Summary
Føtal og perinatal død er et fælles træk, når man studerer genetiske ændringer, der påvirker hjerte-udvikling. Højfrekvent ultralydsscanning har forbedret 2-D opløsning og kan give gode oplysninger om tidlig hjerte-udvikling og er en ideel metode til at detektere påvirkning af hjertets struktur og funktion forud for dødsfaldet.
Abstract
Transgene mus viser abnormiteter i hjertets udvikling og funktion udgør et effektivt redskab til forståelsen af de molekylære mekanismer, der ligger både normal hjerte-kar-funktion og patofysiologiske grundlag af menneskets hjertekarsygdomme. Føtal og perinatal død er et fælles træk, når man studerer genetiske ændringer, der påvirker hjerte-udvikling 1-3. For at undersøge den rolle, genetiske eller farmakologisk ændringer i den tidlige udvikling af hjertefunktionen er ultralydsscanning af den levende foster blevet et vigtigt redskab til tidlig opdagelse af abnormiteter og langsgående opfølgning. Noninvasiv ultralydsscanning er en ideel metode til påvisning og undersøgelse af medfødte misdannelser og indvirkningen på hjertefunktionen forud for dødsfaldet 4. Det giver mulighed for tidlig opdagelse af abnormiteter i den levende foster og progression af sygdommen kan følges i livmoderen med longitudinelle studier 5,6.Indtil for nylig hyppigt billeddannelse af føtale mus hjerter involveret invasive metoder. Fosteret skulle ofres for at udføre magnetisk resonans mikroskopi og elektronmikroskopi eller kirurgisk leveres til gennemlysning mikroskopi. En anvendelse af højfrekvente prober med konventionel 2-D og pulserende bølge Doppler imaging har vist sig at give målinger af hjertets sammentrækning og hjerte satser under fosterudviklingen med databaser af normale udviklingsmæssige ændringer nu tilgængelige 6-10. M-mode scanning endvidere vigtige funktionelle data, selv om de korrekte billeddiagnostiske fly er ofte vanskeligt at opnå. Højfrekvent ultralydsscanning af fosteret er forbedret 2-D opløsning og kan give gode oplysninger om den tidlige udvikling af hjerte-strukturer 11.
Protocol
1. Forberedelse Mus for Imaging
- Forud for den billeddannende undersøgelse bedøve dæmningen (2-3% isofluran) i induktionskammer. Fjern dyret fra induktionskammer og anbringes straks snuden i en næsekegle forbundet med anæstesi systemet. Fjern skind fra midten brysthøjde til underekstremiteterne (Se figur 1) med hårklippere. Fjern den resterende kropsbehåring med hårfjerningsmiddel. Hårfjerningsmiddel kan også anvendes uden hårklippere og skal omhyggeligt skylles af huden efter brug for at forhindre irritation.
- Placer bedøvede mus i en rygliggende position på en varmepude med integrerede EKG leder for at opretholde legemstemperatur (figur 1). Anvendelse elektrodegel de fire poter og tape dem til EKG-elektroderne.
- Opnåelse af en steady-state sedation niveau under hele proceduren (1,0% til 1,5% isofluran blandet med 100% O2). Niveauet af anæstesi kan tilpasses maintain et mål hjertefrekvens på 450 ± 50 slag pr minut (bpm). Der bør lægges stor vægt på at minimere dosis af isofluran og varigheden af sedation til mindre end en time.
- Sæt forsigtigt en rektal sonde (efter smøring) at overvåge kropstemperaturen via varmepude. Det er vigtigt at opretholde kroppens temperatur inden for et snævert interval (37,0 ° C ± 0,5 ° C). Kontrolleret anæstetikum og konstant kropstemperatur er afgørende for hæmodynamisk stabilitet moderen og fostre.
Tekniske overvejelser
Købet af føtale ekkokardiogrammer kan være udfordrende. Data fra disse undersøgelser kan forveksles på grund af den reaktion på stress fra både dæmningen og fostret. Ideelt set bør dyret temperaturen opretholdes under anvendelse af en opvarmet imaging platform, cirkulerende opvarmning pad, varmelamper eller autoregulated varmetæpper. Desuden er rutinemæssig brug af den varme akustisk gel anbefales. Alskønt den fremherskende bekymring over kropstemperatur styring er at undgå hypotermi, bør udviklingen af hypertermi være problematiske. En ukontrolleret opvarmning, såsom en simpel varmepude eller tilstedeværelsen af tæt halogen belysning kan resultere i hurtig og farlig stigning af kropstemperaturen. Da betydelige kropstemperatur udsving i begge retninger placerer dyret i fare, bør alle forsøge at opretholde normale kropstemperatur.
The sonographer erhverver billeder skal undgå et for stort tryk på hulrummet med transduceren, idet vægten af transduceren alene kan resultere i ændret hjertefunktion. Varigheden af billedoptagelse skal også holdes på et minimum (ideelt under en time) for at reducere de fysiologiske og hæmodynamiske ændringer som følge af forlænget sedation. Derudover skal tid og eksponering for isofluran for hver undersøgelse holdes på et minimum på grund af potentielle teratogene effekter af isofluran 12.
2. Identifikation af embryoner
- Imaging startes ved hjælp af moderens blære som et vartegn med fostre på venstre og højre Uterushornene mærket som L1, 2,3, et cetera (venstre side) og R1, 2,3, et cetera (højre side) (se figur 1C). Notation af fosteret placering er nyttig til hentning af prøver efter billeddannelse.
- Prøver beliggende for dybt i maven bliver scannet for at dokumentere deres tilstedeværelse, men er udelukket fra dataanalyse på grund af dårlig opløsning. Evnen til at scanne tilstødende embryoner kan hjælpe med at spore fostre (figur 2A).
- Scan fly modificeres ved at ændre orienteringen af musen med hensyn til scanning plane. Billeder opnås i to ortogonale planer for hvert foster (figur 2). Der gøres en indsats for at opnå synspunkter tilnærmelse af tværgående, frontal, eller sagittale planer, men sometimes er begrænset til skrå planer ved positionen af livmoderen i maven. Drejning af aftastningshovedet vil også åbne mulighed for ændring af orientering uden at flytte dæmningen.
Tekniske overvejelser
Mens håndholdt betjening af sonden er muligt i voksen mus ekkokardiografi, håndholdt operation i føtal billeddannelse i ikke anbefales. Identifikation af fostre kompliceres af den variable beskaffenhed af uterin placering, snoning, og bevægelse. For at minimere problemer med fosteret lokalisering, stationære transducer brug (figur 1) med minimal bevægelse ud over det horisontale plan af dæmningen er afgørende.
3. Evaluering af struktur og funktion
- Scanning B-mode billeder anvendes til at identificere basale hjerte-strukturer såsom forkamre, interventricular septum, ventrikulære kamre, og venstre og højre udstrøm-skrifter (figur 2).
- M-mode billedets er opnået fra den korte akse visning og anvendes til at måle ventrikulær vægtykkelse og kammerdimensioner (figur 3). Hvis korrekt justering ikke er opnåelig på grund af fostrets løgn, kan målinger fra B-mode billeder anvendes til at kvantificere% fraktioneret afkortning (FS). Temporale ændringer mellem LV slutsystoliske dimension (LVESD) og LV slutdiastolisk dimension (LVEDD) i hele hjertecyklussen anvendes til beregning af shortening fraktion (FS), som følger:
% FS = [(LVEDD - LVESD) / LVEDD] x 100 - De venstre og højre ventrikler identificeres ved at scanne fra hoved til hale. Venstre og højre side skal være kommenteret. Synlige strømme genereret af ekkogen fosterblod letter nøjagtig placering af Doppler prøvevolumenet i mitral åbning. Venstreventrikulært indløb hastighed er opnået fra de mitralklapperne i apikalt fire-kammer og LV længdeakse visninger (figur 4, C). Aorta udstrømning målinger kan anvendes til at måle systolic udtømningstid (figur 4, D). Puls kan beregnes ud fra måling af en strøm cyklus til den følgende flow cyklus (figur 4, C og D). Der skal udvises omhu for at justere blodgennemstrømningen og Doppler-strålen at minimere Doppler vinkel. Værdier, der ud over en vinkel på 60 grader er unøjagtige og bør undgås.
- Scanning B-mode billeder anvendes til at identificere fælles strukturelle medfødte abnormiteter såsom ventrikelseptumdefekter (figur 5). Doppler prøvevolumen inden ventriklerne kan anvendes til at identificere strømning hen over ventrikelseptumdefekt. Yderligere parametre, der let overvåges omfatter føtal størrelse, hjertefrekvenser, strømningshastigheder, perikardiel effusion, og hydrops foetalis. Den endelige diagnose af specifikke kardiale defekter kræver yderligere evaluering af obduktion og histopatologi.
Tekniske overvejelser
Identifikation af venstre og højre chamlemmer kan være svært i føtalt hjerte imaging på grund af de tilsvarende dimensioner af ventrikulære kamre under udvikling. En strategi er at indføre højre og venstre føtal orientering i realtid ved at flytte den billeddannende platformen i det horisontale plan. Identifikation af snude, lemmer knopper, og rygsøjlen vil hjælpe med at identificere den lad / højre orientering af fosteret. Hvis det er muligt, vil sporing af udstrøm spor til buen eller visualisering af de vigtigste tvedeling af lungepulsåren lette identifikation af den venstre ventrikels udløbsgang eller højre udstrømning tarmkanalen hhv. For hvert foster undersøgt, er det vigtigt at bemærke den bestemte venstre-højre orientering på gemte billeder.
Post-imaging Animal Overvågning og pleje
Efter afslutningen af billeddannelse, er dæmningen tilbage til passende anbringelse og kontrolleres efter gældende institutionelle post-procedure protokol.Analgesi efter denne imaging procedure er ikke nødvendig. Fuld genoptagelse af normal aktivitet kan forventes inden for fem minutter.
4. Repræsentative resultater af føtalt Ekkokardiografi
Udviklingen af højfrekvente prober (over 8 MHz), har tilladt kommercielt ekkokardiografisk udstyr til at have en aksial opløsning på cirka 0,2 mm med en lateral opløsning på 0,3 mm, når billedet zoomet og erhvervet i en dybde på 1 cm. De fleste af de nyligt udviklede transducere er lineære, som har den fordel at undgå nærfelt artefakter. Høj frekvens (30-50 MHz) mekaniske prober er for nylig blevet udviklet, som er egnede til den murine bryst og puls, der tillader en aksial opløsning på omkring 50 um i en dybde på 5-12 mm. Senest har disse højfrekvente mekaniske prober tilsættes farve Doppler kapaciteter muliggør en komplet evaluering af ventrikulær og valvulær funktion og identifikation af sjagt læsioner i fosterets hjerte. Fremgangsmåderne beskrevet her udføres på en VisualSonics Vevo 770 systemet og kan anvendes på næsten alle tilsvarende systemer. Nuværende kommercielt tilgængelige ultra-høj frekvens ultralyd-systemet kan operere ved 40 Hz med maksimal billeddannelse dybde på 7-14 mm, med op til 60 mm lateral og 50 til 100 mm aksial opløsning (Vevo770, VisualSonics, Inc.). Dette skal sammenlignes med 60 Hz og 20 mm imaging dybde, med 50 til 100 mm aksial og 200-500 mm lateral opløsning med den kliniske Acuson Sequoia ultralydssystemet.
I betragtning af den lille størrelse af fosterets muse hjertet, er føtale ekkokardiografi hos mus teknisk udfordrende. I modsætning til ekkokardiografi hos voksne mus, skal sonographer bruge ikke-konventionelle ultralydsscanning planer defineret af fosterets krop akser. Snoning af livmoderen påvirker også orienteringen af fosteret og skal tages i betragtning. Derudover den iboende begrænsning i indtrængningsdybde ULTRa-højfrekvent ultralyd kan gøre det vanskeligt at afbilde alle enheder i graviditeter med et stort antal fostre.
En ultralydsscanning strategi giver mulighed for high throughput screening for medfødte kardiovaskulære og ekstrakardiale defekter 7. Ud over studiet af genetiske ændringer, kan denne teknik anvendes til screening for defekter i farmakologiske og toksikologiske undersøgelser. Denne metode kan også anvendes som et brugerværktøj til interventionelle procedurer såsom injektioner og måling af ventrikulære tryk 13.
Den ikke-invasive karakter af føtal ultralyd er fordelagtig, ikke kun fordi det tillader den kardiovaskulære funktion kan bedømmes under fysiologiske betingelser, men også fordi dette giver vigtige fænotypisk information i realtid. Longitudinal undersøgelse af embryonale hjerter, selv om det er teknisk muligt, er fortsat udfordrende for flere grunde. Seriel gennemgang af den samme fosteret og identification af samme foster ved hver eksamen er udfordrende i fravær af en tydelig strukturel defekt. Bevægelse af livmoderen og fosteret kan helt ændre retningen af prøven og dermed gøre langsgående sporing og opfølgende målinger vanskelige 14.
Selvom ekkokardiografi er en kraftfuld teknik til identifikation af hjerteabnormaliteter, den specifikke diagnose af strukturelle hjertefejl kræver yderligere detaljerede fænotypebestemmelse ved obduktion og histopatologi 15. Korrelation af genotype, og en specifik foster kræver høst fostre ved hysterotomiparametre, fortrinsvis umiddelbart efter et ekko undersøgelse og mens dæmningen stadig bedøvet for at minimere ændringer i orientering og embryo placering.
Normale værdier for kammeret dimensioner og funktion er blevet rapporteret for embryonale mus og brugere af denne teknik rådes til at gennemgå de citerede referencer for disse værdier 6-10. Assessmentaf valvulær morfologi er begrænset af billedopløsning, men ringformede dimension målinger og hastighedsmålinger gennem de store skibe er muligt selv så tidligt som ED 9,5. Må drages omsorg for at opnå en passende tilpasning til blodgennemstrømning og transduceren 10, 16.
Det skal understreges, at hjerte-dimensioner varierer efter mus stammer, køn og alder, og hurtigt skifte på forskellige embryonale tidspunkter og hjerte satser. Det er vigtigt at kontrollere, at grupper af mus parres for disse parametre. Føtal billeddannelse varierer efter musestamme så godt. For eksempel rutinemæssigt den gravide CD-1 dæmningen indeholder flere fostre sammenlignet med C57/BL6 stammen og kan således være mere vanskeligt at visualisere alle prøver. Af disse årsager, anvendelse af alder og stamme matchede kontroller for hvert eksperiment bør anvendes i stedet for referenceværdier. Desuden målinger af individuelle parametre såsom venstre ventrikel slutdiastoliske dimension og posteriorevægtykkelse kan variere i normale mus op til 25% 8.
Figur 1. Oversigt over set-up ved hjælp af VisualSonics Vevo 770-systemet. (A) VisualSonics integreret jernbanesystem med fysiologisk overvågningsenhed. (B) Musen er placeret og korrekt tilbageholdenhed på varme bord. De fire lemmer er tapede ind i EKG-elektroder. (C) Skematisk af gravide mus og layout af embryoner. Antallet af fostre i hver horn af livmoderen kan variere betydeligt ud over orienteringen af fosteret. (D) A anbragt dæmning på imaging platform med pile bemærke planerne af manipulation (X-akse og Y-akse) for at flytte dæmningen til billeddannelse. Z-aksen refererer til bevægelse af transduceren opad og nedad (som vist med pilen i panel B). B, blære, L, venstre, R, RIght.
Figur 2. Repræsentative B-mode billeder. Dette tal indeholder repræsentative B-mode billeder af embryonal dag 14,5 foster. (A) Visualisering af to tilstødende fostre. Bokse angiver placeringen af fosterets hjerte. (B) Anatomiske vartegn i et foster til at vejlede orientering. Fosterdag 14,5 hjerte i en fire kamre view (C), korte akse billede af venstre og højre ventrikler (D), højre ventrikels udløbsgang og pulmonal arterie (PA) (E), og venstre ventrikulær udløb tact (LVOT) og aorta (F).
Figur 3. Repræsentativ vurdering af den ventrikulære funktion. Dette tal indeholder repræsentativtbilleder af 2D ekkokardiografi af den lange akse billede af hjertet på fosterdag 14,5 (A), og en fire kamre view (B). (C) M-mode sporing med streger, der angiver venstre og højre ventrikel indvendig diameter på diastole (R / LVIDD) og systole (R / LVIDs) fra de fire kammer billedplan. Interventricular septum (IVS) er også visualiseres.
Figur 4. Repræsentativt Doppler vurdering. Denne figur indeholder repræsentative billeder af 2D ekkokardiografi af embryonisk dag 14,5 hjerte i en apikal fire kammer view (A). Den venstre atrium og venstre ventrikel hulrum er blevet skitseret. (B) Repræsentant placering af Pulse bølge Doppler prøvevolumen til optagelse af mitralindstrømningen. (C) mitralindstrømningen Doppler mønstre, hvorfra tidlig diastolisk velocity (betegnet "E") og atrial kontraktion (betegnet "A") hastigheder kan måles. (D) repræsentant aorta Doppler bølgeform. Aorta Doppler jet kan anvendes til at måle udtømningstid (ET). Puls (HR) kan beregnes ud fra måling af en flow-cyklus til følgende flow cyklus. Klik her for at se større figur .
Figur 5. Repræsentative påvisning af ventrikelseptumdefekt. Denne figur indeholder repræsentative B-mode billeder af embryonisk dag 14,5 hjerte i en apikal fire kammer view (A) med højre og venstre ventrikulære hulrum skitseret i (B). Se tilstedeværelsen af interventricular septum. (C) tværsnit af billedbærende hjerte farvet med hematoxylin og eosin.(D) B-mode image fosterdag 14,5 hjerte med en ventrikulær bægerblad defekt (VSD) er angivet med pilen. (E) Højre og venstre ventrikulære hulrum er skitseret med overlejrede placering af pulsbølgen Doppler prøvevolumen til optagelse af strømning på tværs af interventricular septum. (F) tværsnit farvet med hematoxylin og eosin af billedbærende hjertet efter prøven hentning. (G) overlejret placering af pulsbølgen Doppler prøvevolumen til optagelse af strømning tværs interventricular septum. (H) repræsentant Doppler sporing fra (G) viser flow fra venstre til højre hjertekammer. Klik her for at se større figur .
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Evnen til at udføre serielle målinger og til at detektere mutant fostre med kardiale defekter fremhæver nytten af ekkokardiografi til undersøgelse normale og unormale kardiovaskulære udvikling. Analyse af hjertets struktur og funktion in vivo er blevet en integreret del af beskrivelsen af genetiske og ikke-genetiske modifikationer normal føtal udvikling. Tilgængeligheden af 2D-styrede Doppler gør det muligt at overvåge puls og blodgennemstrømning mønstre, mens du får real-time billeder. Udviklingsmæssige hjertefejl såsom ventrikelseptumdefekter kan være til stede og påviselig. På trods af de højopløselige kapaciteter aktuelle billedbehandlingsenheder platforme, fortsætter købet af peak udstrømning hastigheder at være vanskeligt, da den manglende farve Doppler imaging på de fleste systemer gør det vanskeligt at tilpasse Dopplerprøvelinjen volumen med høj opløsning 2D-billeder. Desuden kan føtalt stilling i uterushornet hinderalle målinger eller producerer suboptimal billeddannelse. Den største begrænsning af ultralydsimagografi scanner dybde, der begrænser muligheden for at visualisere alle embryoer fra en enkelt dam. Det samme embryo skifter i stilling i moderens mave, hvilket komplicerer langsgående sporing af samme fosteret. Trods disse begrænsninger, kan denne ikke-invasiv teknik være uvurderlig til at overvåge den fysiologiske tilstand af embryoner i et kuld og til at opdage og overvåge disse embryoner hvor hjertefejl kan forventes.
Nye teknologier
Den VisualSonics Vevo 2100-system, den nyeste ultralydssystemet, har udfaset lineært array transducere udstyret til farve flow imaging, og dermed gøre det muligt at give farve Doppler kapaciteter selv i embryoner ved E10.5-11.5. Dette system har også speckle tracking muligheder, der kan give detaljerede regional myocardial funktion for at udvikle føtal myocardium 17. Speckle sporingbilleddannelse er baseret på væv deformation og giver et andet mål for myokardiets kontraktilitet og regional myocardial funktion. Det grundlæggende princip i speckle sporing er, at ultralyd refleksioner skaber et uregelmæssigt speckle mønster, der er unik for hver myocardial segment. Disse segmenter kan derefter spores gennem hele hjertecyklus og anvendes til beregning af væv forskydning, regional hastighed, belastning, og tøjningshastighed langs radiale, langsgående og rundtgående flader af hjertet. Beyond ultralyd, er nye modaliteter såsom optisk kohærens tomografi (OCT), mikro-CT, og mikro-MRI, der anvendes på føtal billeddannelse og vil sandsynligvis tilbyde avanceret høj opløsning billeddannelse gratis til høj opløsning ekkokardiografi 17.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Ingen interessekonflikter erklæret.
Acknowledgments
GHK er støttet af NIH / NHLBI K08-HL098565 og Institut for Cardiovascular Research ved University of Chicago. Alle eksperimentelle beskrevne metoder er godkendt af Institutional Animal Care og brug Udvalg på University of Chicago.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Vevo 770 Imaging System (Toronto, Canada) | VisualSonics | ||
| MHz transducer | RMV707B15-45 | ||
| Isoflurane Vaporizer | Tec 3 | ||
| Isoflurane | 2-chloro-2-(difluoromethoxy)-1,1,1-trifluoro-ethane |
References
- Wessels, A., Sedmera, D. Developmental anatomy of the heart: a tale of mice and man. Physiol. Genomics. 15, 165 (2003).
- Snider, P., Conway, S. J. Probing human cardiovascular congenital disease using transgenic mouse models. Prog. Mol. Biol. Transl. Sci. 100, 83 (2011).
- Clark, K. L., Yutzey, K. E., Benson, D. W. Transcription factors and congenital heart defects. Annu. Rev. Physiol. 68, 97 (2006).
- Leatherbury, L., Yu, Q., Lo, C. W. Noninvasive phenotypic analysis of cardiovascular structure and function in fetal mice using ultrasound. Birth Defects Res C Embryo Today. 69, 83 (2003).
- Spurney, C. F., Lo, C. W., Leatherbury, L. Fetal mouse imaging using echocardiography: a review of current technology. Echocardiography. 23, 891 (2006).
- Spurney, C. F., Leatherbury, L., Lo, C. W. High-frequency ultrasound database profiling growth, development, and cardiovascular function in C57BL/6J mouse fetuses. J. Am. Soc. Echocardiogr. 17, 893 (2004).
- Shen, Y., et al. Cardiovascular phenotyping of fetal mice by noninvasive high-frequency ultrasound facilitates recovery of ENU-induced mutations causing congenital cardiac and extracardiac defects. Physiol. Genomics. 24, 23 (2005).
- Yu, Q., Leatherbury, L., Tian, X., Lo, C. W. Cardiovascular assessment of fetal mice by in utero echocardiography. Ultrasound Med. Biol. 34, 741 (2008).
- Linask, K. K., Huhta, J. C. Use of Doppler echocardiography to monitor embryonic mouse heart function. Methods Mol. Biol. 135, 245 (2000).
- Hinton, R. B., et al. Mouse heart valve structure and function: echocardiographic and morphometric analyses from the fetus through the aged adult. Am. J. Physiol Heart Circ. Physiol. 294, H2480 (2008).
- Gui, Y. H., Linask, K. K., Khowsathit, P., Huhta, J. C. Doppler echocardiography of normal and abnormal embryonic mouse heart. Pediatr. Res. 40, 633 (1996).
- Purssell, E., et al. Noninvasive high-resolution ultrasound reveals structural and functional deficits in dimethadione-exposed fetal rat hearts in utero. Birth Defects Res. B Dev. Reprod. Toxicol. , (2011).
- Le, V. P., Kovacs, A., Wagenseil, J. E. Measuring Left Ventricular Pressure in Late Embryonic and Neonatal Mice. J. Vis. Exp. (60), e3756 (2012).
- Ji, R. P., Phoon, C. K. Noninvasive localization of nuclear factor of activated T cells c1-/- mouse embryos by ultrasound biomicroscopy-Doppler allows genotype-phenotype correlation. J. Am. Soc. Echocardiogr. 18, 1415 (2005).
- Kim, G. H., Samant, S. A., Earley, J. U., Svensson, E. C. Translational control of FOG-2 expression in cardiomyocytes by microRNA-130a. PLoS One. 4, e6161 (2009).
- Momoi, N., et al. Modest maternal caffeine exposure affects developing embryonic cardiovascular function and growth. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, H2248 (2008).
- Tobita, K., Liu, X., Lo, C. W. Imaging modalities to assess structural birth defects in mutant mouse models. Birth Defects Res. C Embryo Today. 90, 176 (2010).
