olan farelerde kolon tümörleri oluşturur genotoksik ajan azoxymethane (AOM) hangi yönetiminde bir protokol göstermek kanserle ilişkili.

Abstract

Gibi Crohn hastalığı (CH) ve ülseratif kolit (ÜK) gibi enflamatuar barsak hastalığı olan bireyler (İBH), sağlıklı bireyler üzerinde kolorektal kanser (CRC) yakalanma riski altındadır. Bu risk yaygın kolon tutulumu ile köklü UC olan bireylerin% 30 gibi yüksek bir kümülatif insidans, hastalık süresi ve kapsamı ile orantılıdır. İBH ve ilişkili kolit kansere (CAC) 1 Kolon displazi sonucunda geliştiği düşünülmektedir Bu hücrelerin kronik inflamatuar bir sitokin ortamda kalmış ise. 2 spontan ve kolit ile ilişkili kanserler olmak adenokarsinomların kalitesi paylaşmakla birlikte epitel hücre hasarı ve onarım tekrarlanan döngü, altta yatan moleküler olaylar dizisi farklı olduğuna inanılıyor. 3. Bu ayrım CAC belirli hayvan modelleri için ihtiyaç savunuyor.

Birkaç fare modelleri anda CAC çalışma yapılmamış. Dekstran sülfat Sodium (DSS), kolon epiteli üzerine doğrudan toksik etkileri olan bir ajan, kronik inflamatuar bir devlet oluşturmak için birden fazla döngüleri farelere içme suyu tatbik edilebilir. Yeterli süre ile bu farelerin bazı tümörler gelişir. Yanlısı bir kanserojen ortamda yönetilen eğer 4 tümör gelişimi bu modelde hızlandırdı edilir. Bunlar, tümör oluşumunun yollar genetik mutasyonlar ile fareler (APC, p53, Msh2) yanı sıra, fareler genotoksik ajanlar (azoxymethane [AOM], 1,2-dimetilhidrazin [DMH]). 5 ile ön tedavi içermektedir

Kolit ilişkili kanser için bir model olarak AOM ile DSS kombinasyonu, tekrarlanabilirlik, kudret, düşük fiyat ve kullanım kolaylığı için popülerlik kazanmıştır. Bunlar ortak bir mekanizmaya sahip olsa da, AOM DMH daha çözelti daha kuvvetli ve stabil olduğu tespit edilmiştir. Diğer modellerde tümör gelişme genellikle gerektirir iken birkaç ay, AOM ile enjekte ve sonradan DSS ile tedavi edilen farelerde bir yeterli tümörler gelişirnin 7-10 hafta kadar az. 6, 7 Son olarak, AOM ve DSS belirli bir tümörojenik suşu ile melezlenmesi herhangi bir genetik arka fareler (Transgenik, vs nakavt) ile tatbik edilebilmektedir. Burada, biz 10 haftalık dönemde DSS üç yedi günlük döngüleri takip AOM tek bir enjeksiyon kullanan farelerde inflamasyon odaklı kolonik tümörogenez için bir protokol göstermektedir. Bu model yakın insan CAC meydana benzeyen histolojik ve moleküler değişiklikler tümör uyarıcı ve bu hastalıkta karsinojeneze ve kemoprevensiyonu çalışması için son derece değerli bir model sunar. 8

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1. Kolit ile ilişkili Kanser İndüksiyon

  1. Seks kafesleri ve deney ve kontrol grupları için kullanılacak yaştaki 6-8 haftalık farelere kenara koyun. Fare tek kuyruk işaretleri veya kulak klipleri ile etiketli olabilir.
  2. 0. günde, kayıt baz ağırlıkları ve 10 AOM çalışma çözeltisi mg / kg (dH2O içinde 10 mg / ml stok solüsyonundan seyreltilmiştir izotonik salin içinde 1 mg / ml, -20 ° C de tutulur) ile her bir fare intraperitoneal (ip) enjekte . Deneyimlere dayanarak, bu doz 7-14 mg / kg ve / arasında ayarlanabilir veya erken denemede tekrar edilebilir.

Dikkat: AOM bir uçucu genotoksik ajan ve ekteki MSDS göre dikkatli bir şekilde ele alınmalıdır. Sulandırma, kimyasal bir davlumbaz hazırlanan buz üzerinde muhafaza ve kuruma özgü protokoller sonrasında atılmalıdır.

  1. 0.22 mikron selüloz asetat ile f (2,5 g/100 ml) distile su ve geçişte DSS çözüm% 2.5 olunvakum tarafından ilter. Bu doz fare zorlanma ve ortamına bağlı olarak 1-3,5% arasında ayarlanabilir. 1 hafta kadar için hazırlandıktan sonra, DSS çözümü buzdolabında muhafaza edilebilir.
  2. On günde 7, içme suyu olarak farelere tedarik DSS çözüm. Yaklaşık 250 ml / kafes yeni DSS 5 fare / kafes bir süre için verilmektedir her zaman gerekli olacaktır, ancak, bunlar sadece tahmindir ve hayvan tesisinde kullanılan su şişeleri türüne bağlı olarak değişiklik gösterecektir.
  3. Yedi gün boyunca DSS sürekli bir kaynağı sağlamak için, DSS çözüm bu dönemde temiz şişeler üç kez (2-3 gün) değiştirilmesi gerekir. Bazı araştırmacılar pozlama bir tedbir olarak yeni bir çözüm ile değiştirmeden önce tüketilen DSS miktarını ölçmek.
  4. 14. günde, iki hafta için geri standart içme suyuna kafeslere geçiş.
  5. Tekrar adım (1.4) - (1.6) gün 28 ve 49 üzerinde DSS bir ikinci ve üçüncü çevrimi sağlamaktır. Bir DSS "döngüsü" içme suyu DSS bir hafta oluşurDüzenli (otoklav) su 2 hafta izledi.

2. Klinik Değerlendirme Kolit ve Tümör progresyonu

  1. Fare tartılır / haftada 2-3 kez uyulmalıdır. Bazal yüzde ağırlık kaybını kolit şiddetinin bir vekil ölçüsü olarak kullanılır. Rektal kanama, ishal veya prolapsusu Düzenli değerlendirmeler çeşitli skorlama sistemlerine göre deneysel hedeflerine bağlı olarak yapılmış ve rapor edilebilir. 9, 10
  2. Ishal ve rektal kanama 2-3 gün ile birlikte% 10 kadar bir kilo kaybı DSS (günlük gözlem hemen bu post-DSS dönemde faydalı olabilir) tam bir döngü izleyen bir hafta içinde beklenebilir.

Bazı fareler kurtarmaz olasıdır; kendi ağırlığının% 20'den fazla kaybetme farelerin hayatta kalmak için daha az olasıdır ve erken ötenazi gerektirebilir. 0.5 tek bir IP enjeksiyon - Böyle farelerde 1.0 ml serum fizyolojik flui düzelterek doğru yararlı bir destekleyici tedbir olabilir d hacmi ishal nedeniyle kaybetti.

3. Mürin Endoskopi (İsteğe bağlı)

  1. DSS ikinci ya da üçüncü döngü sonrasında Endoskop önce kurban in vivo tümör büyümesini teyit etmek için yapılabilir. AOM / DSS modelinde tümör üretiminde oldukça güvenilir olduğu için, bu genelde bir adım gerekli değildir. Bu fare tümörleri bozmaya potansiyeline sahip olarak sadece birkaç fare, bu yöntem kullanılarak değerlendirilmelidir. 11.
  2. Inhale veya enjektabl sedasyon ile fare uyuştur.
  3. Fare uyuşturulduktan sonra, kuyruk ve göğüs bandı ile düz bir tahta için fareyi sabitleyin.
  4. Fare rektum yavaşça intralüminal görünümü iyileştirmek ve fekal içeriği kaldırmak için şişirmek ve sulanmasında tuzlu kullanarak içine fare endoskop ilerletin. (Endoskopi de tuzlu bir alternatif ve bu tekniği gibi hava insüflasyonu kullanılarak yapılabilir unutmayın tümörün gelişmiş görselleştirme sunabilir. 12)
e "> 4. Fare Kurban ve Kolon Hasat

  1. Günde 70, her AOM / DSS tedavi fare birden kolon tümörlerinde liman ve değerlendirme için hazır olmalıdır. Büyük tümörler istendiğinde bu tarihten haftalar veya aylar gecikebilir. (Unutmayın ki, prolabe ciddi rektal ile farelerin kurumsal hayvan bakımı komiteleri başı olarak hayvanların aşırı rahatsızlık önlemek için erken ötenazi gerekebilir.)
  2. Otopsi öncesinde, bireysel izofluran ve servikal dislokasyon (veya diğer kurumsal onaylı yöntem) ile fareler ötenazi. Nihai ağırlık ve diğer ölçümleri şu anda yapılabilir.
  3. Bir kesme tahtası üzerinde maruz olan ventral tarafı fare yatırın. Kolon çıkarma sırasında karın içeriğinin karışmasını tüyleri önlemek için% 70 etanol ile karın örtün.
  4. Karın orta hat kavramak ve periton açığa küçük bir kesi yapmak için forseps kullanın.
  5. Kostal margi boyunca karın her tarafında bu kesi uzatınn.
  6. Kolon anorektal kavşağına kadar hasat edilebilir böylece pelvis kesmek için makas kullanın. DSS kolit yaralanma distal rektum büyük olduğunu ve buna, bu büyük tümör gelişme bölgesi olduğu için bu önemlidir.
  7. Böyle mezenterik lenf düğümleri gibi ek dokular da şu anda hasat edilebilir.

5. Makroskopik Analiz Kolon hazırlanması

  1. 5 ml'lik bir şınngaya bağlanmış bir 18G iğne kullanılarak gavaj, buz gibi soğuk fizyolojik yönde sıvı çıkar ki salin (PBS) gibi fosfat-tamponlu kolon ile yıkayın. Kolon dokusundan RNA veya protein bazlı analiz için kullanılacaksa, önceden soğutulmuş işi tepsiler kullanılarak soğuk muhafaza edilebilir.
  2. Soğuk tepsiye onun mezenter ve boya boyunca uzunlamasına kızarmış kolon açın. Tümörler kolon karanlık bir yüzeye yerleştirildiğinde daha kolaylıkla görülebilmektedir. Alternatif olarak,% 1 Alsiyan mavisi boya t vurgulamak için uygulanabilirumors. Bir cetvel veya dijital kumpas ile tümörün boyutunu ve sayısını değerlendirin.
  3. Tümör ve komşu normal doku küçük bölümlerini histolojik değerlendirme için kalan kolon kısmını bırakarak, RNA, protein, veya immünohistokimyasal (İHK) yöntemlerle gelecek analizi için bu noktada eksize edilebilir.

Derhal adım 5.2 izleyerek brüt kolon örneklerinin Dijital fotoğrafçılık yukarıda açıklandığı gibi iki nokta üst üste önemli bölümlerini analiz diğer formları için eksize, özellikle tümör yükünü hassas analizi için yararlı olabilir. Tümör yük (%) gibi ImageJ gibi serbest yazılım kullanarak tümör alanı / toplam kolon alanı olarak hesaplanır.

6. Histolojik Değerlendirme Kolon hazırlanması

  1. Şırınga veya parmak ile soğuk tepsi üzerinde kalan kolon% 10 formalin uygulayın. Dokusu bu şekilde en az 30 saniye düzeltmek için izin fiksasyon havza aktarımı sağlıyor. Formalin olun rezidüel wip olduğunued off öncesinde aynı tepsi üzerinde yeni açılan kolon boyama.
  2. % 10 formalin ile dolu bir leğene kolonların aktarın ve kenarlarından aşağı pin.
  3. Fiksasyon 3 saat sonra,% 70 etanol için kolonlar aktarın. Kolonlar süresiz% 70 etanol içinde muhafaza edilebilir.
  4. Kolon (rektum / distal, orta, proksimal) Üç boyuna kesitlerde% 2 agar stabilize ve parafine gömme için sunulabilir. Proksimal kolon ve kolon / rektum distal her fare için düzgün bir şekilde odaklı olduğundan emin olunuz.
  5. Displazi, crypt hasarı ve enflamasyon önce yayınlanmış protokolleri doğrultusunda deneyimli bir birey tarafından açıklanan ve değerlendirilmesi mümkün olabilir. Deneyci erken displastik olayları algılayabilecek ilgi ise 10, 13-15 Fare gün 70 öncesinde kurban edilebilir.

7. Temsilcisi Sonuçlar

Burada tarif AOM / DSS modeli araştırmacı güvenilir farelerde kolon tümörleri oluşturmasına olanak sağlar.Bu modelde Tümör büyüme direkt olarak ilişkili enflamatuar proses tarafından etkilenir. Kolit şiddeti diyare / hematokezya Zayıflama ve varlığı (Şekil 2) takip ederek klinik olarak izlenmelidir. Hastalık aktivitesi bu belirtileri DSS kaldırıldıktan sonra DSS kürün 5 ile ve dört veya daha fazla gün için başlamak eğilimindedir. Nadiren, önemli bir rektal tümör yükü olan farelerin rektal prolapsus gelişebilir. Ikinci veya üçüncü DSS döngüsü ishal kalıcı hale gelebilir sonra. Genellikle tümör öncesinde DSS üçüncü aşama (Şekil 3) murin kolonoskopi ile mevcut ve tanımlanabilir. Ek zaman ve hasat zamanı (Şekil 4), daha büyük tümörlerde DSS sonuçları üçüncü bir ders. Leke Topikal olarak uygulanan Alsiyan mavisi kullanarak tümör (Şekil 5) vurgulamak için kullanılır. Kolon tümörlerinin Fotoğraf kantitatif tümör üretim ve boyutunu karşılaştırmak için kullanılabilir tümör ölçümler yaratmaya yardımcı olacak,Deney grupları arasında (Şekil 6). Sabit ve parafin kolon örneklerinin ardından histolojik veya immünohistokimyasal boyanma kullanımı (Şekil 7 ve 8) ile değerlendirilebilir.

Şekil 1
Şekil 1. AOM ve DSS yönetiminin şematik. AOM (10 mg / kg) 0. günde enjekte edilir. İkinci hafta (günde 7) başında,% 2.5 DSS çözümü kendi içme suyu farelere uygulanır. DSS Yedi gün boyunca otoklava su, iki hafta ile takip edilir. DSS ek bir iki kür feda öncesinde uygulanır.

Şekil 2,
AOM ve DSS yönetimi sırasında başlangıca göre Şekil 2. Fare ağırlığı. Hafta, fareler los her DSS döngü sonrasında unutmayın vücut ağırlığının e% 5-10. Bu deneyde Kilo kaybı kolit şiddeti için vekil marker olduğunu.

Şekil 3
Şekil 3. AOM / DSS tedavi günde 50 murin endoskopi yoluyla distal kolonda tümör görüntüleme. Normal kolon göre distal kolon lümeni engelleyen çoklu polipoid kitle (b, c) (a) not edin.

Şekil 4,
Şekil 4. Boyuna tümörlerin brüt görünümünü gösteren fare kolon açıldı. Kolon / rektum (sol üst resim) distal yüksek tümör yükü ve küçük bir tümör büyüme ile proksimal kolonda (sağ üst resim) karakteristik rugated doku unutmayın. Distal kolon görünümü kadar yakın bir farklı boyutlarda (aşağıda) çok sayıda tümörler gösterir.

ove_content "fo: keep-together.within-page =" always "> Şekil 5,
Alcian blue uygulama tarafından vurgulanan Şekil 5. Tümörler leke. Boya kolon ve normal doku hem de her bir tümör sınırları vurgular kullanıldığını not edin. Bu tür boyama cetvel veya dijital ölçüm ile tümör alanlarının hassas ölçümü yararlı olabilir.

Şekil 6
Şekil 6. AOM / DSS ile tedavi fare başına tümörlerin ortalama sayısı Temsilcisi dağılımı. Tümörlerin çoğu distal kolon içinde yer alan not edin ve boyutunu <2 mm 'dir.

Şekil 8,
Şekil 7. Parafin (yukarıda) kaset kolon boyuna kesitlerH & E izleyerek slayt d (aşağıda) leke. O artık Alcian leke mavi H & E boyama ile karışmaz unutmayın. Büyük tümör slayt görüntüsü (işaretli) döndürülür. Belirtme "distal", "orta" ve "çekum ve anüs arasında üçte tüm kolon kesit proksimalinde" sonucudur.

Şekil 8,
Şekil 8. Distal kolonda AOM / DSS yönetiminin kaynaklanan bir tümörün Temsilcisi histolojisi. H & E, BrdU, ve (Üst panel) 50X ve 400X de β-katenin boyalı kesitler (Alt panel) sırasıyla kolon insan adenokarsinoma benzer displastik değişiklikler göstermektedir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Hızlı ve etkili modeller insan kolit ile ilişkili kanser AOM ve DSS ile farelerin tedavisi. Kolit ile ilişkili kanserlerin katkıda bulunan faktörleri kalıtsal ilişkin Hipotezler kolayca genetiğiyle oynanmış farelerin ile ele alınabilir. 13. Alternatif 16, kolit ilişkili kanser farmakolojik hedefler etkisi wild-tip fareler kullanılarak incelenebilir.

Bu model son derece inflamasyon ortamda kolon tümör gelişimini çalışmaya ilgilenenler tarafından değerli iken, sınırlamalar var. Bu modelde farelerde görülen hastalığın ölçüde ölçüde fare zorlanma ve barınma koşulları (kafes, beslenme, mikrobiyota, vb) bağlı olarak değişebilir. Suzuki ve ark. al Balb / c fareleri (tümör insidansı ve çokluk azalan sırayla) / 129 yalnız DSS ve AOM içeren C57BL/6N, C3H/HeN ve DBA/2N fareler. 17. Deneyleri takip AOM / DSS, en duyarlı olduğu bildirilmiştir Sv fareler bir mod tahmin ederimC57/BL6J fareler 18, 19 ile benzer kombine tedaviye cevap hızı,. Böylece, pilot deneyler mevcut tesisler ve kaynaklara bağlı olarak en etkili doz protokolü belirlemek için gerekli olabilir. Kolon AOM / DSS tümörler histolojik insan kolorektal kanserler benzer olsa da, nadiren metastaz sergilerler. Bir moleküler seviyede, β-katenin, COX-2 ve iNOS, fakat p53 değişiklikler bildirilmiştir. 20 Kanneganti ve ark. ark. ilgilenenler için CAC indüksiyonu için alternatif modellerin ayrıntılı bir bakış sağlar. 5

Sonuçların tekrarlanabilirliği artırmak için, farklı genetik geçmişleri (örneğin WT ve fareler üzerinden genine özgül vuruş gibi) 3-4 hafta önce deneme başlangıç ​​için belirli bir patojen free (SPF) tesis içinde bir arada kafeste bu fareler öneririz; bu fareler, özellikle önemli yeni bir ticari yetiştiriciliği tesisi teslim ediliyor. Herhangi bir yaş ve cinsiyet uyumlu farelerin kullanılabilir rağmen, we tüm dişi fareler ile en tutarlı sonuçlar gözlemledik. AOM stok solüsyonları Bir yıldan daha eski ise kullanılır, ve bu çözümleri birden donma-çözülme döngüleri önlemek için önemli olmamalı. Kolit şiddeti de DSS kaynağı olarak kullanılan fare besleme türü tarafından etkilenebilir; bu faktörler deneyler arasında tutarlı tutulmalıdır. , Dolayısıyla soğutma ve her idarenin başında taze DSS hazırlarken bu komplikasyonu önlemek olacaktır; Biz bulaşma düşündüren uzun süre (> 4 gün) için fare kafeslerde kalan DSS şişelerde bulanıklık gözlemledik. Birkaç tümörleri geliştirmek veya farelerin erken Neufert et ölürsen. ark. kendi AOM / DSS protokol özeti giderme tavsiye mükemmel bir tablo sunmaktadır. 6

Kolit ilişkili kanser gelişimi için AOM / DSS teknik hakim sonra, bu fareler, çeşitli farklı ek araştırmalar gerçekleştirilebilir. 21 aday ekspresyonugenlerin çıkarılan RNA kantitatif PCR ile kolon tümör vs tümörsüz bölümlerde incelenebilir. DSS kendisini bu sürece müdahale Çünkü, biz amplifikasyon öncesi poli-A saflaştırma öneririz. Kolon 22 bölümleri western blot protein ekspresyonu için çalışılması gereken dondurulmuş flaş olabilir. Kolit ile ilişkili kanser Araştırmacılar hücre çoğalmasının görsel işaretleri ilginizi çekebilir. Bu amaca yönelik olarak, AOM / DSS tedavi edilen farelerde bromodeoxyuridine (BrdU) kurban önce 90 dakika ile enjekte edilebilir; tümör ve tümör-serbest bölümler içinde her ikisi de büyük epitel proliferasyonu ile kolon içinde de bu etiketli çekirdekler belgelerin alanlar için immünohistokimyasal. 23

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Çıkar çatışması ilan etti.

Acknowledgments

Bu çalışma DK089016 ve L30 RR030244 (MAC), CA153036 (AS) ve P30-DK52574 (Washington Üniversitesi Sindirim Hastalıkları Araştırma Core) tarafından finanse edildi. AIT Howard Hughes Tıp Enstitüsü Tıbbi Araştırma Eğitim Görevlisi oldu.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
C57BL/6J Mice Jackson Laboratory 000664
Azoxymethane (AOM) Sigma Aldrich A5486-100MG Stock solution: dilute to 10 mg/ml in distilled water to be kept at -20 °C as 0.5 - 1 ml aliquots.
Working solution: dilute stock to 1 mg/ml in isotonic (0.9%) saline
Dextran Sulfate Sodium (DSS) TdB Consultancy DB001 MW 40 kDa (36-50 kDa preparations from other sources are acceptable; The same lot should be used for a single experiment)6
Coloview miniendoscopic system Karl Storz Multiple See Becker et al. for detailed explanation of equipment and setup.11
TPP Rapid FILTERMAX 500 ml Bottle-Filter, 0.22 μm PES Midwest Scientific TP99500 Any standard tissue culture filter is acceptable
Ethyl Alcohol 200 Proof ASC/USP Pharmaco-AAPER (or other) 11ACS200 Dilute to 70% in distilled water
Isoflurane, USP Butler Animal Health Supply 4029405 Place mouse in glass jar with gauze or a small cloth soaked in anesthetic
18G Straight Gavage Needle Braintree Scientific N-008
Phosphate Buffered Saline (PBS) Sigma Aldrich P5493 Dilute to 1X (0.01 M) in distilled water
Cold Tray (Tissue Tek II Cold Plate) Fisher Scientific NC9491941 Store at -20 °C
ImageJ Software NIH (free download) http://rsbweb.nih.gov/ij/
Formaldehyde (37%) Fisher Scientific F79-500 Dilute to 10% in PBS
BD Bacto Agar Fisher Scientific DF0140-01-0 Use hotplate to create 2% solution in distilled water
Miltex Eye Dressing Forceps MedPlus Inc. 18-780
Miltex Eye Scissors MedPlus Inc. 18-1430 Curved points prevent damage to colon during opening.
Alcian Blue 8GX (powder) Sigma Aldrich A5268 Add 1 g powder to 100 ml 3% acetic acid (3 ml glacial acetic acid + 97 ml distilled water)
1 mL Tuberculin syringe with attached 26 G x 3/8 in intradermal bevel needle BD 305946 For injection of AOM

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Ekbom, A. Ulcerative colitis and colorectal cancer. A population-based study. N. Engl. J. Med. 323, 1228-1233 (1990).
  2. Terzic, J. Inflammation and colon cancer. Gastroenterology. 138, 2101-2114 (2010).
  3. Ullman, T. A., Itzkowitz, S. H. Intestinal inflammation and cancer. Gastroenterology. 140, 1807-1816 (2011).
  4. Okayasu, I. Dysplasia and carcinoma development in a repeated dextran sulfate sodium-induced colitis model. J. Gastroenterol. Hepatol. 17, 1078-1083 (2002).
  5. Kanneganti, M., Mino-Kenudson, M., Mizoguchi, E. Animal models of colitis-associated carcinogenesis. J. Biomed. Biotechnol. 342637, (2011).
  6. Neufert, C., Becker, C., Neurath, M. F. An inducible mouse model of colon carcinogenesis for the analysis of sporadic and inflammation-driven tumor progression. Nat. Protoc. 2, 1998-2004 (2007).
  7. Tanaka, T. A novel inflammation-related mouse colon carcinogenesis model induced by azoxymethane and dextran sodium sulfate. Cancer Sci. 94, 965-973 (2003).
  8. De Robertis, M. The AOM/DSS murine model for the study of colon carcinogenesis: From pathways to diagnosis and therapy studies. J. Carcinog. 10, 9 (2011).
  9. Wirtz, S. Chemically induced mouse models of intestinal inflammation. Nat. Protoc. 2, 541-546 (2007).
  10. Cooper, H. S. Clinicopathologic study of dextran sulfate sodium experimental murine colitis. Lab Invest. 69, 238-249 (1993).
  11. Becker, C., Fantini, M. C., Neurath, M. F. High resolution colonoscopy in live mice. Nat. Protoc. 1, 2900-2904 (2006).
  12. Becker, C., Fantini, M. C., Wirtz, S., Nikolaev, A., Kiesslich, R., Lehr, H. A., Galle, P. R., Neurath, M. F. In vivo imaging of colitis and colon cancer development in mice using high resolution chromoendoscopy. Gut. 54, 950-954 (2005).
  13. Shaker, A. Epimorphin deletion protects mice from inflammation-induced colon carcinogenesis and alters stem cell niche myofibroblast secretion. J. Clin. Invest. 120, 2081-2093 (2010).
  14. Boivin, G. P. Pathology of mouse models of intestinal cancer: consensus report and recommendations. Gastroenterology. 124, 762-777 (2003).
  15. Cooper, H. S. Dysplasia and cancer in the dextran sulfate sodium mouse colitis model. Relevance to colitis-associated neoplasia in the human: a study of histopathology, B-catenin and p53 expression and the role of inflammation. Carcinogenesis. 21, 757-768 (2000).
  16. Yoshida, Y. The forkhead box M1 transcription factor contributes to the development and growth of mouse colorectal cancer. Gastroenterology. 132, 1420-1431 (2007).
  17. Suzuki, R. Strain differences in the susceptibility to azoxymethane and dextran sodium sulfate-induced colon carcinogenesis in mice. Carcinogenesis. 27, 162-169 (2006).
  18. Mahler, M. Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis. Am. J. Physiol. 274, 544-551 (1998).
  19. Nambiar, P. R. Preliminary analysis of azoxymethane induced colon tumors in inbred mice commonly used as transgenic/knockout progenitors. Int. J. Oncol. 22, 145-150 (2003).
  20. Tanaka, T. Colorectal carcinogenesis: Review of human and experimental animal studies. J Carcinog. 8, (2009).
  21. Ciorba, M. A. Induction of IDO-1 by immunostimulatory DNA limits severity of experimental colitis. J. Immunol. 184, 3907-3916 (2010).
  22. Kerr, T. A. Dextran sodium sulfate inhibition of real-time polymerase chain reaction amplification: A poly-A purification solution. Inflamm. Bowel Dis. 18, 344-348 (2012).
  23. Tang, Y. is required for resection-induced changes in apoptosis, proliferation, and members of the extrinsic cell death pathways. Gastroenterology. 126, 220-230 (2004).
Azoxymethane (AOM) ve Dekstran Sülfat Sodyum (DSS) ile Modelleme Kolit-İlişkili Kanser
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Thaker, A. I., Shaker, A., Rao, M. S., Ciorba, M. A. Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane (AOM) and Dextran Sulfate Sodium (DSS). J. Vis. Exp. (67), e4100, doi:10.3791/4100 (2012).More

Thaker, A. I., Shaker, A., Rao, M. S., Ciorba, M. A. Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane (AOM) and Dextran Sulfate Sodium (DSS). J. Vis. Exp. (67), e4100, doi:10.3791/4100 (2012).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter