Fibroblasts מחולים שנשאו מוטציות בגני פרקינסון גורמי מחלות לייצג נגיש<em> Vivo לשעבר</em> מודל ללמוד פנוטיפים מחלות נלוות. הדמית תא חייה נותנת ההזדמנות ללמוד פרמטרים מורפולוגיים ופונקציונליים בתאים חיים. כאן אנו מתארים את ההכנה של fibroblasts אדם והניטור הבא של פנוטיפים המיטוכונדריה.
המחלה (PD) פרקינסון היא הפרעת תנועה השכיחה ביותר השנייה ומשפיעה על 1% מאנשים מעל גיל 60 1. בגלל הזדקנות היא גרם הסיכון החשוב ביותר, במקרים של פרקינסון יגדילו בעשרות השנים הבאות 2. בא לקיפול החלבונים פתולוגי ומסלולי פירוק חלבונים פגומים, שינויי התפקוד והמורפולוגיה המיטוכונדריה היו מצביעים כסימן היכר נוסף של ניוון מוחיה בפ"ד 3-11.
לאחר שנים של מחקר בתאי סרטן עכבריים ואנושיים כמו גם במודלים חוץ גופייה לנתח מסלולים מולקולריים של מחלת הפרקינסון, השימוש בfibroblasts אדם מחולים ובקרות מתאימות כמודלי vivo לשעבר הפך לכלי מחקר יקר, אם אזהרות פוטנציאליות יובאו בחשבון. מלבד הנציחו דגמים, תאים מלאכותיים למדי, fibroblasts העיקרי מחולים שנשאו מוטציות מחלה הקשורים ככל הנראה משקף תכונות פתולוגיים חשובות of המחלות האנושיות.
כאן אנו משרטטים את ההליך של לקיחת ביופסיות עור, פיברובלסטים culturing אדם ושימוש בפרוטוקולים מפורטים לטכניקות מיקרוסקופיות חיוניות להגדרת פנוטיפים המיטוכונדריה. אלה שמשו כדי לחקור תכונות שונות הקשורות לפ"ד שרלוונטיים לתפקוד ודינמיקה של המיטוכונדריה. Vivo לשעבר, המיטוכונדריה יכולה להיות מנותחת במונחים של תפקידם, המורפולוגיה, colocalization עם lysosomes (האברונים משפילים המיטוכונדריה מתפקדת) והשפלה דרך מסלול lysosomal . פנוטיפים אלה הם רלוונטיים ביותר לזיהוי הסימנים המוקדמים של מחלת הפרקינסון ועלולים להקדים את הסימפטומים מוטוריים קליניים בנישאי מחלה גנטית אנושיים. לפיכך, מבחנים שהוצגו כאן יכולים להיות מנוצלים ככלים חשובים לזהות מאפיינים פתולוגיים של ניוון מוחיה, ולעזור להגדיר אסטרטגיות טיפוליות חדשות בפרקינסון.
fibroblasts עור מטופל כמודלי vivo לשעבר מייצג כלי חשוב לאפיין פגמים גנטיים למחלה נלווית. בנוסף, fibroblasts עור הנגזר נגיש בקלות וניתן להרחיב על culturing. לכן, תאים ראשוניים המתקבלים מחולים שנשאו מוטציות גנטיות הקשורים פ"ד עדיפים על השימוש בשורות תאים סרטניות כפי שהם מכילים ל…
The authors have nothing to disclose.
עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מקרן תיסן (10.11.2.153 לר.ק.), המועצה למחקר הגרמניה (DFG, KR2119/3-2 וKR2119/8-1 לר.ק.), המשרד הפדרלי לחינוך ולמחקר (BMBF , NGFNplus; 01GS08134 לר.ק.) ועל ידי מלגת דוקטורט מHertie קרן הצדקה [לLFB]. אנו מודים קרולין Obermaier וג'וליה סטרמאייר על תמיכתם בזמן צילומי וידאו.
Name of reagent | Company | Catalogue no. |
Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 medium | Invitrogen | 52400-025 |
RPMI 1640 medium, no Phenol Red | Invitrogen | 11835-063 |
Dulbecco’s Phosphate-Buffered Saline (DPBS) | Invitrogen | 14190-094 |
Fibroblast growth factor 2 (FGF2) | PeproTech | 100-18B |
AccuMax (detachment solution) | PAA | L11-008 |
Lab-TekTMII chambered coverglasses | Nalge Nunc International | 115382 |
Tetramethylrodamine ethyl ester (TMRE) | Invitrogen | T-669 |
Mitotracker Green FM | Invitrogen | M-7514 |
Mitotracker CM-H2XRos | Invitrogen | M-7513 |
Lyostracker Red DND-99 | Invitrogen | L-7528 |
Hoechst 33342 | Invitrogen | H-3570 |
Table 1. Specific reagents and equipment.