Summary
हम एक कार्डियक तनाव परीक्षण प्रदर्शन dobutamine द्वारा प्रेरित और सामान्य चूहों में कार्डियक कैथीटेराइजेशन द्वारा निगरानी प्रोटोकॉल का वर्णन. इसके अलावा, हम अपने उच्च वसा वाले आहार प्रेरित मोटे चूहों में subclinical हृदय रोग नकाब उतारना आवेदन दिखाते हैं.
Abstract
Dobutamine एक उच्च धमनियों (2 β) में व्यक्त रिसेप्टर्स के लिए की तुलना में दिल (1 β) में व्यक्त रिसेप्टर के लिए आत्मीयता के साथ एक β एड्रीनर्जिक agonist है. जब प्रणालीबद्ध प्रशासित, यह हृदय की मांग बढ़ जाती है. इस प्रकार, dobutamine असामान्य या infarction के जोखिम पर संभावित ताल इस्कीमिक क्षेत्रों unmasks.
दिल समारोह के एक कार्डियक तनाव परीक्षण के दौरान निगरानी या तो ecocardiography या हृदय कैथीटेराइजेशन के द्वारा किया जा सकता है. बाद एक आक्रामक लेकिन अधिक सटीक और सूचनात्मक कि पूर्व तकनीक है.
दिल दर (मानव संसाधन), systolic दबाव, diastolic दबाव, अंत diastolic दबाव, अधिक से अधिक सकारात्मक दबाव: एक ही प्रयोग, निम्नलिखित hemodynamic मापदंडों की माप में कार्डियक तनाव परीक्षण dobutamine द्वारा प्रेरित और हृदय के रूप में यहाँ वर्णित पूरा कैथीटेराइजेशन द्वारा निगरानी की अनुमति देता है, (डी पी / dtmax) के विकास और अधिक से अधिक नकारात्मक प्रेसure विकास (डी पी / dt मिनट), आधारभूत शर्तों पर और dobutamine की बढ़ती खुराक के तहत.
जैसी कि उम्मीद थी, सामान्य चूहों में हम मानव संसाधन, डी पी / dt अधिकतम और डी पी / dt मिनट में एक dobutamine खुराक से संबंधित वृद्धि मनाया. इसके अलावा, उच्चतम खुराक (12 एनजी / छ / मिनट) का परीक्षण उच्च वसा वाले आहार प्रेरित मोटापे से ग्रस्त चूहों के हृदय decompensation बेपर्दा था.
Protocol
प्रोटोकॉल Facultad डे Medicina Clinica Alemana Universidad डेल Desarrollo की नीति समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था.
I. Dobutamine आसव की तैयारी
- Dobutamine के बाँझ distillated पानी की 20 मिलीलीटर में 10 मिलीग्राम भंग, 500 छ / मिलीलीटर dobutamine के क्रम में एक शेयर समाधान प्राप्त करने के लिए. -20 डिग्री सेल्सियस पर अशेष भाजक की दुकान इस समाधान के 3 महीने के लिए कम से कम इस्तेमाल किया जा सकता है.
- कमरे के तापमान पर dobutamine स्टॉक समाधान की एक अशेष भाजक पिघलना के.
- बाँझ 0.9% NaCl में dobutamine स्टॉक समाधान पतला, आदेश में dobutamine काम समाधान प्राप्त करने के लिए, एकाग्रता, जिस सूत्र का उपयोग कर की गणना है: dobutamine (छ / मिलीलीटर) = शरीर के वजन 0.2 x.
- एक 1 मिलीलीटर 29Gx1 / 2 dobutamine काम समाधान के साथ सिरिंज भरें.
- एक 20 सेमी ट्यूब पीई-10 में सिरिंज की सुई डालें.
- जलसेक पंप निर्माता के निर्देशों का पालन करने में सिरिंज समायोजित करें.
- एक कदम में रैंप जलसेक सेटप्रत्येक चरण के लिए 10 μl / मिनट की वृद्धि के साथ 6 कदम के लिए प्रारूप करने के लिए कदम.
द्वितीय. दबाव सेंसर की तैयारी
- 37 डिग्री सेल्सियस में कम से कम 15 मिनट के लिए संकेत, बाँझ पानी में डूब प्रेशर सेंसर बहाव कम से कम. लेना, अधिक से अधिक 0.5 सेमी गहरा कैथेटर नहीं क्रम में रोकने हीड्रास्टाटिक दबाव सेंसर को प्रभावित करता है कि.
- 25 और 100 mmHg इलेक्ट्रॉनिक प्रेशर सेंसर जांचना. इलेक्ट्रिक इनपुट (वाल्ट) दबाव संकेत (mmHg) बदल जाती है.
- 2 / k का नमूना दर सेट और एक 100 हर्ट्ज पर बंद कटौती के साथ कम से गुजारें फिल्टर का उपयोग करें. दबाव संकेत शून्य mmHg सेट.
- मार्क सिरे से कैथेटर 15 मिमी. परिचय बिंदु से दिल तक पहुँचने के लिए दूर इकोकार्डियोग्राफी द्वारा अनुमान लगाया गया था, बाईं ventricule में कैथेटर की उपस्थिति का पता लगाने.
III. कैथीटेराइजेशन के लिए माउस की तैयारी
- वजन C57BL / 6 नर चूहों, 30-32 सप्ताह पुरानी है.
- Intraperitoneally 60 ketamine ग्राम / किलो और 4 ग्राम / किलो 1 xylazine सुई. नोट: अन्य anesthetics उदाहरण के लिए, हो सकता है इस्तेमाल किया: 350 - 450 / छ किलो Avertin, 50 ग्राम / pentobarbital किलोग्राम या 1.5 - 2% isoflurane 2-3.
- एक बिजली के रेजर के साथ गर्दन दाढ़ी.
- Anesthetized माउस एक गर्म इज़ोटेर्माल हीटिंग थाली पर लापरवाह स्थिति में रखें. कागज टेप के साथ अपने अंगों को सुरक्षित.
- एक पैर की अंगुली चुटकी का प्रदर्शन करने के लिए पूरा बेहोश करने की क्रिया की पुष्टि.
- धीरे शरीर के तापमान पर नजर रखने के लिए एक गुदा जांच सम्मिलित. Vaselinized जांच का प्रयोग करने की सिफारिश की है.
- यदि शरीर का तापमान 37 से अलग डिग्री सेल्सियस ± 0.5 डिग्री सेल्सियस, यह हीटिंग प्लेट के माध्यम से समायोजित कर सकते हैं.
- ऑक्सीजन की आपूर्ति के पास माउस थूथन रखो.
- Stereomicroscope तहत माउस गर्दन क्षेत्र रखें.
चतुर्थ. डाटा अधिग्रहण
- LabChartPro 7 सॉफ्टवेयर, दबाव पंजीकरण के लिए एक चैनल और हृदय की दर (मानव संसाधन) के लिए एक चैनल का चयन करेंपंजीकरण. बाद के लिए, विकल्प "चक्रीय माप" और दर के रूप में स्थापना माप का चयन करें.
- 0 से 150 mmHg: दबाव चैनल के लिए बड़े पैमाने पर सीमा निर्धारित.
- 200 के लिए 600 bpm: एचआर चैनल के पैमाने पर सीमा निर्धारित.
- के लिए पंजीकरण शुरू शुरू कुंजी दबाएँ.
- दर्शाता है प्रक्रियाओं के उदाहरण के लिए प्रदर्शन, टिप्पणी डालें: संज्ञाहरण प्रशासन dobutamine जलसेक, dobutamine एकाग्रता के शुरू करने के लिए, परिवर्तन श्वास.
वी. कार्डिएक कैथीटेराइजेशन 4,5
- जबड़े के पास सही पक्ष पर एक छोटा सा चीरा प्रदर्शन. साथ कैंची त्वचा पेशी संयोजी ऊतक अलग.
- ट्रेकिआ के दाईं ओर पर एक अनुदैर्ध्य विच्छेदन (2 सेमी 1.5) प्रदर्शन. घुमावदार संदंश के साथ अलग संयोजी ऊतक, वसा, और मांसपेशियों, क्रम में ट्रेकिआ के पास सही मन्या धमनी का पर्दाफाश करने के लिए.
- पशु सही पक्ष में एक विस्तारक मन्या धमनी का पर्दाफाश रखें. स्पंदनकारीदिल से उत्पन्न दबाव धमनी की पहचान की सुविधा. कंठ का शिरा, जो गहरे लाल रंग है सही पर है.
- घुमावदार संदंश के साथ आसन्न ऊतकों से धमनी अलग करें. vagus तंत्रिका, जो एक सफेद धागे जैसा दिखता धमनी के साथ झूठ.
- / 0 6 रेशम धागा और यह "डबल" के 20 सेमी टुकड़ा काट.
- बाएं से दाएं की धमनी के तहत "डबल" धागे से गुजरती हैं. धागा कट, आदेश में अलग समाप्त होता है को प्राप्त करने के लिए.
- धमनी के नीचे एक तीसरा मुद्दा देखें (10 सेमी) गुजरती हैं.
- सिर करने के लिए निकट तैनात धागे में एक तंग गाँठ, और अधिक डिस्टल धागे में ढीला एक टाई.
- मध्य धागे में एक ढीला गाँठ बाँध, और एक कागज टेप के साथ हीटिंग पैड के बीच धागे का सही अंत तय है.
- मन्या धमनी बाँझ 0.9% NaCl छोड़ने के द्वारा नम रखें. कपास की कलियों के साथ तरल से अधिक सूखी.
- मांसपेशियों को एक hemostat क्लैंप के साथ कम धागा.
- पी द्वारा hemostat कैंची के स्थिति फिक्सपेट की त्वचा inching ऊपरी धागा खींच क्रम में रक्त के प्रवाह को रोक देना. सत्यापित करें कि धमनी के आसपास संयोजी ऊतक को हटा दिया गया है. धमनी रक्त से भरा हो सकता है और नाड़ी के वंचित होना चाहिए. धमनी पर एक टोक़ बल के उत्पादन से धागे को रोकें.
- Vannas माइक्रो कैंची से काटना के साथ धमनी के नीचे के निकट एक क्रॉस सेक्शन निक. रक्त के बूँदें गिरा दिया जाएगा.
- मन्या धमनी में कैथेटर डालें. पूरे प्रेशर सेंसर शुरू करने के लिए सुनिश्चित करें रहो. सत्यापित करें कि वहाँ कोई खून की कमी है.
- धीरे मध्यम धागा गाँठ को समायोजित करने के लिए, क्रम में जगह में कैथेटर पकड़. बहुत ज्यादा नहीं सेक, प्रेशर सेंसर बहुत नाजुक है.
- जानवरों के पेट से कैंची hemostat रिलीज.
- हाथ के साथ कैथेटर पकड़ो और बीच धागा धक्का, क्रम में खून की कमी से बचने के लिए. नोट: धमनी खून से भरा होना चाहिए.
- रिकॉर्डिंग दबाव संकेतों प्रारंभ.
- जब कैथेटर के अंदर है,धमनी दबाव संकेत 60-70 100-120 mmHg fluctuates. दबाव के संकेत के आकार चित्रा 1.a. नोट में दिखाया गया है: अगर आप रुचि रखते हैं, तो इस समय बिंदु पर आप धमनीय दाब रिकॉर्ड अगर संकेत कम से कम 5 मिनट के लिए स्थिर है. मानव संसाधन मूल्यों दबाव रिकॉर्ड संकेत के 30 सेकंड के अंतराल पर विचार waveforms से प्राप्त किया गया. यह भी मानव संसाधन के प्रत्यक्ष माप के लिए एक ईसीजी विधि का उपयोग करने के लिए संभव है, जांच के लक्ष्यों के साथ अनुसार.
- धीरे कैथेटर धक्का दबाव संकेत (1.B चित्रा) के आकार में परिवर्तन का पालन. एक बार कैथेटर बाएं वेंट्रिकल के अंदर है, दबाव संकेत 0 100-120 mmHg fluctuates. यदि यह कैथेटर स्लाइड मुश्किल है, दो उंगलियों के साथ पशु सीने चुटकी.
- लगातार सांस दर, शरीर का तापमान, संज्ञाहरण स्तर और दबाव संकेत को नियंत्रित करते हैं. वे सब के सब स्थिर रहना चाहिए.
छठी. Dobutamine का समावेश
- नस में एक पीई-10 ट्यूब का परिचय. कि रक्त के प्रवाह की पुष्टि पिछड़े सिरिंज सवार बढ़ने अवरुद्ध नहीं है.
- Dobutamine जलसेक 10 μl / मिनट के साथ शुरू होता है और 60 / μl मिनट के साथ खत्म. हर कदम में, जलसेक दर 2 6 मिनट के लिए बनाए रखा है.
- पिछले dobutamine खुराक के बाद, संज्ञाहरण की अधिक मात्रा के साथ पशु euthanize.
सातवीं. डेटा विश्लेषण
- डेटा विश्लेषण के लिए, अपने हित के दर्ज आंकड़ों के अनुभाग का चयन करें. एक समय अंतराल पर विचार जहां दबाव संकेत स्थिर है यकीन है.
- रक्त दबाव मॉड्यूल में सेटअप आइकन का चयन करें. दबाव संकेत के चयनित प्रकार से संकेत मिलता है.
- स्वत: LabChartPro 7 सॉफ्टवेयर प्रदर्शित करता है मतलब है अधिकतम,और मानव संसाधन के लिए न्यूनतम मूल्यों, सिस्टोलिक दबाव (पी अधिकतम), diastolic दबाव (पी मिनट), अंत diastolic दबाव (ईडीपी), अधिक से अधिक सकारात्मक दबाव विकास (डी पी / dtmax) और अधिक से अधिक नकारात्मक दबाव विकास (डी पी / dt मिनट). इसके अलावा, हृदय मापदंडों दबाव निशान पर चित्रित किया जा सकता है.
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Representative Results
धमनी दबाव संकेत systolic और diastolic दबाव द्वारा परिभाषित किया गया है. जब दबाव सेंसर बाएं वेंट्रिकल के अंदर है, उसके दबाव (LVP) तरंग diastolic दबाव के शून्य से एक बूंद और निलय संकुचन से पहले बाएं आलिंद संकुचन (1 चित्रा) की उपस्थिति द्वारा विशेषता है. आधारभूत हालत है, ketamine - xylazine anesthetized सामान्य चूहों एचआर ± 280 के 24, पी 107 की अधिकतम ± 8, 5 पी मिनट ± 1, 14 के ईडीपी ± 2, डी पी / 6081 की dt अधिकतम ± 365 और डी पी / dt मिनट था 5230 ± 526.
के रूप में चित्रा 2 में देखा, LVP सामान्य चूहों में और मानव संसाधन dobutamine जलसेक के साथ उत्तरोत्तर वृद्धि हुई है, और जलसेक रोकने के बाद normalized. जैसी कि उम्मीद थी, सभी hemodynamic मापदंडों का मूल्यांकन एक dobutamine तरीका खुराक पर निर्भर (3 चित्रा) में भी वृद्धि हुई है. इस प्रकार, dobutamine (एचआर वृद्धि) क्रोनोट्रॉपिक और सकारात्मक में otropic प्रभाव (LVP और डी पी / dt अधिकतम वृद्धि) evidenced कर रहे हैं.
सामान्य चूहों की तुलना में, उच्च वसा वाले आहार प्रेरित मोटे चूहों में हम मानव संसाधन और डी पी / dt अधिकतम एक कम वृद्धि मनाया जब कार्डियक तनाव प्रेरित है, उच्चतम dobutamine परीक्षण किया (4 चित्रा) मात्रा में सांख्यिकीय महत्वपूर्ण है. इन मतभेदों को आधारभूत शर्तों (0 एनजी / छ / मिनट) में नहीं मनाया गया.
चित्रा 1 धमनी (A) और निलय (बी) के दबाव रजिस्टरों सामान्य चूहों के कैथीटेराइजेशन के बाद प्राप्त. Hemodynamic मापदंडों प्रतिनिधि LVP बनाम समय हृदय चक्र से निर्धारित किया गया है. 5 पशुओं के प्रतिनिधि डेटा बड़ा आंकड़ा देखने के लिए यहां क्लिक करें .
चित्रा 2. LVP (A) और मानव संसाधन (बी) के सामान्य चूहों में dobutamine जलसेक के दौरान पंजीकृत करता है. 5 पशुओं के प्रतिनिधि डेटा.
चित्रा 3. मानव संसाधन (ए), (बी) LVP, डी पी / dt अधिकतम (सी) और डी पी / dt (D) मिनट सामान्य चूहों में dobutamine जलसेक के दौरान बदलाव. डेटा ± SEM मतलब के रूप में व्यक्त कर रहे हैं. n = 5
चित्रा 4 (A) मानव संसाधन और सामान्य और उच्च वसा वाले आहार प्रेरित मोटापे से ग्रस्त चूहों में dobutamine जलसेक के दौरान अधिकतम डी पी / dt (बी) परिवर्तन. डेटा ± SEM मतलब के रूप में व्यक्त कर रहे हैं. * = <0.05 पी, n = 5
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Discussion
कार्डियक तनाव dobutamine द्वारा प्रेरित और हृदय कैथीटेराइजेशन द्वारा निगरानी परीक्षण श्रमसाध्य है. बहरहाल, प्रोटोकॉल के बाद यहाँ का वर्णन और प्रशिक्षण की एक कम समय के साथ, यह संभव है कि एक ही प्रयोग है कि पिछले लगभग एक घंटे में छह hemodynamic मानकों का आकलन.
यहाँ प्रोटोकॉल प्रस्तुत की महत्वपूर्ण कदम रक्त वाहिकाओं की cannulations हैं. मन्या धमनी की केन्युलेशन के बारे में है, प्रदर्शन चीरा पर्याप्त गहरा करने के लिए तीन धमनी के ऊतक परतों, और काफी बड़े कैथेटर के पारित होने की अनुमति देने के तोड़ने होना चाहिए. गले नस के केन्युलेशन के बारे में है, जबकि खून बहने का खतरा कम है, नस रोड़ा की संभावना अधिक है. इस प्रकार, प्रोटोकॉल repeatability amply Nicking इस्तेमाल किया रणनीति के मानकीकरण पर लटका हुआ है.
कम से कम करने के लिए संज्ञाहरण हाइपोथर्मिया, और hypoxia के अवसादग्रस्तता प्रभाव के प्रभाव को रोका जाना चाहिए और यदि आवश्यक हो, सुधारनेटेड. श्वसन ताल नियमित रूप से रखने के लिए किया जाना चाहिए क्योंकि गहरे या अनियमित श्वास LVP रिकॉर्डिंग को प्रभावित करता है.
Ii 1 से 1.5 ग्राम / छ / मिनट 9,10),) हृदय की भयावहता, मैं प्रशासन के मार्ग) (नसों के द्वारा: intraperitoneally 0.5 करने के लिए 40 एनजी / छ / मिनट 7,8 Dobutamine इस्तेमाल खुराक के अनुसार समायोजित किया जाना चाहिए हृदय परिवर्तन की शिथिलता और iii) ethiology.
और पिछले नहीं बल्कि कम से कम, तीन व्यावहारिक सलाह: प्रचुर मात्रा में वसा गले नस के आसपास के ऊतक के साथ पशुओं में मैं) की अनुमति है, खून की एक छोटी राशि के लिए बाहर आते हैं, के क्रम में चीरा सीमाओं का पता लगाने, ii) रखने के क्षेत्र में काम कर गीला करना क्योंकि केन्युलेशन प्रक्रिया जब कैथेटर अच्छी तरह से lubricated है सरल है, iii) टैगिंग कैथेटर खुर्दबीन के नीचे अपने दृश्य की सुविधा है.
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Disclosures
ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.
Acknowledgments
हम डॉ. हेलीओ सालगाड़ो, Renata Lataro और Mauro de Oliveira, Ribeirão Preto, साओ पाउलो और डॉ. बेन Janssen, हृदय अनुसंधान संस्थान मास्ट्रिच, Maastricht विश्वविद्यालय, विश्वविद्यालय के मेडिसिन के सेट अप प्रक्रिया के दौरान उदार सहायता के लिए स्कूल धन्यवाद.
यह काम SDC FONDECYT अनुदान N ° 11090114 द्वारा समर्थित किया गया
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Reagents | |||
| PE-50/10 | Warner Instruments | 64-0752 | |
| Silk thread 6/0 HR17 | Tagum | SN0713K | |
| Xylacin 20 mg/ml | Laboratorio Centrovet | ||
| Ketamine 100 mg/ml | Drag Pharma | ||
| Sodium chloride 0.9% | Lab Sanderson S.A. | ||
| Dobutamine hydrochloride | Sigma-Aldrich | D0676 | |
| Syringe U-100 Insulin 29G x ½" | Terumo Medical Co. | ||
| Forceps Dissecting Micro 11.5 cm Style 7 | Lawton Medizintechnik | 09-0959 | |
| Graefe Forceps Cvd 0.7mm 7cm | Lawton Medizintechnik | 62-0263 | |
| Clamps Dieffenbach bulldog Cl Str 38 mm | Lawton Medizintechnik | 60-010 | |
| Vannas Scissors 8 cm Str Fh | Lawton Medizintechnik | 63-1400 | |
| Equipment | |||
| SPR-671 MiKro-Tip Pressure catheter | Millar instruments | 840-6719 | |
| PCU-2000 Pressure Control Unit | Millar instruments | 880-0129 | |
| PowerLab 4/30 | ADinstruments Pty Ltd. | ML866 | |
| LabChartPro 7 | ADinstruments Pty Ltd. | MLU260/7 | |
| Legato200 Infusion Pump | KdScientific | KD-KDS210P | |
| TCAT-2LV Temperature controller and isothermal heating plate | PhysiTemp instruments Inc. | ||
| Medical Oxygen supply | Indura | ||
| Rectal probe | ADinstruments Pty Ltd. | MLT1404 | |
| Trinocular microscope, axial illumination | LW Scientific | Z2B-TRI-ETNE, ILP-1502-LTS1, ILP-1502-DGGF | |
References
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