老化がん細胞を定量化するための感度の高い方法
Summary
老化は防止または腫瘍形成は議論の余地があるかどうかを促進。化学療法薬は老化するがん細胞を誘導することができるので、老化を研究する新しい治療法を提案するために不可欠である。ただし、標準化され広く使用されたβ-ガラクトシダーゼアッセイは、大きな欠点を提示します。我々はここで老化を定量化するための迅速かつ高感度フローサイトメトリーベースのアッセイを提案する。
Abstract
ヒトの細胞は無限に増殖しない。外部および/または内因合図すると、細胞が老化と呼ばれる安定した細胞周期の停止を死ぬか、または入力します。このようなテロメアの短縮やマイトジェン癌遺伝子の異常発現などのいくつかの細胞のメカニズムは、老化を引き起こすことが示されている。老化は、正常細胞に限定されず、癌細胞はまた、老化することが報告されている。
化学療法薬は、癌細胞の老化を誘導することが示されている。しかし、それは老化が防止または腫瘍形成を促進するかどうか議論の余地がある。それは最終的に患者固有のかもしれないような、癌細胞の老化を評価するための迅速かつ高感度の方法はすぐに必要とされる。
この目的のために、標準的なβ-ガラクトシダーゼアッセイを、現在使用されている方法は、主要な欠点を提示する。それは時間がかかり、敏感ではない。ここではリチウムの老化を研究するためのフローサイトメトリーベースのアッセイを提案セルをVEの。このアッセイは、感受性、迅速であるという利点を提供し、種々の細胞マーカーの免疫標識に結合することができる。
Introduction
60年代前半とヘイフリックとムーアによるその発見以来、老化はまだ携帯好奇心1のままです。ヒトの細胞は無限に老化によって、ヘイフリックとムーアは老化の細胞プロセスを造語、増殖しません。老化は、細胞死とは対照的に、細胞は代謝的に活性なままである、安定した細胞周期の停止である。テロメアの短縮、DNA損傷、クロマチン摂動、及びマイトジェン癌遺伝子の異常発現2：日付には、4つの細胞メカニズムは老化を誘導することが示されている。これは、正常細胞だけでなく、癌細胞だけでなく老化3を受けることができることを示している。実際のところ、老化を受けている癌細胞をさらに腫瘍進行4-5に対する障壁を構成することが示された。しかし、いくつかの報告は現在、特定の状況下で、細胞老化にも悪性6-7を促進することができる、と指摘している。癌CELの老化を研究現在使用されている化学療法薬はin vitroにおいてもin vivoで 8だけでなく、がん細胞の老化につながることができるようなLSは、がん研究の衝動になろうとしている。
老化細胞の存在を調査するマスターアッセイは、酸性pHでのβ-ガラクトシダーゼアッセイである。この組織化学的アッセイは最も老化細胞で発生するリソソーム生合成増加を反映している。簡潔には、細胞に適用外因X-galのは、青色9を生じる、老化細胞のリソソームに富むβ-ガラクトシダーゼによって切断される。青色老化細胞は、その後、明視野顕微鏡下で定量することができる。非常に人気があるが、β-ガラクトシダーゼアッセイは、大きな欠点を提示します。まず、このアッセイは、固定細胞上で実行される。それは顕微鏡下で老化細胞の有意に高い数をカウントすることによって老化の程度を定量化することを意味するので、第二に、それは時間がかかる。第三に、このアッセイ老化と非老化細胞の間に差別が完全にオブザーバーに依存しているとして区別されません。
我々はここに住んで老化細胞の存在を評価するために未開発の、迅速、かつ高感度メトリーベースのアッセイを話し合う。このアッセイは、膜透過性分子の加水分解、5 – dodecanoylaminofluoresceinジ-β-D-ガラクトピラノシド（C 12 FDG）に基づいて、β-ガラクトシダーゼによる老化細胞に富む。加水分解およびレーザー励起した後、C 12 FDGは、緑色の蛍光を発するため、フローサイトメトリー10,11で検出することができる。フローサイトメトリーを介した老化細胞の検出は、迅速かつ高感度であることの大きな利点を提供しています。また、フローサイトメトリーによる老化細胞の検出は、他の細胞マーカーの検出と結合することができる。このアッセイは、化学療法で処理した癌細胞の集団内で老化細胞を検出するために使用することができ、日常的に設定することができるまで組織切片上で、携帯解離後、診療所である。
Protocol
Representative Results
Discussion
我々はここに住んで、癌細胞における細胞老化を定量化するためのフローサイトメトリーベースの方法を提示した。この方法は、膜透過性化合物、C 12 FDGの使用に基づいており、化合物が細胞によって取り込まれているようので、任意の細胞型において及び限り、種々の処理後に使用することができる。細胞への取り込み時に、C 12 FDGは、老化細胞のリソソームに富んだβ-ガ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我々はサイトメトリー施設の使用のためにSF 4206 ICORE（カーン大学）に感謝。 JCは、バースノルマンディーのConseilのデ放射線防護D'EDFとConseilの地域からのポスドクフェローシップを受けた。 comesの複数形デロルヌエデュカルヴァドス – それらのデータはリーグ国立結界伤害防护结界ルがんによって資金を供給されたプロジェクトの一部であった。
Materials
| Name of the Reagent | Company | Catalogue Number | Comments |
| 5-dodecanoylaminofluorescein di-β-D-galactopyranoside | Invitrogen | D-2893 | |
| Dimethyl sulfoxide | Sigma | D2650 | |
| Bafilomycin A1 | Sigma | B1793 | |
| Doxorubicin | Sandoz | ||
| Trypan blue | Sigma | T8154 | |
| RPMI 1640 cell culture medium | Lonza | BE12-702 | |
| Fetal calf serum | PAA Laboratories GmBH | A15 101 | |
| Antibiotics | Gibco | 5290-018 | |
| Gallios flow cytometer | Beckman Coulter | A94291 |
References
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