Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

Verbeterd protocol voor Laser Microdissection der humane pancreatische eilandjes Van Chirurgische Specimens

doi: 10.3791/50231 Published: January 6, 2013

Summary

Laser microdissectie is een techniek die het herstel van de geselecteerde cellen uit minieme hoeveelheden parenchym mogelijk maakt. Hier beschrijven we een protocol voor die menselijke pancreatische eilandjes van chirurgische preparaten worden gebruikt voor transcriptoom studies. Ons protocol verbetert de intrinsieke autofluorescentie van menselijke beta-cellen, waardoor hun collectie.

Abstract

Laser microdissectie (LMD) is een techniek die het herstel van de geselecteerde cellen en weefsels van kleine hoeveelheden parenchym 1,2 toelaat. De gedissecteerde cellen kunnen worden gebruikt voor verschillende onderzoeken, zoals transcriptoom of proteomische studies, DNA assessment of chromosoomanalyse 2,3. Een bijzondere uitdaging toepassing van LMD transcriptoomanalyse, die vanwege de labiliteit van RNA 4, kan bijzonder prominent wanneer cellen worden geprepareerd uit weefsels die rijk RNases zoals de pancreas. Een microdissection protocol dat snelle identificatie en verzameling van doelwitcellen kan essentieel in deze instelling om het weefsel verwerkingstijd verkorten en dus om RNA houdbaarheid.

Hier beschrijven we een protocol voor die menselijke pancreatische beta cellen van chirurgische specimens worden gebruikt voor studies transcriptoom 5. Kleine stukjes van de alvleesklier van ongeveer 0,5-1 cm 3 werden uit de gezonde weergegeven marges van operatief pancreas specimens, ingebed in Tissue-Tek oktober verbinding, direct ingevroren in 2-methylbutaan gekoeld en opgeslagen bij -80 ° C tot snijden. Veertig seriële secties van 10 um dikte werden gesneden op een cryostaat onder -20 ° C instelling afzonderlijk overgebracht naar glazen objectglaasjes, gedroogd in de cryostaat voor 1-2 min en bewaard bij -80 ° C.

Onmiddellijk vóór de laser microdissectie procedure werden secties gefixeerd in ijskoude, versbereide 70% ethanol gedurende 30 seconden, gewassen met 5-6 dips in ijskoud DEPC-behandeld water, en gedroogd door twee minuut incubaties in ijskoude 100% ethanol gevolgd door xyleen (die wordt gebruikt voor weefseldehydratatie) gedurende 4 min; weefselcoupes werden vervolgens aan de lucht gedroogd daarna gedurende 3-5 min. Belangrijker alle stappen behalve de incubatie in xyleen werden uitgevoerd met ijskoude reagentia - een wijziging op een eerder beschreven protocol 6. Utilization van ijskoude reagentia resulteerde in een sterke stijging van de intrinsieke autofluorescentie van beta-cellen, en gefaciliteerd hun erkenning. Voor microdissectie, vier secties werden gedehydrateerd telkens: twee werden in een folie verpakte 50 ml buis, het weefsel bescherming tegen vocht en bleken, de twee andere werden onmiddellijk gemicrodissecteerde. Deze procedure werd uitgevoerd met een PALM microbundel instrument (Zeiss) onder toepassing van de Auto Laser Pressure Wegslingeren (AutoLPC) mode. De voltooiing van beta cel / eilandje dissectie van vier cryocoupes die niet meer nodig zijn dan 40-60 min.. Cellen werden verzameld in een AdhesiveCap en gelyseerd met 10 ui lysis buffer. Elke afzonderlijke RNA monster voor transcriptoom analyse werd verkregen door het combineren van 10 cellen gemicrodissecteerde monsters, gevolgd door RNA-extractie met behulp van de Pico Pure RNA Isolation Kit (Arcturus). Dit protocol verbetert de intrinsieke autofluorescentie van menselijke beta-cellen, waardoor hun snelle en accurate herkenning en collectie. Verdere verbetering van deze procedure in staat kan stellen de dissectie van fenotypisch verschillende beta-cellen, met mogelijke consequenties voor een beter begrip van de veranderingen die gepaard gaan met diabetes type 2.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1. Bevriezing van de Mens pancreasweefsel

  1. Verwijder vetweefsel, bloedvaten, zenuwen en niet-parenchym weefsel met een scalpel en pincet, en snijd de pancreas weefsel in stukken (~ 0.5-1 cm blokjes).
  2. Plaats een alvleesklierweefsel stuk in het midden van een Cryomold, en volledig te bedekken het met koud Tissue-Tek oktober Compound. Plaats de Cryomold in een pot waarvan de bodem is bedekt met voorgekoelde 2-methylbutaan en snap-vries in vloeibare stikstof. Bewaar het bevroren monster bij -80 ° C.

2. Voorbereiding van vriescoupes

  1. Draag handschoenen in alle stappen om denaturatie van RNA te vermijden.
  2. Reinig de cryostaat mes, preparaathouder en penseel met koude 100% ethanol en RNase Away. Plaats de bevroren weefsel binnen de cryostaat.
  3. Wacht tot het weefsel, mes en kwast te bereiken -20 ° C. Label de SuperFrost Plus dia's en pre-cool ze in de cryostaatkamer tijdens het wachtenhet weefsel tot -20 ° C. bereikt
  4. Breng de Tissue-Tek oktober Compound op de preparaathouder en plaats de bevroren weefsel op de top.
  5. Zodra de Tissue-Tek oktober Compound is bevroren trim de cryoblock en verwijder een eventueel overschot van Tissue-Tek oktober Compound met een scheermesje.
  6. Snijd een totaal van 40 opeenvolgende 10 pm plakjes uit de pancreas weefsel blok. Daarnaast adviseren wij het snijden van een eerste en middelste segment te worden opgeslagen voor overzichtstekeningen van de pancreas gedeelte dat de identificatie van eilandjes kan binnen de plakken te vergemakkelijken tijdens de microdissectie proces.
  7. Breng de secties van het mes naar het centrum van een SuperFrost Plus dia door op de achterzijde van de schuif met een vinger (bedekt met een handschoen) te warmen alleen het gebied van de sectie die moet hechten.
  8. Droog de secties 1-2 min in de cryostaat bij -20 ° C, waarna u ze in een dia box geplaatst op droogijs. Bewaar de sectiesbij -80 ° C.
  9. Reinig indien nodig het mes met papieren handdoeken en koude 100% ethanol.

3. Uitdroging van vriescoupes

  1. Bereid de Reagentia: giet 30 ml vers bereide 70% ethanol, 30 ml DEPC-behandeld water, 2x30 ml 100% ethanol en 30 ml xyleen in 50 ml Cellstar buizen (Falcons) chill en alle reagentia (behalve xyleen) op ijs bewaren.
  2. Reinig de werkruimte onder de motorkap met 100% ethanol en RNaseZAP.
  3. Worden twee cryosecties als volgt: in ijskoude 70% ethanol vastgesteld voor 30 sec, wassen met 5-6 lijst dips in ijskoud DEPC-behandeld water, tweemaal drogen gedurende 1 min in ijskoude 100% ethanol, incuberen gedurende 4 minuten in xyleen bij kamertemperatuur (25 ° C) en drogen gedurende 3-5 min. Herhaal deze stap met een ander paar vriescoupes.
  4. Terug Plaats twee gedroogde cryocoupes om een ​​back-in een 50 ml Cellstar buis omwikkeld met aluminiumfolie om ze te beschermen tegen licht en vocht.
<p class = "jove_title"> 4. Laser Microdissection van Beta-cellen met PALM microbundel, Zeiss

  1. Reinig de microscoop met RNaseZAP en monteer de Adhesive Cap in de RoboMover.
  2. Stel de volgende instellingen: Filter set 09 (excitatie: 450-490 nm, emissie> 515 nm), AutoLPC-modus, 50% laserenergie, 65% laser focus, 100% laser de snelheid, 5 micrometer afstand tussen AutoLPC schoten, 6 micrometer afstand naar lijn, werkhoogte: -10.100.
  3. Plaats een dia in het podium.
  4. Zoek de autofluorescente beta-cellen onder de microscoop visualisatie (5x of 10x lens).
  5. Schakel over naar de 40x lens, selecteert u de beta-cellen met de "vrije hand" selectie tool en microdissect ze met behulp van de laser.
  6. Leg het weefsel van vier uitgedroogd vriescoupes in een AdhesiveCap.
    Opmerking 1: de tijd om de beta cellen van een gedehydrateerde cryosection ontleden mag niet langer dan 10-20 min om rehydratatie van de weefselsecties die leidt tot voorkomenRNA degradatie.
    Opmerking 2: controleer succesvolle microdissectie proces door middel van visuele inspectie na het verplaatsen van de etappe naar de controlepost.

5. Lyse van gemicrodissecteerde Beta Cell Verrijkt Tissue

  1. Verwijder de AdhesiveCap de RoboMover.
  2. Pipet 10 pl extractiebuffer (XB, PicoPure RNA Isolation Kit, Arcturus) in het deksel van de AdhesiveCap en incubeer ondersteboven bij 42 ° C gedurende 30 minuten.
  3. Spin down bij 10.000 xg en zet het lysaat op droog ijs. Bewaard bij -80 ° C tot de RNA-extractie uitgevoerd.
  4. Herhaal stap 3.) Tot 5.) Met alle andere secties.

6. RNA-extractie

  1. Combineer alle tien 10 ul lysaten
  2. Ga door met de RNA isolatie door te werken bij kamertemperatuur volgens het protocol van de PicoPure RNA Isolation Kit, Arcturus, met een 1:1 verhouding extractiebuffer (XB) tot 70% Ethanol (waaronder DNase behandeling).

7. RNA Analysis

  1. Gebruik 1 ui RNA voor de analyse van de kwaliteit en kwantiteit met behulp van een Agilent 2100 bioanalyser (PicoChip). Kwantitatieve evaluatie uitgevoerd ten opzichte van een standaard RNA geladen in parallel op de chip.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Zoals getoond in figuur 1, de gemodificeerde protocol drogen tot een verbetering van de bètacellen autofluorescentie vergeleken met de eerder gepubliceerde protocol 6. Het toepassen van de beschreven protocol werd elk van 39 chirurgische pancreas exemplaren gebruikt tot 40 seriële cryocoupes voor een gemiddelde van 31'544'704 micrometer 3 weefsel / pancreas monster (bereik: 8'742'390 - 81'522'153 micrometer 3) het genereren van zoals getoond in tabel 1. Dit geeft het volume ongeveer 18 pancreaseilandjes van 150 urn diameter, of van 35.000 β-cellen. Het weefsel afkomstig van een gemiddelde van 38 verschillende eilandjes / pancreatische specimen (bereik: 19-80 eilandjes), werd elk typisch waargenomen in twee of meer opeenvolgende secties. De grote variabiliteit in de opbrengst van eilandjes tussen de verschillende exemplaren weerspiegelt de heterogeniteit van het weefsel bron, ofwel de alvleesklier hoofd of de staart, en de geleidelijke verbetering van de ondernemers in de sporenion van de eilandjes binnen de 10 minuten tijd besteed aan de controle van elke sectie.

Totaal RNA uit elke gemicrodissecteerde en gelyseerd weefsel werd gezuiverd met Arcturus PicoPure Frozen RNA Isolation Kit van Applied Biosystems en geëlueerd in 11 pi, volgens het protocol van de fabrikant. Vervolgens 1 pi RNA van elk monster werd geanalyseerd door de Agilent 2100 bioanalyser. We verkregen gemiddeld 42 ng RNA / specimen (bereik: 5 tot 229 ng / specimen) met een gemiddelde RNA integriteit nummer (RIN) van 5,8 (bereik: 3,4 - 7,2). Figuur 2 toont een voorbeeld van de RNA-analyse. Welke van de RIN waarde alle geanalyseerde RNA-monsters werden met succes gebruikt voor transcriptoom studies. We vonden geen directe relatie tussen de hoeveelheid gemicrodissecteerde weefsel en de RNA-opbrengst. Verschillen in het tijdsinterval tussen het oogsten door de chirurgen en het bevriezen van de pancreas exemplaren na haar onderzoek en vrijgave door de patholoog zou een verklaring kunnen in p kunst voor de variabele kwaliteit en kwantiteit van teruggewonnen RNA. Andere belangrijke factoren te overwegen zijn de laserenergie aangevraagde microdissectie met de lagere energie waardoor de hogere integriteit RNA, alsmede de laser focus en de afstand van de LPC punten. De focus is ideaal gelegen als u een lichte "impact" van de laser op het glazen oppervlak van de glijbaan, de vorming van een kleine zwarte stip, kan worden gezien. In onze handen de beste resultaten worden bereikt met een laser energie van 50%, een laser focus van 65%, hoewel aangepast om te compenseren voor verschillen in de dikte van de secties en een afstand van LPC punten van 5 urn. Bovendien, de hoeveelheid RNA kan worden geoptimaliseerd door het houden van de werkhoogte van de RoboMover, dat wil zeggen de afstand tussen de lijm en de kap gedeelte zo laag mogelijk om verlies van gemicrodissecteerde weefsel te vermijden tijdens het vastleggen proces. In onze set-up van de werkhoogte is op -10.100 willekeurige PALM eenheden.

ll "> specimen <td> 30
aantal eilandjes / specimen restmateriaal volume / monster [micrometer 3] RIN concentratie [ng / ul] totaal RNA [ng]
DP002 34 24'947'696 5,2 1.149 10,34
DP003 30 41'141'488 5,5 1.677 15,09
DP005 23 27'024'264 3,5 8.259 66,07
DP006 25 45'900'848 3,4 7.399 59,19
DP007 23'936'048 6,5 0.595 4,76
DP008 22 68'248'432 6,2 1.559 14,03
DP010 34 33'156'752 5,6 1.750 19,25
DP011 29 31'339'152 6,0 1.365 15,02
DP012 34 57'594'360 6,3 3.025 33,28
DP017 35 28'212'256 6,0 1.292 14,21
DP030 35 48'007'530 5,6 2.180 23,98
DP013 36 34'371'045 6,9 1.350 14,85
DP014 35 21'360'060 7,2 1.270 13,97
DP015 33 20'923'488 4,1 4.000 44,00
DP019 40 35'431'704 7,0 1.670 18,37
DP025 19 15'329'844 6,6 0.496 5,46
DP034 19 81'522'153 6,4 4.260 46,86
DP039 32 19'074'410 6,5 1.270 13,97
DP040 44 31'565'630 5,4 2.300 25,30
DP042 52 40'333'840 7,0 2.510 27,61
DP021 65 33'996'260 6,3 2.830 31,13
DP023 19 19'513'310 5,6 8.250 90,75
DP024 32 24'125'140 6,3 20.780 228,58
DP038 23 18'306'040 6,6 11.700 128,70
DP045 35 36'345'620 6,3 1.100 12,10
DP033 42 26'078'550 6,5 15.380 169,18
DP022 49 33'535'460 6,8 7.590 83,49
DP041 56 34'899'830 5,7 3.350 36,85
DP049 38 18'521'230 6,8 1.020 11,22
DP028 32 16'410'670 5,6 1.720 18,92
DP056 36 19'737'580 5,7 1.130 12,43
DP059 52 23'376'180 3,6 7.880 86,68
DP047 41 20'658'370 6,4 1.040 11,44
DP036 23 8'742'390 3,5 0.950 10,45
DP027 42 29'150'480 5,1 3.410 37,51
DP046 54 16'800'070 5,3 8.210 90,31
DP055 57 32'340'270 6,2 1.280 14,08
DP064 74 41'896'460 6,5 2.440 26,84
DP067 80 46'388'540 6,3 5.200 57,20
gemiddelde 38 31'544'704 5,8 3.965 42,14
aantal eilandjes / specimen restmateriaal volume / monster [micrometer 3] RIN totaal RNA [ng]
reeks 19-80 8'742'390 - 81'522'153 3,4 tot 7,2 4,76 tot 228,58
gemiddelde 38 31'544'704 5,8 42,14

Tabel 1. Overzicht van het aantal gemicrodissecteerde weefsel en de kwaliteit en kwantiteit van het geëxtraheerde RNA. De specimens worden chronologisch. Het restmateriaal volume wordt als volgt berekend: dikte van cryosection (10 urn) x gemicrodissecteerde gebied [um 2]. 1 pi RNA van elk monster werd geanalyseerd op de Agilent 2100 bioanalyser PicoChip.

"Figuur Figuur 1. Intrinsieke autofluorescentie van humane beta cellen autofluorescentie van beta-cellen van de pancreas na ontwatering cryosecties met reagentia die hetzij werden bij kamertemperatuur (A) of ijskoude (B) (excitatie 450 tot 490 nm, emissie> 515 nm;. 400 x vergroting). Beta-cellen lijken geel, terwijl pancreas kabelgoten, schepen en collageen weer een groene kleur. Scale bar: 75 pm.

Figuur 2
Figuur 2. Kwaliteit en kwantiteit van RNA geëxtraheerd eilandje. Profiel van een menselijke eilandjes RNA verkregen monster deze LMD protocol (B) vergeleken met een standaard RNA monster (A). 1 pi RNA van elk monster werd op een PicoChip en geanalyseerd quantity en kwaliteit met de Agilent 2100 bioanalyser. (A): RIN (RNA integriteit aantal) 7,7 [rRNA Ratio (28S/18S): 1,3)], (B): RIN 7.2 [rRNA Ratio (28S/18S): 1,1)]. De concentratie van het eilandje RNA was 1,3 ng / ul, voor een totaal bedrag van 10,3 ng van 21'360'060 micrometer 3 alvleesklierweefsel. Klik hier om een grotere afbeelding te bekijken .

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

We beschrijven een betrouwbare aanpak voor de laser microdissectie (LMD) van menselijke eilandjes van chirurgische pancreas exemplaar. Op voorwaarde dat een LMD microscoop beschikbaar is, kan deze procedure worden toegepast op elk onderzoeksinstelling het uitvoeren van een gedeeltelijke pancreatectomies, waardoor de toegang tot de menselijke eilandje materiaal van zowel niet-diabetische en type 2 diabetes. Dit is vooral van belang omdat het gebrek aan pancreata aangeboden eilandje isolatie. Gunstige aspecten van LMD opzichte eilandje isolatie door collagenase digestie zijn de verkorte tussen explantatie van het weefsel en verwerking van de eilandjes voor RNA-extractie 7, de verrijking van beta-cellen 7, en het vermijden van mechanische en enzymatische harde manipulaties 8, 9,10, dat het genexpressieprofiel kunnen veranderen. Bij gedeeltelijk pancreatectomized patiënten meer klinische en metabole informatie is meestal beschikbaar dan bij orgeldonors. Anderzijds, isolatie van eilandjes door LMD opbrengsten minder RNA met lagere RIN waarden vergeleken met die waargenomen na collagenase vertering en geen levende eilandjes voor functionele studies. Bovendien kan de pancreas ziekte die de operatie beïnvloeden het eilandje expressieprofiel. Een evenwichtige evaluatie van deze voor-en nadelen zal haalbaar zijn door middel van vergelijkende studies over een groot aantal eilandjes isolaties uitgevoerd door collagenase vertering en LMD hetzij van orgaandonoren of gedeeltelijk pancreatectomized patiënten, zoals die aan de gang in de multicenter innovatieve geneesmiddelen initiatief voor Diabetes (IMIDIA) met het doel "Verbetering beta-celfunctie en identificatie van diagnostische biomarkers voor behandeling monitoring in Diabetes" ( http://www.imidia.org ).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Geen belangenconflicten verklaard.

Acknowledgments

We willen al onze collega's die hulp, advies en kritische inbreng van de verschillende stappen van dit project bedanken. De productie van deze video artikel werd ondersteund met middelen van IMIDIA ( http://www.imidia.org ), het Duitse ministerie van Onderwijs en Onderzoek (BMBF) aan het Duitse Centrum voor Diabetes Onderzoek (DZD, http://www.dzd -ev.de ) en het Universitair Ziekenhuis Carl Gustav Carus aan de University of Technology Dresden. De werkzaamheden die leiden tot deze publicatie heeft steun gekregen van het Innovative Medicines Initiative gemeenschappelijke onderneming onder subsidieovereenkomst nr. 155005 (IMIDIA), middelen waarvan van de financiële bijdrage bestaat uit Zevende Kaderprogramma van de Europese Unie (FP7/2007-2013) en EFPIA bedrijven 'in natura bijdrage.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
2-Methylbutane (isopentane) ROTH 3927.1
AdhesiveCap (opaque, 500 μl) ZEISS 415190-9201-000
Cellstar Tubes (50 ml) greiner bio-one 210 261 with support skirt
Cellstar Tubes (50 ml) greiner bio-one 227.261
Diethyl pyrocarbonate (DEPC) SIGMA D 5758
Dry ice
Ethanol absolute VWR 20821.310
Liquid nitrogen
Paint brush
PALM MicroBeam ZEISS
Peel-a-Way embedding moulds (truncated), 12 x 12 mm ProSciTech RR12 Top internal 22x22 mm, depth 21 mm
Arcturus PicoPure Frozen RNA Isolation Kit Applied Biosystems KIT 0204
Plastic clamp
Razor
RNase-Free DNase Set Qiagen 79254
RNaseZAP SIGMA R 2020
Scalpel / surgical blade Techno Cut 2800111
SuperFrost Plus adhesion microscope slides Thermo Scientific J1800AMNZ 25x75x1.0 mm
Tissue-Tek O.C.T Compound Sakura 4583 or 0807000022
Tweezers BRAUN BD168R
Xylene VWR 28975.291

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Bonner, R. F., Emmert-Buck, M., et al. Laser capture microdissection: molecular analysis of tissue. Science. 278, 1481-1483 (1997).
  2. Suarez-Quian, C. A., Goldstein, S. R., et al. Laser capture microdissection of single cells from complex tissues. Biotechniques. 26, (2), 328-3235 (1999).
  3. Espina, V., Wulfkuhle, J. D., et al. Laser-capture microdissection. Nature Protocols. 1, 586-603 (2006).
  4. Mikulowska-Mennis, A., Taylor, T. B., et al. High-quality RNA from cells isolated by laser capture microdissection. Biotechniques. 33, (1), 176-179 (2002).
  5. Bötticher, G., Sturm, D., Ehehalt, F., Knoch, K. P., Kersting, S., Grützmann, R., et al. Isolation of Human Islets from Partially Pancreatectomized Patients. J. Vis. Exp. (53), e2962 (2011).
  6. Marselli, L., Sgroi, D. C., et al. Laser capture microdissection of human pancreatic beta-cells and RNA preparation for gene expression profiling. Methods in Molecular Biology. 560, 87-98 (2009).
  7. Marselli, L., Thorne, J., et al. Gene Expression of Purified {beta}-Cell Tissue Obtained from Human Pancreas with Laser Capture Microdissection. Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism. 93, 1046-1053 (2008).
  8. Bottino, R., Balamurugan, A. N., et al. Response of human islets to isolation stress and the effect of antioxidant treatment. Diabetes. 53, (10), 2559-2568 (2004).
  9. Abdelli, S., Ansite, J., et al. Intracellular stress signaling pathways activated during human islet preparation and following acute cytokine exposure. Diabetes. 53, (11), 2815-2823 (2004).
  10. Negi, S., Jetha, A., et al. Analysis of beta-cell gene expression reveals inflammatory signaling and evidence of dedifferentiation following human islet isolation and culture. PLoS One. 7, (1), e30415 (2012).
Verbeterd protocol voor Laser Microdissection der humane pancreatische eilandjes Van Chirurgische Specimens
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Sturm, D., Marselli, L., Ehehalt, F., Richter, D., Distler, M., Kersting, S., Grützmann, R., Bokvist, K., Froguel, P., Liechti, R., Jörns, A., Meda, P., Baretton, G. B., Saeger, H. D., Schulte, A. M., Marchetti, P., Solimena, M. Improved Protocol For Laser Microdissection Of Human Pancreatic Islets From Surgical Specimens. J. Vis. Exp. (71), e50231, doi:10.3791/50231 (2013).More

Sturm, D., Marselli, L., Ehehalt, F., Richter, D., Distler, M., Kersting, S., Grützmann, R., Bokvist, K., Froguel, P., Liechti, R., Jörns, A., Meda, P., Baretton, G. B., Saeger, H. D., Schulte, A. M., Marchetti, P., Solimena, M. Improved Protocol For Laser Microdissection Of Human Pancreatic Islets From Surgical Specimens. J. Vis. Exp. (71), e50231, doi:10.3791/50231 (2013).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter