ड्रोसोफिला शराब के व्यवहार प्रतिक्रियाओं के सेलुलर और आणविक आधार विदारक के लिए एक महत्वपूर्ण मॉडल प्रणाली के रूप में उभरा है. यहाँ हम आसानी से अन्य प्रयोगों के लिए लागू किया जा सकता है और स्नातक अनुसंधान के लिए अच्छी तरह से अनुकूल है कि एक circadian संदर्भ में शराब संवेदनशीलता डेटा के संग्रह के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं.
फल मक्खियों (ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर) शराब अनुसंधान और circadian जीव विज्ञान दोनों के लिए एक स्थापित मॉडल हैं. हाल ही में, हम circadian घड़ी शराब संवेदनशीलता, लेकिन नहीं सहिष्णुता के गठन modulates दिखाया. यहाँ, हम विस्तार में हमारे प्रोटोकॉल का वर्णन. शराब FlyBar का उपयोग मक्खियों को दिलाई है. इस सेटअप में, संतृप्त शराब वाष्प सेट अनुपात में humidified हवा के साथ मिलाया जाता है, और एक साथ चार ट्यूबों में मक्खियों को दिलाई. मक्खियों प्रतिकृति के बीच भिन्नता को कम करने के क्रम में मानकीकृत शर्तों के तहत किया जाता है. अलग जीनोटाइप या उपचार की तीन दिन पुरानी मक्खियों अधिमानतः प्रत्यक्ष तुलना संभव बनाने के लिए दो अलग अलग समय अंक (जैसे, सीटी 5 और सीटी 17) की मक्खियों मिलान करके, प्रयोगों के लिए इस्तेमाल कर रहे हैं. प्रयोग के दौरान, मक्खियों पलटा (lorr) को ठीक करने की हानि है कि प्रदर्शन के शराब वाष्प के पूर्व निर्धारित प्रतिशत और मक्खियों की संख्या को 1 घंटे के लिए उजागर या sed रहे हैंसमझना हर 5 मिनट में गिने जाते हैं. डेटा तीन अलग सांख्यिकीय दृष्टिकोण का उपयोग का विश्लेषण किया जा सकता है. पहले मक्खियों के 50% उनके ठीक पलटा खो दिया है, जिस पर समय का निर्धारण और महत्वपूर्ण अंतर समय अंक के बीच मौजूद है कि क्या यह निर्धारित करने के विचरण का एक विश्लेषण (एनोवा) का उपयोग करने के लिए है. दूसरा एक एनोवा विश्लेषण के बाद मिनट की एक निर्धारित संख्या के बाद lorr कि शो प्रतिशत मक्खियों निर्धारित करने के लिए है. पिछले विधि बहुभिन्नरूपी आँकड़ों का उपयोग पूरे टाइम्स श्रृंखला का विश्लेषण करने के लिए है. प्रोटोकॉल भी जीनोटाइप के बीच गैर circadian प्रयोगों या तुलना के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर इस दवा 2,3 करने के लिए मानव प्रतिक्रियाओं के अनुरूप हैं कि शराब 1 को biphasic व्यवहार प्रतिक्रियाओं का प्रदर्शन. , और बेहोश करने की क्रिया (जवाब में मोटर गतिविधि का पूर्ण अभाव: शराब की कम मात्रा के लिए प्रारंभिक निवेश पर, मोटर समन्वय की कमी, postural नियंत्रण के नुकसान और ठीक सजगता (lorr ठीक पलटा की हानि) द्वारा बदल दिया, प्रदर्शन वृद्धि हुई हरकत गतिविधि मक्खियों यांत्रिक उत्तेजना को) शराब के लिए जोखिम 4-9 प्रगति के रूप में. अंतर्जात circadian घड़ी चूहों 10,11, चूहों 12 में मनाया के रूप में शराब संवेदनशीलता और विषाक्तता के एक मजबूत न्यूनाधिक है, और 13 मनुष्य. ड्रोसोफिला अनुसंधान के क्षेत्र में हाल के अग्रिमों circadian घड़ी तीव्र शराब संवेदनशीलता नहीं बल्कि शराब सहिष्णुता 1 modulates पता चला है. उत्परिवर्ती पढ़ाई और स्थानिक की ट्रांसजेनिक जोड़तोड़ के माध्यम से ड्रोसोफिला में उपलब्ध शक्तिशाली आनुवंशिक दृष्टिकोणऔर लौकिक जीन अभिव्यक्ति जटिल व्यवहार के लिए अंतर्निहित सेलुलर और आणविक तंत्र की पहचान करने में तेजी से प्रगति की अनुमति देता है कि एक प्रणाली प्रदान करते हैं. एक खोजी उपकरण के रूप में ड्रोसोफिला का उपयोग तेजी से स्तनधारियों 14-16 के लिए अनुवाद किया जा सकता है कि शराब तंत्रिका जीव विज्ञान को समझने में मूल अग्रिम अनुमति दी है. Circadian घड़ी शराब संवेदनशीलता modulates के माध्यम से जो आणविक तंत्र की समझ की सुविधा के लिए और समान रूप से circadian समय अंक भर में व्यवहार प्रतिक्रियाओं, मंद लाल बत्ती स्थितियों में इस्तेमाल के लिए उपयुक्त एक शराब प्रशासन प्रोटोकॉल को मापने के लिए जरूरी है. ड्रोसोफिला के लिए, शराब पुरानी जोखिम के लिए या मज़बूती से तीव्र जोखिम के लिए वाष्प के रूप में शराब administrating के माध्यम से खाद्य पूरकता के माध्यम से चलाया जा सकता है. यहाँ, हम नुकसान के ठीक पलटा (lorr) 1 के circadian मॉडुलन के आकलन के साथ ही के लिए उपयुक्त एक शराब प्रशासन प्रोटोकॉल का वर्णनबेहोश करने की क्रिया.
लगातार तापमान में 12 घंटे एलडी चक्र और फिर प्रयोगात्मक प्रश्न के आधार पर 2-5 दिनों के लिए एक नियंत्रित प्रकाश शासन को हस्तांतरित: मक्खियों 12 घंटा के साथ entrained रहे हैं. मक्खियों FlyBar के रूप में जाना एक डिवाइस में इथेनॉल वाष्प के संपर्क में हैं. इस उपकरण में, हवा की नियंत्रित मात्रा में पानी और शराब के माध्यम से bubbled कर रहे हैं; वाष्पकणों तो एक शीशी आवास मक्खियों में मिलाया और निर्देशित कर रहे हैं. मक्खियों मिनट हर 5 सजगता को ठीक या बेहोश हो गए प्रदर्शित करने में विफल रहता है कि संख्या के लिए रन बनाए हैं. हर समय बिंदु के लिए lorr प्रतिशत circadian समय अंक के बीच या मक्खियों के तनाव के बीच की गणना और तुलना कर रहे हैं. व्यवहार विश्लेषण विकल्प के साथ संयुक्त FlyBar शराब वितरण का उपयोग शराब वितरण की सादगी और विश्वसनीयता अंधेरे शर्तों के तहत आयोजित circadian प्रयोगों के लिए एक महत्वपूर्ण लाभ प्रदान करता है.
शराब सेवन और समाज के लिए शराब की लागत दोनों 29 मानव और आर्थिक लागत के मामले में जबरदस्त है, 30,31. ड्रोसोफिला एक मॉडल के रूप में जल्दी से व्यक्तियों की एक बड़ी संख्या के व्यवहार प्रतिक्रियाओं की ज…
The authors have nothing to disclose.
इस शोध के लिए अनुदान फ्लोरिडा स्टेट यूनिवर्सिटी चिकित्सा कॉलेज और FSU में जीव विज्ञान विभाग से समर्थन से तंत्रिका विज्ञान पुरस्कार में एक कार्यक्रम के द्वारा प्रदान किया गया. अतिरिक्त धन एक अनुदान सहायता शराब पेय निर्माता रिसर्च फंड से प्रदान किया गया.
Alcohol 190 proof | Various | ||
Name of Material | Company | Catalog Number | Comments |
Aerator | Local pet store | We use Whisper 60 | |
Silicone tubing 1/8” | VWR | 408060-0030 | |
120° Y Connector | VWR | 82017-256 | |
Quick disconnects | VWR | 46600-048 | |
Plastic tube clamps | Bell-art products | 132250000 | Either this or next |
Miniature Air Regulator | McMaster-Carr | 8727K11 | Either this or previous |
Miniature Air Regulator Mounting Bracket | McMaster-Carr | 9891K66 | |
Gilmont size 12 flow meter | VWR | 29895-242 | |
Tool clips | McMaster-Carr | 1722A43 | To hold flow meters |
Vial | VWR | 89092-722 | |
Rubber stopper with two holes | VWR | 59585-186 | Fits in vials |
5 mm Pyrex Glass tubes | Trikinetics | PGT5x65 | Fits best in previous stopper. |
Teflon tape | Hardware store | To achieve snug fit in stoppers if necessary | |
Rubber stopper with two holes | VWR | 59582-122 | Fits our bottles |
Disposable glass pipets | VWR | 53283-768 | Cut to length and bend by heating |
Very fine nylon netting | VWR | Various | |
15 watt bulbs | Hardware store | Overhead red light | |
Photographic red safe light filters | Overhead red light | ||
Mini Flashlights with red filters | Mag-light |