Utilizzando una finestra craniale per visualizzare l'arteria cerebrale media Durante endotelina-1 indotta da occlusione dell'arteria cerebrale media

Summary

Questo articolo descrive un metodo per la visualizzazione delle arterie cerebrali di ratto attraverso una finestra craniale utilizzando craniotomia temporale per visualizzare porzioni prossimale dell'arteria cerebrale media (<strong> Figura 1</strong>). Questo metodo versatile può essere combinato con varie tecniche di somministrazione di farmaci per misurare la reattività dell'arteria cerebrale<em> In vivo</em>.

Abstract

Creazione di una finestra craniale è un metodo che permette la visualizzazione diretta delle strutture sulla superficie corticale del cervello ^1-3. Questa tecnica può essere eseguita in molti luoghi sovrastanti il ​​cervello di ratto, ma è più facilmente effettuata creando una craniectomia sulle ossa facilmente accessibili frontale o parietale. Più frequentemente, abbiamo utilizzato questa tecnica in combinazione con il modello di endotelina-1 occlusione dell'arteria cerebrale media di ictus ischemico per quantificare le variazioni mezzo diametro dell'arteria cerebrale vaso che si verificano con l'iniezione di endotelina-1 nel parenchima cerebrale adiacente al prossimale MCA ^{4, 5.} Per visualizzare la porzione prossimale del MCA durante dell'endotelina -1 indotta MCAO, si usa una tecnica per creare una finestra craniale attraverso l'osso temporale sulla faccia laterale del cranio ratto (Figura 1). Arterie cerebrali può essere visualizzata sia con la dura intatto o con l'inciso dura e RetraCTED. Più comunemente, lasciamo la dura intatto durante la visualizzazione dal endotelina-1 indotta MCAO prevede la consegna del peptide vasocostrittori nel parenchima cerebrale. Questo evita la necessità di incidere la dura direttamente sulle navi visualizzati per il drug delivery. Questo protocollo descrive come creare una finestra del cranio per visualizzare le arterie cerebrali in un modo graduale, così come il modo di evitare molti dei potenziali rischi relativi a questo metodo.

Protocol

Questo protocollo è stato approvato dalla cura degli animali e del Comitato Istituzionale uso (IACUC) presso l'Università della Florida, ed è in conformità con la "Guida per la cura e l'uso di animali da laboratorio" (ottava edizione, Accademia Nazionale delle Scienze, 2011). Materiale Animali: otto settimane di età, di sesso maschile, Sprague Dawley (Charles River, Farms Wilmington, MA, USA) del peso di 250-300 g al momento dell'intervento chirurgico. </…

Representative Results

Ancora immagini prese dal video catturato che mostra la modifica del diametro dell'arteria cerebrale dopo ET-1 iniezione può essere facilmente apprezzato usando questa tecnica cranica finestra (Figura 2). In pochi minuti di ET-1 iniezione, la nave inizierà a costrizione. Alla fine le navi sarà difficile da visualizzare e il tessuto cerebrale diventa pallido. Dopo circa 20 minuti gli effetti di ET-1 diminuirà e le navi inizieranno a dilatarsi, gradualmente ritornando al diametro basale dopo circa…

Discussion

In sintesi, questa tecnica di preparazione cranica finestra è molto versatile in quanto può essere modificato per soddisfare le esigenze di molti esperimenti con piccole modifiche ^{4, 5.} Per esempio, siamo riusciti a monitorare il flusso ematico cerebrale in specifici rami MCA con laser doppler flussimetria di concentrarsi direttamente su un'arteria cerebrale visualizzata attraverso una finestra cranica (Mecca AP 2009 e il 2011). Inoltre, una preparazione simile con l'inciso dura può essere utilizza…

Materials

Name of the reagent	Company	Catalogue number	Comments (optional)
Inhalation anesthesia system	VetEquip Inc., Pleasanton, CA, USA	901806
Isoflurane anesthetic	Baxter Pharmaceutics, Deerfield, IL, USA	1001936060
Small animal stereotaxic system	David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA	900
Non-rupture ear bars, rat	David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA	957
Rat gas anesthesia head holder	David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA	1929
BAT-12 microprobe thermometer	World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA	BAT-12
T/PUMP, Thermal blanket	Gaymar Industries, Inc., Orchard Park, NY, USA	T/PUMP, TP600
Metzenbaum Scissors	World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA	501254
Iris forceps	World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA	15915
Bulldog clamp retractors	World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA	14119-G
10 μl syringe 26-gaugue	World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA	SGE010RNS
Bovie, high temperature cautery kit	World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA	500392
Rat tooth forceps 0.12	Stotz	E1811
Micromotor drill	Stoelting, Wood Dale, IL, USA	51449
0.8 mm round drill bur	Roboz Surgical Instrument Co., Inc., Gaithersburg, MD, USA	RS-6280C-1
STORZ Bonn suturing forceps	Bausch and Lomb, Inc., Rochester, NY, USA
Nylon Suture, size 3.0	Oasis, Mettawa, IL, USA	MV-663
Cotton swabs	Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA	22-029-488
Puralube eye ointment	Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA	NC0138063
Electric hair clippers	Oster, Providence, RI, USA	78005-301
ET-1 diluted to 80 μM concentration in PBS	American Peptide, Sunnyvale, CA, USA	88-1-10A
Chlorhexidine, 2%	Agrilabs, St. Joseph, MO, USA	1040, Rev. 6-06, NAC No.: 10580322
Surgical microscope	Seiler Instrument and Manufacturing, St. Louis, MO, USA	Evolution xR6
Sony Handycam	Sony, Minato, Tokyo, Japan	HDR-SR12
Fiber optic illuminator	TechniQuip Corp., Livermore, CA, USA	FO1–150
VLC media Player	(Paris, France)
Image J software	U.S. National Institutes of Health, Bethesda, MA, USA