FlyBar: मक्खियों के लिए शराब का प्रबंध

Summary

ड्रोसोफिला शराब के व्यवहार प्रतिक्रियाओं के सेलुलर और आणविक आधार विदारक के लिए एक महत्वपूर्ण मॉडल प्रणाली के रूप में उभरा है. यहाँ हम आसानी से अन्य प्रयोगों के लिए लागू किया जा सकता है और स्नातक अनुसंधान के लिए अच्छी तरह से अनुकूल है कि एक circadian संदर्भ में शराब संवेदनशीलता डेटा के संग्रह के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं.

Abstract

फल मक्खियों (ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर) शराब अनुसंधान और circadian जीव विज्ञान दोनों के लिए एक स्थापित मॉडल हैं. हाल ही में, हम circadian घड़ी शराब संवेदनशीलता, लेकिन नहीं सहिष्णुता के गठन modulates दिखाया. यहाँ, हम विस्तार में हमारे प्रोटोकॉल का वर्णन. शराब FlyBar का उपयोग मक्खियों को दिलाई है. इस सेटअप में, संतृप्त शराब वाष्प सेट अनुपात में humidified हवा के साथ मिलाया जाता है, और एक साथ चार ट्यूबों में मक्खियों को दिलाई. मक्खियों प्रतिकृति के बीच भिन्नता को कम करने के क्रम में मानकीकृत शर्तों के तहत किया जाता है. अलग जीनोटाइप या उपचार की तीन दिन पुरानी मक्खियों अधिमानतः प्रत्यक्ष तुलना संभव बनाने के लिए दो अलग अलग समय अंक (जैसे, सीटी 5 और सीटी 17) की मक्खियों मिलान करके, प्रयोगों के लिए इस्तेमाल कर रहे हैं. प्रयोग के दौरान, मक्खियों पलटा (lorr) को ठीक करने की हानि है कि प्रदर्शन के शराब वाष्प के पूर्व निर्धारित प्रतिशत और मक्खियों की संख्या को 1 घंटे के लिए उजागर या sed रहे हैंसमझना हर 5 मिनट में गिने जाते हैं. डेटा तीन अलग सांख्यिकीय दृष्टिकोण का उपयोग का विश्लेषण किया जा सकता है. पहले मक्खियों के 50% उनके ठीक पलटा खो दिया है, जिस पर समय का निर्धारण और महत्वपूर्ण अंतर समय अंक के बीच मौजूद है कि क्या यह निर्धारित करने के विचरण का एक विश्लेषण (एनोवा) का उपयोग करने के लिए है. दूसरा एक एनोवा विश्लेषण के बाद मिनट की एक निर्धारित संख्या के बाद lorr कि शो प्रतिशत मक्खियों निर्धारित करने के लिए है. पिछले विधि बहुभिन्नरूपी आँकड़ों का उपयोग पूरे टाइम्स श्रृंखला का विश्लेषण करने के लिए है. प्रोटोकॉल भी जीनोटाइप के बीच गैर circadian प्रयोगों या तुलना के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.

Introduction

ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर इस दवा ^2,3 करने के लिए मानव प्रतिक्रियाओं के अनुरूप हैं कि शराब ¹ को biphasic व्यवहार प्रतिक्रियाओं का प्रदर्शन. , और बेहोश करने की क्रिया (जवाब में मोटर गतिविधि का पूर्ण अभाव: शराब की कम मात्रा के लिए प्रारंभिक निवेश पर, मोटर समन्वय की कमी, postural नियंत्रण के नुकसान और ठीक सजगता (lorr ठीक पलटा की हानि) द्वारा बदल दिया, प्रदर्शन वृद्धि हुई हरकत गतिविधि मक्खियों यांत्रिक उत्तेजना को) शराब के लिए जोखिम ^4-9 प्रगति के रूप में. अंतर्जात circadian घड़ी चूहों ^10,11, चूहों ¹² में मनाया के रूप में शराब संवेदनशीलता और विषाक्तता के एक मजबूत न्यूनाधिक है, और ¹³ मनुष्य. ड्रोसोफिला अनुसंधान के क्षेत्र में हाल के अग्रिमों circadian घड़ी तीव्र शराब संवेदनशीलता नहीं बल्कि शराब सहिष्णुता ¹ modulates पता चला है. उत्परिवर्ती पढ़ाई और स्थानिक की ट्रांसजेनिक जोड़तोड़ के माध्यम से ड्रोसोफिला में उपलब्ध शक्तिशाली आनुवंशिक दृष्टिकोणऔर लौकिक जीन अभिव्यक्ति जटिल व्यवहार के लिए अंतर्निहित सेलुलर और आणविक तंत्र की पहचान करने में तेजी से प्रगति की अनुमति देता है कि एक प्रणाली प्रदान करते हैं. एक खोजी उपकरण के रूप में ड्रोसोफिला का उपयोग तेजी से स्तनधारियों ^14-16 के लिए अनुवाद किया जा सकता है कि शराब तंत्रिका जीव विज्ञान को समझने में मूल अग्रिम अनुमति दी है. Circadian घड़ी शराब संवेदनशीलता modulates के माध्यम से जो आणविक तंत्र की समझ की सुविधा के लिए और समान रूप से circadian समय अंक भर में व्यवहार प्रतिक्रियाओं, मंद लाल बत्ती स्थितियों में इस्तेमाल के लिए उपयुक्त एक शराब प्रशासन प्रोटोकॉल को मापने के लिए जरूरी है. ड्रोसोफिला के लिए, शराब पुरानी जोखिम के लिए या मज़बूती से तीव्र जोखिम के लिए वाष्प के रूप में शराब administrating के माध्यम से खाद्य पूरकता के माध्यम से चलाया जा सकता है. यहाँ, हम नुकसान के ठीक पलटा (lorr) ¹ के circadian मॉडुलन के आकलन के साथ ही के लिए उपयुक्त एक शराब प्रशासन प्रोटोकॉल का वर्णनबेहोश करने की क्रिया.

लगातार तापमान में 12 घंटे एलडी चक्र और फिर प्रयोगात्मक प्रश्न के आधार पर 2-5 दिनों के लिए एक नियंत्रित प्रकाश शासन को हस्तांतरित: मक्खियों 12 घंटा के साथ entrained रहे हैं. मक्खियों FlyBar के रूप में जाना एक डिवाइस में इथेनॉल वाष्प के संपर्क में हैं. इस उपकरण में, हवा की नियंत्रित मात्रा में पानी और शराब के माध्यम से bubbled कर रहे हैं; वाष्पकणों तो एक शीशी आवास मक्खियों में मिलाया और निर्देशित कर रहे हैं. मक्खियों मिनट हर 5 सजगता को ठीक या बेहोश हो गए प्रदर्शित करने में विफल रहता है कि संख्या के लिए रन बनाए हैं. हर समय बिंदु के लिए lorr प्रतिशत circadian समय अंक के बीच या मक्खियों के तनाव के बीच की गणना और तुलना कर रहे हैं. व्यवहार विश्लेषण विकल्प के साथ संयुक्त FlyBar शराब वितरण का उपयोग शराब वितरण की सादगी और विश्वसनीयता अंधेरे शर्तों के तहत आयोजित circadian प्रयोगों के लिए एक महत्वपूर्ण लाभ प्रदान करता है.

Protocol

FlyBar की 1. विधानसभा तर्क और अवलोकन: सिस्टम मक्खियों को शराब वाष्प की नियंत्रित प्रतिशत व्यवस्थापन करने के लिए बनाया गया है. नोट: संख्या 1 के एक योजनाबद्ध सिंहावलोकन प्रदान करता है FlyBar सेट अप…

Representative Results

एक मार्कर के रूप में 50% lorr का उपयोग शराब संवेदनशीलता के circadian मॉड्यूलेशन. दिन के दौरान शराब संवेदनशीलता में circadian मॉडुलन दिखा एक प्रतिनिधि उदाहरण चित्रा 2 में प्रस्तुत किया है. Lorr कैंटन-S में ?…

Discussion

शराब सेवन और समाज के लिए शराब की लागत दोनों ²⁹ मानव और आर्थिक लागत के मामले में जबरदस्त है, ^30,31. ड्रोसोफिला एक मॉडल के रूप में जल्दी से व्यक्तियों की एक बड़ी संख्या के व्यवहार प्रतिक्रियाओं की ज…

Materials

Alcohol 190 proof	Various
Name of Material	Company	Catalog Number	Comments
Aerator	Local pet store		We use Whisper 60
Silicone tubing 1/8”	VWR	408060-0030
120° Y Connector	VWR	82017-256
Quick disconnects	VWR	46600-048
Plastic tube clamps	Bell-art products	132250000	Either this or next
Miniature Air Regulator	McMaster-Carr	8727K11	Either this or previous
Miniature Air Regulator Mounting Bracket	McMaster-Carr	9891K66
Gilmont size 12 flow meter	VWR	29895-242
Tool clips	McMaster-Carr	1722A43	To hold flow meters
Vial	VWR	89092-722
Rubber stopper with two holes	VWR	59585-186	Fits in vials
5 mm Pyrex Glass tubes	Trikinetics	PGT5x65	Fits best in previous stopper.
Teflon tape	Hardware store		To achieve snug fit in stoppers if necessary
Rubber stopper with two holes	VWR	59582-122	Fits our bottles
Disposable glass pipets	VWR	53283-768	Cut to length and bend by heating
Very fine nylon netting	VWR	Various
15 watt bulbs	Hardware store		Overhead red light
Photographic red safe light filters			Overhead red light
Mini Flashlights with red filters	Mag-light