Фибробласты от пациентов, несущих мутации в болезнетворные гены Паркинсона представляет собой легко доступны<em> Бывших естественных условиях</em> Модель для изучения болезней связанных фенотипов. Изображений живых клеток дает возможность изучить морфологические и функциональные показатели в живых клетках. Здесь мы опишем подготовки человеческих фибробластов и последующего контроля митохондриальной фенотипов.
Болезнь Паркинсона (БП) является вторым наиболее распространенным нарушением движения и влияет на 1% людей в возрасте старше 60 1. Поскольку старение является наиболее важным фактором риска, случаи PD увеличится в течение следующего десятилетия 2. Рядом с патологическим складывающиеся белка и нарушение путей деградации белков, изменения функции митохондрий и морфологии были отмечены как дальнейшее признак нейродегенерации в PD 3-11.
После многих лет исследований в мышиных и человеческих раковых клеток, как в пробирке моделей, чтобы анализировать молекулярных путей, болезни Паркинсона, использование человеческих фибробластов у пациентов и соответствующие меры контроля для бывших моделей естественных стал ценным инструментом исследования, если потенциальный предостережения считаются. Кроме увековечена, а искусственные модели ячейки, первичные фибробласты от пациентов проведение болезни мутации, связанные, очевидно, отражают важные патологические особенности оF заболевания человека.
Здесь мы разграничить процедуру принятия биопсии кожи, культивирование фибробластов человека и с помощью подробных протоколов для основных микроскопических методов для определения митохондриальной фенотипов. Они были использованы для изучения различных особенностей, связанных с PD, которые относятся к митохондриальной функции и динамика. EX VIVO, митохондрии могут быть проанализированы с точки зрения их функции, морфологии, колокализации с лизосом (органеллы, унижающие дисфункциональные митохондрии) и деградации через лизосомальных пути . Эти фенотипы являются крайне актуальными для выявления ранних признаков PD и может предшествовать клинические симптомы двигатель в человеческих болезней носителей гена. Таким образом, тесты, представленные здесь может быть использован как ценный инструмент для выявления патологических особенностей нейродегенерации и поможет определить новые терапевтические стратегии в PD.
Фибробласты кожи пациента, как бывший моделей естественных условиях представляют собой важный инструмент для описания болезней связанных с ними генетических дефектов. Кроме того, кожа полученных фибробласты легко доступны и могут быть расширены при культивировании. Таким ?…
The authors have nothing to disclose.
Эта работа была поддержана грантами Фонда Фрица Тиссена (10.11.2.153 в РК), немецкий исследовательский совет (ДФГ, KR2119/3-2 и KR2119/8-1 в РК), Федеральное министерство образования и научных исследований (BMBF , NGFNplus; 01GS08134 в РК) и докторскую стипендию от благотворительного фонда Hertie [в LFB]. Мы благодарим Каролин Obermaier и Юлия Westermeier за их поддержку во время видеосъемки.
Name of reagent | Company | Catalogue no. |
Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 medium | Invitrogen | 52400-025 |
RPMI 1640 medium, no Phenol Red | Invitrogen | 11835-063 |
Dulbecco’s Phosphate-Buffered Saline (DPBS) | Invitrogen | 14190-094 |
Fibroblast growth factor 2 (FGF2) | PeproTech | 100-18B |
AccuMax (detachment solution) | PAA | L11-008 |
Lab-TekTMII chambered coverglasses | Nalge Nunc International | 115382 |
Tetramethylrodamine ethyl ester (TMRE) | Invitrogen | T-669 |
Mitotracker Green FM | Invitrogen | M-7514 |
Mitotracker CM-H2XRos | Invitrogen | M-7513 |
Lyostracker Red DND-99 | Invitrogen | L-7528 |
Hoechst 33342 | Invitrogen | H-3570 |
Table 1. Specific reagents and equipment.