Summary

Endotelin-1 Bağlı Orta Serebral Arter Tıkanıklığı sırasında Orta Serebral Arter görselleştirin bir Kranial Pencere kullanmak

Published: February 22, 2013
doi:

Summary

Bu makalede, orta serebral arterin proksimal bölümlerini görüntülemek için temporal kraniektomi kullanılarak kranyal pencereden sıçan serebral arterlerin görüntülenmesi için bir yöntem açıklanır (<strong> Şekil 1</strong>). Bu çok yönlü yöntem serebral arter reaktivitesi ölçmek için ilaç dağıtım çeşitli teknikleri ile kombine edilebilir<em> In vivo</em>.

Abstract

Kranyal pencere oluşturulması 1-3 beyin kortikal yüzey üzerinde doğrudan görüntüleme yapılarının sağlayan bir yöntem. Bu teknik, sıçan beyin örten çok noktadan yapılabilir, ancak, en kolay şekilde kolayca ulaşılabilir ya da ön parietal kemik üzerinde bir kraniektomi oluşturarak gerçekleştirilir. En sık, biz proksimal MCA bitişik beyin parankimi içine endotelin-1 enjeksiyonu ile meydana orta serebral arter damar çapı değişiklikleri ölçmek için iskemik inme endotelin-1 orta serebral arter oklüzyon modeli ile birlikte bu tekniği kullanmış 4, 5. Endotelin -1 indüklenen MCAO sırasında MCA proksimalinden görselleştirmek için, biz sıçan kafatası (Şekil 1) lateralinde temporal kemik yoluyla kraniyal pencere oluşturmak için bir teknik kullanır. Serebral arterlerin dura bozulmamış veya dura kazıma ve RETRA ile ya görsellenebilircted. En sık, biz beyin parankimi içine vazokonstriktör peptid teslimini içerir endotelin-1 ile indüklenen MCAO yana görselleştirme sırasında dura olduğu gibi bırakabilirsiniz. Bu ilaç teslim görüntülenmiştir damarları üzerinde doğrudan dura kesilirken ihtiyaç atlar. Bu protokol de bu yöntem ile ilgili potansiyel tuzaklar birçok önlemek için ne gibi, adım adım moda serebral arterlerin görselleştirmek için bir kraniyal pencere oluşturmak nasıl anlatacağız.

Protocol

Bu protokol Florida Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu (IACUC) tarafından onaylanmış ve uygun olduğunu "Bakım Rehberi ve Laboratuvar Hayvanlarının Kullanımı" (sekizinci baskı, Ulusal Bilimler Akademisi, 2011) oldu. Malzemeler Hayvanlar: Ameliyat sırasında 250-300 g Sekiz haftalık, erkek, Sprague Dawley sıçan (Charles River Çiftlikler, Wilmington, ABD MA). Anestezi İnhalasyon anestezi sistemi (VetEqui…

Representative Results

Hala çekilen video gösterisi alınan görüntülerin bundan sonra serebral arter çapı değişikliği ET-1 enjeksiyonu kolaylıkla bu kraniyal pencere tekniği (Şekil 2) kullanılarak takdir edilebilir. ET-1 enjeksiyonu birkaç dakika içinde, damar daralması ile başlayacak. Sonunda gemiler görselleştirmek için zor olacaktır ve beyin dokusu soluk olacak. Yaklaşık 20 dakika sonra ET-1 etkileri azalacak ve gemilerin giderek yaklaşık 45 dakika sonra bazal çap dönen, dilate başlayacaktır. …

Discussion

Bu küçük değişiklikler 4, 5 ile birçok deneylerin ihtiyaçlarını karşılamak için değiştirilebilir gibi Özetle, bu kraniyal pencere hazırlama tekniği çok yönlüdür. Örneğin, başarılı bir kraniyal pencere (Mekke AP 2009 ve 2011) ile görselleştirilmiş bir serebral arter doğrudan odaklanmak için lazer Doppler flowmetre kullanarak belirli MCA dallarında serebral kan akımı takip ettik. Buna ek olarak, dura kesik ile benzer bir hazırlama vivo vasküler reaktivite banyo i…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Bu çalışma Amerikan Kalp Derneği Büyükşehir Güneydoğu Ortaklık (09GRNT2060421), Amerikan Tıp Derneği, ve Florida Klinik ve Translational Bilim Enstitüsü Üniversitesi bağışları ile desteklenmiştir. Adam Mekke bir NIH / NINDS, NRSA predoctoral fellow (F30 NS-060335) 'dir. Robert Regenhardt Hipertansiyon Florida Multidisipliner Eğitim Programı Üniversitesi (T32 HL-083810) den predoctoral burs desteğini aldı.

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments (optional)
Inhalation anesthesia system VetEquip Inc., Pleasanton, CA, USA 901806
Isoflurane anesthetic Baxter Pharmaceutics, Deerfield, IL, USA 1001936060
Small animal stereotaxic system David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA 900
Non-rupture ear bars, rat David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA 957
Rat gas anesthesia head holder David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA 1929
BAT-12 microprobe thermometer World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA BAT-12
T/PUMP, Thermal blanket Gaymar Industries, Inc., Orchard Park, NY, USA T/PUMP, TP600
Metzenbaum Scissors World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA 501254
Iris forceps World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA 15915
Bulldog clamp retractors World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA 14119-G
10 μl syringe 26-gaugue World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA SGE010RNS
Bovie, high temperature cautery kit World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA 500392
Rat tooth forceps 0.12 Stotz E1811
Micromotor drill Stoelting, Wood Dale, IL, USA 51449
0.8 mm round drill bur Roboz Surgical Instrument Co., Inc., Gaithersburg, MD, USA RS-6280C-1
STORZ Bonn suturing forceps Bausch and Lomb, Inc., Rochester, NY, USA
Nylon Suture, size 3.0 Oasis, Mettawa, IL, USA MV-663
Cotton swabs Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA 22-029-488
Puralube eye ointment Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA NC0138063
Electric hair clippers Oster, Providence, RI, USA 78005-301
ET-1 diluted to 80 μM concentration in PBS American Peptide, Sunnyvale, CA, USA 88-1-10A
Chlorhexidine, 2% Agrilabs, St. Joseph, MO, USA 1040, Rev. 6-06, NAC No.: 10580322
Surgical microscope Seiler Instrument and Manufacturing, St. Louis, MO, USA Evolution xR6
Sony Handycam Sony, Minato, Tokyo, Japan HDR-SR12
Fiber optic illuminator TechniQuip Corp., Livermore, CA, USA FO1–150
VLC media Player (Paris, France)
Image J software U.S. National Institutes of Health, Bethesda, MA, USA

References

  1. Levasseur, J. E., Wei, E. P., Raper, A. J., Kontos, A. A., Patterson, J. L. Detailed description of a cranial window technique for acute and chronic experiments. Stroke. 6, 308-317 (1975).
  2. Baumbach, G. L., Dobrin, P. B., Hart, M. N., Heistad, D. D. Mechanics of cerebral arterioles in hypertensive rats. Circ. Res. 62, 56-64 (1988).
  3. Regrigny, O., et al. Effects of melatonin on rat pial arteriolar diameter in vivo. Br. J. Pharmacol. 127, 1666-1670 (1999).
  4. Mecca, A. P., O’Connor, T. E., Katovich, M. J., Sumners, C. Candesartan pretreatment is cerebroprotective in a rat model of endothelin-1-induced middle cerebral artery occlusion. Exp. Physiol. 94, 937-946 (2009).
  5. Mecca, A. P., et al. Cerebroprotection by angiotensin-(1-7) in endothelin-1-induced ischaemic stroke. Exp. Physiol. 96, 1084-1096 (2011).

Play Video

Cite This Article
Regenhardt, R. W., Ansari, S., Azari, H., Caldwell, K. J., Mecca, A. P. Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion. J. Vis. Exp. (72), e50015, doi:10.3791/50015 (2013).

View Video