Summary
تفاصيل المقال بروتوكول لمواقع محددة ترنسفكأيشن من مخلوط تسلسل سيرنا في ثقافة خلايا الثدييات تمسكا باستخدام مجموعة ومسرى مكروي (MEA).
Abstract
حققت اكتشاف المسار رني في حقيقيات النوى والتطور اللاحق للعملاء رني، مثل سيرنا وshRNA، وهي طريقة فعالة جدا لإسكات جينات معينة 1-8 لعلم الجينوم الوظيفي والعلاج. ومن التحديات الرئيسية المشاركة في الدراسات القائمة على رني هو تسليم من وكلاء رني إلى الخلايا المستهدفة. التقنيات التقليدية التسليم غير الفيروسية، مثل الصعق الكهربائي ومعظم أساليب ترنسفكأيشن الكيميائية غالبا ما تفتقر إلى المراقبة الضرورية المكانية على التسليم وتحمل الكفاءة ترنسفكأيشن الفقراء 9-12. وقد أدت التطورات الحديثة في طرائق نقل المواد الكيميائية مثل الدهون الموجبة، والبوليمرات الموجبة والجسيمات النانوية في تعزيز الكفاءة ترنسفكأيشن غاية 13. ومع ذلك، هذه التقنيات لا تزال دون توفر السيطرة المكانية دقيقة على التسليم التي يمكن أن المنمنمة الفئات استفادة هائلة التكنولوجيات الفائقة الإنتاجية والدراسات خلية واحدة من خلايا والتحقيق خلايا التفاعلات.
NT "مكنت> التطورات التكنولوجية الحديثة في إيصال الجينات عالية الإنتاجية ترنسفكأيشن من الخلايا الملتصقة 14-23، أغلبية التي تستخدم الصعق الكهربائي الميكروسكيل. الصعق الكهربائي و يقدم الميكروسكيل دقيقة المكانية والزمانية السيطرة على تسليم (إلى الخلايا واحدة) وتبين أنه لتحقيق الكفاءة العالية 19، 24-26. بالإضافة إلى ذلك، النهج القائم الصعق الكهربائي و لا تحتاج إلى فترة طويلة من الحضانة (عادة 4 ساعات) مع المجمعات سيرنا وDNA عند الضرورة في الطرق الكيميائية ومقرها ترنسفكأيشن يؤدي إلى الدخول المباشر من سيرنا عارية وDNA لا يمكن أن يتحقق في جزيئات الخلية السيتوبلازم. ونتيجة لذلك التعبير الجيني في وقت مبكر من ست ساعات بعد ترنسفكأيشن 27. مختبرنا أظهرت في السابق استخدام صفائف مسرى مكروي (MEA) لمواقع محددة في ترنسفكأيشن تمسكا الثقافات خلايا الثدييات 17-19. في النهج القائم MEA، ويتحقق تسليم حمولة الوراثية عبر electroporati الصغيرة النطاق المترجمةعلى من الخلايا. تطبيق من نبض الكهربائية لأقطاب مختارة يولد المجال الكهربائي المحلي الذي يؤدي إلى الصعق الكهربائي من الخلايا الموجودة في المنطقة من الأقطاب الإلكترونية المبرمجة. مراقبة مستقلة من الأقطاب الكهربائية الدقيقة يوفر السيطرة المكانية والزمانية على ترنسفكأيشن وتمكن أيضا تجارب متعددة ترنسفكأيشن القائمة التي سيتم تنفيذها على نفس الثقافة زيادة الإنتاجية والحد من ثقافة التجريبية إلى ثقافة التنوع.نحن هنا وصف الإعداد التجريبية وبروتوكول لترنسفكأيشن من استهداف خلايا هيلا ملتصقة مع سيرنا الموسومة fluorescently تسلسل باستخدام الصعق الكهربائي و مخلوط. ويمكن أيضا نفس البروتوكول استخدامها لترنسفكأيشن من ناقلات البلازميد. بالإضافة إلى ذلك، يمكن للبروتوكول الموصوفة هنا مدد بسهولة إلى مجموعة متنوعة من خطوط خلايا الثدييات مع تعديلات طفيفة. توافر التجارية الاتفاقات البيئية المتعددة الأطراف مع كل من القطب أنماط محددة مسبقا والعرف جعل هذا الأسلوب للوصول رس مختبرات معظم البحوث الأساسية مع خلية المعدات الثقافة.
Protocol
1. MEA إعداد
- يمكن إما للاستخدام في الاتفاقات البيئية المتعددة الأطراف التجارب الصعق الكهربائي و تكون ملفقة باستخدام معيار تقنية ضوئيه كما هو موضح سابقا 18 أو شراؤها مباشرة من البائعين من الشركات المصنعة مثل أنظمة MEA قناة موضوع (http:/www.multichannelsystems.com/) وألفا MED العلمية المحدودة، ( http://www.MED64.com) . ملفقة والاتفاقات البيئية المتعددة الأطراف المستخدمة في التجارب لدينا في المنزل في منشأة غرفة نظيفة في جامعة ولاية أريزونا، والتي تدار من قبل مركز بحوث الإلكترونيات الحالة الصلبة (CSSER). كان الاتفاقات البيئية المتعددة الأطراف المستخدمة في تجاربنا أقطاب أكسيد الإنديوم 32 القصدير في قدرها 8 بنسبة 4 مجموعة مع أحجام الإطارات 50-200 ميكرون الكهربائي داخل الزجاج 1 سم القطر الداخلي أيضا. الزجاج والمستعبدين جيدا على استخدام polydimethylsiloxane MEA (PDMS).
- تعقيم MEA في الأوتوكلاف قبل خلية قeeding. وسائل أخرى للتعقيم مثل تمرغ في الايثانول 70٪، ويمكن أيضا علاج الأشعة فوق البنفسجية ومعالجة المياه الساخنة كما هو موضح في أماكن أخرى يمكن استخدامها طالما أنها لا تعرض للخطر سلامة MEA.
- نقل MEA تعقيمها إلى الصفحي هود تدفق ووضعه في معيار البوليسترين طبق بتري معقمة. قبل البذر الخلايا على وMEA، تعقيم تدفق الصفحي هود تحول على ضوء الأشعة فوق البنفسجية لمدة 20 دقيقة. إذا كان MEA حساسة للضوء الأشعة فوق البنفسجية تغطية طبق بتري تحتوي على رقائق الألومنيوم مع MEA عقيمة في حين أن التدفق تحت غطاء محرك السيارة الإضاءة فوق البنفسجية.
2. بذر خلايا في الشرق الأوسط وأفريقيا
- خلايا الحصاد من خط الخلية تشغيل خلايا الثدييات تمسكا باستخدام التربسين / EDTA ورفعها إلى تركيز من 100-200 خلية / ميكرولتر في 1 مل سائل الإعلام خلية للطلاء. في تجاربنا نجحنا في زراعة NIH 3T3 خط الخلية الليفية، هيلا خط الخلية الأولية والخلايا العصبية القشرية وقرن آمون في MEA.
- 2 ساعة بعد البذر ونقل الخلايا طبق بتري مع MEA من الحاضنة إلى غطاء محرك السيارة وتدفق الصفحي إضافة بلطف ميكرولتر من قبل وسائل الإعلام 400-500 درجة حرارة (37 ° C) إلى MEA جيدا. تحقق تحت المجهر للتأكد من أن الخلايا لا تزال تعلق وتنتشر بالتساوي على سطح MEA. نقل مرة أخرى إلى MEA الحاضنة. الانتظار ساعة 2 قبل فترة إضافة وسائل الإعلام تضمن ما يكفي من الوقت للخلايا الالتزام مع سطح MEA. يمكن إضافة وسائل الإعلام خلية قريبا جدا بعد البذر الخلايا يغسل الخلايا. إذا الخلايا لا يلتزمون بشكل جيد على MEA، يمكن علاج سطحه مع عوامل مثل مرفق الخلية aspolylysine، فبرونيكتين، وlaminin لتحسين التصاق الخلية. في تجاربنا الخلية هيلا تعاملنا مع السطح عادة MEA مع fibronectiن (10 ميكروغرام / مل) لمدة 1-2 ساعة.
- 8-12 ساعة بعد البذر الخلايا، نفذ 1-2 يغسل مع PBS لإزالة أي خلايا ميتة. يمكن استبدال كل خلية متوسطة 24-48 ساعة حسب الحاجة. في تجربة نموذجية، وعادة ما تكون الخلايا جاهزة للساعة 24-48 ترنسفكأيشن بعد البذر. للحفاظ على التناسق في كفاءة الصعق الكهربائي فمن المستحسن الانتظار حتى الثقافة لا يقل عن 80٪ متموجة قبل الصعق الكهربائي.
3. مواقع محددة ترنسفكأيشن من سيرنا
- إعداد محلول حمض النووي. لترنسفكأيشن سيرنا، إعداد سيرنا 1-2 ميكرومتر في حل الصعق الكهربائي العازلة الجليد الباردة الصعق الكهربائي للوصول الى الحجم النهائي من 200-400 ميكرولتر. في هذه المقالة نحن لشرح الفيديو ترنسفكأيشن من خلايا هيلا مع 488 اليكسا تسلسل مخلوط مترافق من سيرنا.
- نقل MEA مع الخلايا من الحاضنة إلى الصفحي هود العقيمة التدفق. إزالة وسائل الإعلام خلية من MEA وإجراء غسيل مع PBS. بعد ذلك، أضف 200-400 ميكرولتر من أنام الباردة سيرنا ميكرومتر 1 حل الصعق الكهربائي إلى البئر.
- تطبيق نبضات كهربائية انوديك مربع لالأقطاب المستهدفة (راجع الخطوة 4 لتحديد أفضل المعايير للنبض الكهربائية). في تجاربنا استخدمنا الأدوات الواقعية 2414A مولد الموجي لتوليد النبضات الكهربائية والمزدوجة المضمنة-حزمة (DIP) 16 دبوس مشبك لاجراء اتصالات مع منصات السندات MEA. يمكن توصيل المولد الموجي لمقطع DIP عن طريق لوحة الدوائر المطبوعة لتقديم demultiplexor الانتقائية من الأقطاب الكهربائية على حدة. لالإلكترود المرجعي، ضع الكاثود الصلب في وسائل الإعلام الخلية. وفي الوقت نفسه تخفيض الإلكترود المرجعي الصلب في وسائل الإعلام من المهم للغاية للتأكد من أنه لا يجعل الاتصال مع سطح MEA. عند الاتصال، فإنه يمكن أن يسبب الضرر للخلايا وMEA و. فمن المستحسن لخفض القطب إشارة إلى موقف من 1 مم فوق الخلايا. يمكن وضعها A التبادل مع ارتفاع 1 مم في البئر للمساعدة في وضع المرجعerence القطب. نهج بديل لاستخدام القطب الكهربائي مرجع خارجي هو استخدام الأقطاب الكهربائية المجاورة والأنود الكاثود أزواج.
- مباشرة بعد تطبيق نبضات كهربائية إلى الأقطاب الكهربائية على استهداف MEA، نقل مرة أخرى إلى MEA الحاضنة. بعد فترة حضانة المرض من 5 دقائق، استبدل بلطف 75٪ من المخزن المؤقت مع الصعق الكهربائي قبل تحسنت (37 ° C) وسائل الاعلام الخلية. في وقت لاحق، ويمكن القيام الفلورسنت التصوير للتأكد من تسليم سيرنا الموسومة fluorescently إلى الخلايا.
4. الصعق الكهربائي معلمة الأمثل
- لتحديد الأمثل المعلمات نبض الكهربائية ل، الصعق الكهربائي و الصعق الكهربائي و التجارب التصميم لمجموعة من القيم من السعة النبض، النبض مدة، وعدد النبضات. في تجربتنا مع خلايا هيلا، لاحظنا أن الجهد نبض واحد من السعة في الفترة من 3 إلى 9 V V، ومدة من 1 إلى 10 ميللي ثانية ميللي ثانية لحجم الإلكترود من 100 ميكرومتر أدى إلى الصعق الكهربائي و ناجحة مع ميلنيمال زنزانة الموت. فمن توصيتنا أن تكون متنوعة معلمة واحدة في وقت واحد والبعض الآخر يتم الاحتفاظ المستمر. لquantitate كفاءة الصعق الكهربائي لكل من المعلمات نبض، ونحن نستخدم يوديد propidium (PI)، صبغة impermeant الخلية التي بقع المواد النووية، ومقرها حي منهجية الفحص، كما هو موضح في الخطوات 4،2-4،5.
- تأسيس ثقافة الخلية على MEA اتباع الإرشادات الموضحة في الخطوات 1 و 2.
- قبل الصعق الكهربائي و إعداد ميكرولتر من 30 ميكروغرام 300-500 / مل حل PI في المخزن المؤقت الجليد الباردة الصعق الكهربائي و 400 ميكرولتر من 4 ميكرومتر calcien AM الحل في برنامج تلفزيوني.
- نقل MEA من الحاضنة إلى الصفحي هود التدفق. إزالة وسائل الإعلام خلية من MEA وإجراء غسيل مع PBS. بعد ذلك، أضف 300-500 ميكرولتر من العازلة الصعق الكهربائي الجليد الباردة مع PI.
- تطبيق نبضات كهربائية مع السعة ومدة النبض المطلوب لالأقطاب المستهدفة (والمعدات المستخدمة في تجاربنا لتوليد الكهرباء وتطبيقيوصف نبض tric إلى MEA في الخطوة 3.3). لالإلكترود المرجعي خفض إما القطب الصلب في المخزن المؤقت الصعق الكهربائي في MEA جيدا أو استخدام القطب الكهربائي المجاور كمرجع. يمكن من خلال تطبيق انتقائي نبضات من سعة متفاوتة أو فترات مختلفة لأقطاب إجراء تجارب متعددة على نفس الجهاز. على سبيل المثال، على 32 MEA القطب، يمكن إجراء التجارب عن طريق تقسيم 8 الأقطاب 32 في 8 مجموعات، تتكون كل منها من 4 الأقطاب الكهربائية. ويمكن بعد كل مجموعة من المجموعات 8 ينبغي أن يحفزه نبضة الجهد مستطيل واحد لمدة 5 ميللي ثانية مع سعة متفاوتة في 3 V-6 مجموعة V V بزيادات 0.5 و مجموعة واحدة يمكن استخدامها كمجموعة تحكم.
- مباشرة بعد تطبيق نبضات الجهد لنقل MEA الحاضنة لمدة 5 دقائق. بعد ذلك، قم بإزالة بلطف 75٪ من المخزن المؤقت الصعق الكهربائي من MEA جيدا واستبدالها مع وسائل الاعلام الخلية الدافئ. نقل مرة أخرى إلى MEA الحاضنة.
- بعد فترة حضانة من 2-4 ساعةاستبدال وسائل الإعلام خلية في MEA جيدا مع 300-500 ميكرولتر من 4 ميكرومتر AM Calcein الحل في برنامج تلفزيوني. نقل مرة أخرى إلى MEA حاضنة لمدة 30 دقيقة.
- بعد حضانة الخلايا مع Calcein AM، يستعاض عن Calcein AM الحل في الشرق الأوسط وأفريقيا بشكل جيد مع PBS يغسل بعد سنتين مع PBS. الحصول على الصور من الفلورسنت الخلايا باستخدام المجهر الضوئي مع المرشحات للمع PI (الإثارة / الانبعاث - 535 نانومتر nm/617) وCalcein AM (الإثارة / الانبعاث - 490 نانومتر nm/520). امتصاص PI، وذلك بسبب الصعق الكهربائي، ليتألق يسبب الخلايا الحمراء ويسبب AM Calcein الخلايا التي هي على قيد الحياة ليتألق الخضراء. ثلاثة سيناريوهات المحتملة التي يمكن ملاحظتها هي 1) خلية electroporated وعلى قيد الحياة (وسوف يتألق كل من الأحمر والأخضر)، 2) الخلايا على قيد الحياة ولكن ليس electroporated (سوف يتألق الخضراء فقط) و 3) والخلايا الميتة بسبب الصعق الكهربائي (يتألق الأحمر فقط) . تم حساب بقاء الخلية كنسبة مئوية من إجمالي عدد الخلايا على قيد الحياة على القطب وممثل المؤسسة الصعق الكهربائيتم حساب iciency كنسبة مئوية من إجمالي عدد خلايا محملة PI / سيرنا.
5. ممثل النتائج
ويظهر الشكل 1 تحميل مواقع محددة من الخلايا الحله مع PI. ويمكن ملاحظة أن الخلايا فقط على القطب إثبات وجود امتصاص PI (الشكل 1B). أجريت مقايسة الحية واستخدمت الصعق الكهربائي و آخر لتقييم الجدوى من الخلايا (الشكل 1A). كفاءة الصعق الكهربائي وبقاء الخلية للمثال هو مبين في الشكل 1 هي 81.8٪ و٪ 96.1 على التوالي. ويمكن تحقيق عالية الكفاءة وبقاء الخلية الصعق الكهربائي عن طريق تحسين المعلمات نبض الصعق الكهربائي. ويرد في مواقع محددة ترنسفكأيشن من الخلايا الحله مع سيرنا الموسومة fluorescently لنبض الصعق الكهربائي الأمثل (8 V، 1 ميللي ثانية) في الشكل 2. تم العثور على كفاءة الصعق الكهربائي لسيرنا في 8 مللي ثانية V 1، ليكون 74،4٪ 16.0 ± وتم العثور على بقاء الخلية لتكون 87.9 ± 8.4٪ (كل البيانات ممثلا يعني ± الانحراف المعياري، N = 5).
الشكل 1. بمواقع محددة تسليم PI في خلايا هيلا على القطب ميكرومتر 200 (6 V، 5 ميللي ثانية). A) إجراء فحص Calcien الحية (2) تستند الصعق الكهربائي و آخر ساعة. يشار إلى الخلايا على قيد الحياة من قبل مضان أخضر. B) الأحمر مضان يدل على امتصاص من قبل خلايا PI على القطب. C) صورة فرضه من A B. والأسهم البيضاء تشير إلى الخلايا التي هي وelectroporated على قيد الحياة. الأسهم السوداء تشير إلى الخلايا التي قد لقوا حتفهم. دائرة الابيض في B، C ويشير مخطط القطب.
الشكل 2. ترنسفكأيشن من خلايا هيلا مع الموسومة fluorescently scrambl(ه) من تسلسل سيرنا. A) صورة خلايا هيلا على القطب ميكرومتر 100 transfected مع سيرنا 488 اليكسا الموسومة (8 V، 1 ميللي ثانية). B) صورة نوى الخلايا ملطخة دابي. الدائرة البيضاء يصادف حافة القطب.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
في هذه المقالة نحن الفيديو شرح استخدام MEA لمواقع محددة من خلايا هيلا ترنسفكأيشن مع سيرنا مخلوط تسلسل. واحدة من مزايا هذه التكنولوجيا هو انطباقها على خطوط مختلفة من الخلايا بما في ذلك خطوط الخلايا الأولية. وقد أظهرت مختبرنا سابقا استخدام هذه التكنولوجيا لمواقع محددة ترنسفكأيشن من الخلايا العصبية قرن آمون الثقافة الأولية من الفئران اليوم E18 القديمة وNIH-3T3 الخلايا مع تسلسل سيرنا مخلوط وGFP البلازميد 18 و 19. لقد كان لدينا أيضا النجاح في تقديم سيرنا ضد هدف وظيفي في خلايا هيلا الذاتية (بيانات غير منشورة). A MEA النموذجية المتاحة تجاريا متوافق مع التصوير الضوئي (المجهر تستقيم)، مما يتيح التقييم الكمي لتأثير الوظيفية لإسكات الجينات، وذلك باستخدام التقنيات المناعية الفلورسنت. بالإضافة إلى ذلك، يمكن استخدام microelectrodes في الشرق الأوسط وأفريقيا لرصد النشاط الكهربائي للخلايا، مثل الخلايا العصبية الأولية، واستجابة لاضطراب وراثي. الالطبيعة الفريدة للتمكن MEA تجارب متعددة في وقت واحد على ثقافة خلية واحدة، وبالتالي زيادة الإنتاجية التجريبية. حاليا وجود قيود كبيرة مع النظام القائم MEA هو كمية كبيرة من سيرنا ترنسفكأيشن اللازمة ل(400 ميكرولتر من 1μM سيرنا)، والذي مرتفعة مقارنة التقليدية القائمة على النهج ترنسفكأيشن الكيميائية وبالتالي يحد من فعالية تكلفة النظام. يمكن التغلب على ذلك جزئيا من خلال دمج مع نظام mircofluidics MEA مقرها لتقليل الحجم الكلي للحل الصعق الكهربائي سيرنا إلى أقل من microliters قليلة. بالإضافة إلى ذلك، يمكن للتمكين تسليم المسلسل على microfluidics من جزيئات سيرنا مختلفة؛ مما يعزز من الإنتاجية من التكنولوجيا القائمة على MEA. وبدلا من ذلك، يمكن رصد جزيئات سيرنا على microelectrodes قبل البذر الخلية ومن ثم يمكن تقاس جزيئات سيرنا إلى الخلايا بواسطة الصعق الكهربائي عكس 15 و 23. مواصلة تطوير هذه التكنولوجيا توفر الرواية عالية رhroughput وفعالة ومنخفضة التكلفة لطريقة التلاعب دراسات الجينات.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Cell media: Advanced MEM L-Glutamine 200 mM Penicillin/Streptomycin Fetal bovine serum |
Gibco/Invitrogen Himedia Laboratories/VWR Lonza group Ltd. Gibco/Invitrogen |
12492-013 95057-448 09-757F 16000-044 |
Cell media composition: 2% FBS, 2%L-glutamine and 2% Pennstrep in Advance MEM |
| Trypsin EDTA | Mediatech, Inc. | 25-053-CL | |
| PBS | Mediatech, Inc. | 21-040-CV | |
| Alexa 488 and rhodamine tagged scrambled sequence siRNA | Qiagen, Inc. | 1027292 | |
| Electroporation buffer | Biorad Laboratories | 165-2677 | |
| Waveform generator | Pragmatic | 2414A | Any waveform/pulse generator that can deliver the desired pulses can be used. |
References
- Fire, A. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Nature. 391, 806-811 (1998).
- Caplen, N. J., Parrish, S., Imani, F., Fire, A., Morgan, R. A. Specific inhibition of gene expression by small double-stranded RNAs in invertebrate and vertebrate systems. Proceedings of the National Academy of Sciences. 98, 9742 (2001).
- Elbashir, S. M. Duplexes of 21-nucleotide RNAs mediate RNA interference in cultured mammalian cells. Nature. 411, 494-498 (2001).
- Brummelkamp, T. R., Bernards, R., Agami, R. A system for stable expression of short interfering RNAs in mammalian cells. Science. 296, 550 (2002).
- Lee, N. S. Expression of small interfering RNAs targeted against HIV-1 rev transcripts in human cells. Nat. Biotechnol. 20, 500-505 (2002).
- Miyagishi, M., Taira, K. U6 promoter-driven siRNAs with four uridine 3' overhangs efficiently suppress targeted gene expression in mammalian cells. Nat. Biotechnol. 20, 497-500 (2002).
- Paul, C. P., Good, P. D., Winer, I., Engelke, D. R. Effective expression of small interfering RNA in human cells. Nat. Biotechnol. 20, 505-508 (2002).
- Xia, H., Mao, Q., Paulson, H. L., Davidson, B. L. siRNA-mediated gene silencing in vitro and in vivo. Nat. Biotechnol. 20, 1006-1010 (2002).
- Chu, G., Hayakawa, H., Berg, P. Electroporation for the efficient transfection of mammalian cells with DNA. Nucleic Acids Res. 15, 1311 (1987).
- Felgner, P. L. Lipofection: a highly efficient, lipid-mediated DNA-transfection procedure. Proceedings of the National Academy of Sciences. 84, 7413 (1987).
- Raptis, L. H. applications of electroporation of adherent cells in situ, on a partly conductive slide. Mol. Biotechnol. 4, 129-138 (1995).
- Jordan, M., Schallhorn, A., Wurm, F. M. Transfecting mammalian cells: optimization of critical parameters affecting calcium-phosphate precipitate formation. Nucleic Acids Res. 24, 596-601 (1996).
- Gao, Y., Liu, X. L., Li, X. R. Research progress on siRNA delivery with nonviral carriers. International Journal of Nanomedicine. 6, 1017 (2011).
- Ziauddin, J., Sabatini, D. M. Microarrays of cells expressing defined cDNAs. Nature. 411, 107-110 (2001).
- Yamauchi, F., Kato, K., Iwata, H. Spatially and temporally controlled gene transfer by electroporation into adherent cells on plasmid DNA-loaded electrodes. Nucleic Acids Res. 32, e187 (2004).
- Yamauchi, F., Kato, K., Iwata, H. Layer-by-Layer Assembly of Poly (ethyleneimine) and Plasmid DNA onto Transparent Indium? Tin Oxide Electrodes for Temporally and Spatially Specific Gene Transfer. Langmuir. 21, 8360-8367 (2005).
- Jain, T., Muthuswamy, J. Microsystem for transfection of exogenous molecules with spatio-temporal control into adherent cells. Biosensors and Bioelectronics. 22, 863-870 (2007).
- Jain, T., Muthuswamy, J. Bio-chip for spatially controlled transfection of nucleic acid payloads into cells in a culture. Lab on a Chip. 7, 1004-1011 (2007).
- Jain, T., Muthuswamy, J. Microelectrode array (MEA) platform for targeted neuronal transfection and recording. Biomedical Engineering, IEEE Transactions on. 55, 827-832 (2008).
- Jain, T., McBride, R., Head, S., Saez, E. Highly parallel introduction of nucleic acids into mammalian cells grown in microwell arrays. Lab on a Chip. 9, 3557-3566 (2009).
- Huang, H. An efficient and high-throughput electroporation microchip applicable for siRNA delivery. Lab Chip. 11, 163-172 (2010).
- Efficient and high-throughput electroporation chips. Li, Z., Wei, Z., Li, X., Du, Q., Liang, Z. Solid-State Sensors, Actuators and Microsystems Conference (TRANSDUCERS), 2011 16th International, , IEEE. (2011).
- Jain, T., Papas, A., Jadhav, A., McBride, R., Saez, E. In situ electroporation of surface-bound siRNAs in microwell arrays. Lab Chip. 12, 939-947 (2012).
- Haas, K., Sin, W. C., Javaherian, A., Li, Z., Cline, H. T. Single-Cell Electroporationfor Gene Transfer In Vivo. Neuron. 29, 583-591 (2001).
- Akaneya, Y., Jiang, B., Tsumoto, T. RNAi-induced gene silencing by local electroporation in targeting brain region. J. Neurophysiol. 93, 594 (2005).
- Lee, W. G., Demirci, U., Khademhosseini, A. Microscale electroporation: challenges and perspectives for clinical applications. Integr. Biol. 1, 242-251 (2009).
- Boukany, P. E. Nanochannel electroporation delivers precise amounts of biomolecules into living cells. Nature Nanotechnology. 6, 747-754 (2011).
