वृद्ध होनेवाला कैंसर कोशिकाओं यों एक संवेदनशील तरीका
Summary
बुढ़ापा रोकता है या tumorigenesis के विवादास्पद बनी हुई है को बढ़ावा देता है. Chemotherapeutical दवाओं senesce को कैंसर कोशिकाओं को उत्पन्न कर सकते हैं, वार्धक्य का अध्ययन नए उपचारों के प्रस्ताव के लिए आवश्यक है. हालांकि, मानक और मोटे तौर पर इस्तेमाल β-galactosidase परख प्रमुख कमियां प्रस्तुत करता है. हम यहाँ बुढ़ापा यों के लिए एक तेजी से और संवेदनशील प्रवाह cytometry आधारित परख का प्रस्ताव.
Abstract
मानव कोशिकाओं को अनिश्चित काल के लिए पैदा करना नहीं है. बाहरी और / या आंतरिक संकेतों पर, कोशिकाओं को मरने या बुढ़ापा नामक एक स्थिर सेल चक्र गिरफ्तारी दर्ज कर सकता है. ऐसे telomere छोटा और mitogenic ओंकोजीन के असामान्य अभिव्यक्ति के रूप में कई सेलुलर तंत्र, बुढ़ापा कारण दिखाया गया है. बुढ़ापा सामान्य कोशिकाओं तक ही सीमित नहीं है, कैंसर कोशिकाओं को भी senesce करने के लिए सूचित किया गया है.
Chemotherapeutical दवाओं कैंसर कोशिकाओं में बुढ़ापा प्रेरित करने के लिए दिखाया गया है. हालांकि, यह बुढ़ापा रोकता है या tumorigenesis बढ़ावा देता है कि क्या विवादास्पद बना हुआ है. यह अंत में रोगी विशेष हो सकता है, कैंसर सेल में वार्धक्य का आकलन करने के लिए एक तेजी से और संवेदनशील विधि जल्द ही आवश्यक हो जाएगा.
यह अंत करने, मानक β-galactosidase परख, वर्तमान में इस्तेमाल किया विधि, प्रमुख कमियां प्रस्तुत करता है: यह समय लेने वाली और संवेदनशील नहीं है. हम यहाँ लिस्ट में बुढ़ापा अध्ययन करने के लिए एक प्रवाह cytometry आधारित परख का प्रस्तावकोशिकाओं ve. यह परख संवेदनशील, तेजी से होने का लाभ प्रदान करता है, और विभिन्न सेलुलर मार्कर के immunolabeling के लिए युग्मित किया जा सकता है.
Introduction
जल्दी साठ के दशक और हेफिलिक और Moorhead द्वारा इसकी खोज के बाद से, बुढ़ापा अभी भी एक सेलुलर जिज्ञासा 1 बनी हुई है. मानव कोशिकाओं को अनिश्चित काल के लिए बुढ़ापा द्वारा, हेफिलिक और Moorhead उम्र बढ़ने के सेलुलर प्रक्रिया गढ़ा, पैदा करना और नहीं है. बुढ़ापा सेलुलर मौत के लिए विरोध के रूप में कोशिकाओं metabolically सक्रिय रहते हैं, जिसमें एक स्थिर सेल चक्र गिरफ्तारी है. Telomere छोटा, डीएनए की क्षति, क्रोमेटिन गड़बड़ी, और mitogenic ओंकोजीन के असामान्य अभिव्यक्ति 2: तिथि करने के लिए, चार सेलुलर तंत्र वार्धक्य प्रेरित करने के लिए दिखाया गया है. यह है कि सामान्य कोशिकाओं को न केवल इंगित करता है, लेकिन यह भी कैंसर कोशिकाओं वार्धक्य 3 गुजरना करने में सक्षम हैं. तथ्य की बात के रूप में, बुढ़ापा दौर से गुजर कैंसर की कोशिकाओं को आगे ट्यूमर प्रगति 4-5 के लिए एक बाधा का गठन करने के लिए दिखाया गया. हालांकि, कई रिपोर्टों अब कुछ निश्चित परिस्थितियों में, सेलुलर senescence भी द्रोह 6-7 प्रोत्साहित कर सकते हैं, कि बाहर बताया है. कैंसर सेल का बुढ़ापा पढ़ रही हैरास वर्तमान chemotherapeutic दवाओं विट्रो में बल्कि विवो 8 में न केवल कैंसर कोशिकाओं की वार्धक्य को जन्म दे सकता है इस्तेमाल के रूप में कैंसर अनुसंधान के क्षेत्र में एक से आग्रह करता हूं बनने के बारे में है.
वृद्ध होनेवाला कोशिकाओं की उपस्थिति के लिए जांच करने के लिए मास्टर परख अम्लीय पीएच पर β-galactosidase परख है. इस histochemical परख सबसे वृद्ध होनेवाला कोशिकाओं में होने वाली लाइसोसोमल जीवजनन में वृद्धि को दर्शाता है. संक्षेप में, कोशिकाओं को लागू एक्सोजेनस एक्स लड़की, एक नीले रंग 9 को जन्म दे रही है, वृद्ध होनेवाला कोशिकाओं की लाइसोसोम में समृद्ध β-galactosidase द्वारा cleaved है. नीले वृद्ध होनेवाला कोशिकाओं को फिर एक उज्ज्वल क्षेत्र खुर्दबीन के नीचे मात्रा निर्धारित किया जा सकता है. बहुत लोकप्रिय है, β-galactosidase परख प्रमुख कमियां प्रस्तुत करता है. सबसे पहले, इस परख तय कोशिकाओं पर किया जाता है. यह एक खुर्दबीन के नीचे वृद्ध होनेवाला कोशिकाओं की संख्या काफी अधिक संख्या की गणना के द्वारा बुढ़ापा की डिग्री यों तात्पर्य दूसरा, क्योंकि यह समय लगता है. तीसरा, इस परखवृद्ध होनेवाला और गैर वृद्ध होनेवाला कोशिकाओं के बीच भेदभाव पूरी तरह से पर्यवेक्षक पर निर्भर करता है के रूप में संवेदनशील नहीं है.
हम यहाँ रहते वृद्ध होनेवाला कोशिकाओं की उपस्थिति के लिए मूल्यांकन करने के लिए एक unexploited, त्वरित, और संवेदनशील cytometry आधारित परख चर्चा की. यह परख एक झिल्ली पारगम्य अणु की hydrolysis, 5 dodecanoylaminofluorescein Di-β-डी galactopyranoside (सी 12 FDG) पर आधारित है, β-galactosidase से वृद्ध होनेवाला कोशिकाओं में समृद्ध बनाया. Hydrolysis और लेजर उत्तेजना के बाद, सी 12 FDG हरी प्रतिदीप्ति उत्सर्जन करता है और इसलिए प्रवाह cytometry 10, 11 से पता लगाया जा सकता है. प्रवाह के माध्यम से वृद्ध होनेवाला कोशिकाओं का पता लगाने के तेजी से और संवेदनशील होने का महान लाभ प्रदान करता है. इसके अलावा, प्रवाह cytometry से वृद्ध होनेवाला कोशिकाओं का पता लगाने के अन्य सेलुलर मार्करों का पता लगाने के साथ मिलकर किया जा सकता. यह परख कीमोथेरपी के साथ इलाज कैंसर कोशिकाओं की आबादी के भीतर वृद्ध होनेवाला कोशिकाओं का पता लगाने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है और नियमित रूप से निर्धारित किया जा सकता हैऊपर ऊतक वर्गों पर, सेलुलर हदबंदी के बाद, क्लिनिक में.
Protocol
Representative Results
Discussion
हम यहाँ रहते कैंसर की कोशिकाओं में सेलुलर senescence यों तो एक प्रवाह cytometry आधारित विधि प्रस्तुत किया. इस विधि झिल्ली पारगम्य परिसर, सी 12 FDG के उपयोग पर आधारित है, और मिश्रित कोशिकाओं द्वारा लिया जाता है इसलि?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम cytometry सुविधा के उपयोग के लिए एस एफ 4206 ICORE (Université डी कान) धन्यवाद. जे.सी. Conseil डे radioprotection डी EDF और Basse-Normandie की Conseil क्षेत्रीय से पोस्ट डॉक्टरेट फैलोशिप प्राप्त किया. Comités डे ल Orne एट डु Calvados – उन डेटा लीग नेशनल contre ले कैंसर द्वारा वित्त पोषित परियोजनाओं का हिस्सा थे.
Materials
| Name of the Reagent | Company | Catalogue Number | Comments |
| 5-dodecanoylaminofluorescein di-β-D-galactopyranoside | Invitrogen | D-2893 | |
| Dimethyl sulfoxide | Sigma | D2650 | |
| Bafilomycin A1 | Sigma | B1793 | |
| Doxorubicin | Sandoz | ||
| Trypan blue | Sigma | T8154 | |
| RPMI 1640 cell culture medium | Lonza | BE12-702 | |
| Fetal calf serum | PAA Laboratories GmBH | A15 101 | |
| Antibiotics | Gibco | 5290-018 | |
| Gallios flow cytometer | Beckman Coulter | A94291 |
References
- Hayflick, L., Moorhead, P. S. The serial cultivation of human diploid cell strains. Experimental Cell Research. 25, 585-621 (1961).
- Campisi, J., d’Adda di Fagagna, F. Cellular senescence: when bad things happen to good cells. Nature Review Molecular Cell Biology. 8 (9), 729-740 (2007).
- Shay, J. W., Roninson, I. B. Hallmarks of senescence in carcinogenesis and cancer therapy. Oncogene. 23 (16), 2919-2933 (2004).
- Bartkova, J., Rezaei, N. Oncogene-induced senescence is part of the tumorigenesis barrier imposed by DNA damage checkpoints. Nature. 444 (7119), 633-637 (2006).
- Takacova, S., Slany, R., Bartkova, J., Stranecky, V., Dolezel, P., Luzna, P., et al. DNA damage response and inflammatory signaling limit the MLL-ENL-induced leukemogenesis in vivo. Cancer Cell. 21, 517-531 (2012).
- Krtolica, A., Parrinello, S., Lockett, S., Desprez, P. Y., Campisi, J. Senescent fibroblasts promote epithelial cell growth and tumorigenesis: a link between cancer and aging. Proceedings of the National Academy of Sciences. 98, 12072-12077 (2001).
- Coppe, J. P., Patil, C. K., Rodier, F., Sun, Y., Munoz, D. P., Goldstein, J., et al. Senescence-associated secretory phenotypes reveal cell-nonautonomous functions of oncogenic RAS and the p53 tumor suppressor. PLoS Biology. 6, 2853-2868 (2008).
- Roninson, I. B. Tumor cell senescence in cancer treatment. Cancer Research. 63 (11), 2705-2715 (2003).
- Dimri, G. P., Lee, X., et al. A biomarker that identifies senescent human cells in culture and in aging skin in vivo. Proceedings of the National Academy of Sciences. 92 (20), 9363-937 (1995).
- Kurz, D. J., Decary, S., Hong, Y., Erusalimsky, J. D. Senescence-associated (beta)-galactosidase reflects an increase in lysosomal mass during replicative ageing of human endothelial cells. Journal of Cell Science. 113, 3613-3622 (2000).
- Debacq-Chainiaux, F., Erusalimsky, J. D., Campisi, J., Toussaint, O. Protocols to detect senescence-associated beta-galactosidase (SA-betagal) activity, a biomarker of senescent cells in culture and in vivo. Nature Protocols. 4 (12), 1798-1806 (2009).
- Cahu, J., Bustany, S., Sola, B. Senescence-associated secretory phenotype favors the emergence of cancer stem-like cells. Cell Death and Disease. Dec 20, 3-e446 (2012).
