Summary
Атеросклероз является хроническим воспалительным процессом. Эта рукопись иллюстрирует простой в использовании Экс Vivo модель для изучения свежий сонной или бляшки коронарных артерий. Экс естественных модель позволяет для исследования потенциальных веществ на воспалительной среде в атеросклеротических поражений и результатов человека могут быть проанализированы с помощью различных методов.
Abstract
Атеросклероз является хроническим воспалительным заболеванием сосудистой. Существуют различные методы для изучения воспалительный соединение в атеросклеротических поражений. Мышиные модели являются важным инструментом для расследования воспалительные процессы в атерогенеза, но эти модели страдают от фенотипических и функциональных различий между мышиных и иммунной системы человека. Экстракорпоральное сотовые эксперименты используются для специально оценить, зависящего от типа изменения в клетках, вызванные веществом интерес, но культура зависит от вариации и неспособность анализировать влияние специфических молекул в контексте воспалительного соединения в атеросклеротических поражений ограничить влияние результатов. Кроме того, измерения уровней интерес молекулы в крови человека помогает для дальнейшего расследования его клиническое значение, но это представляет системную, а не местное воспаление. Таким образом, мы здесь описываем модель доска культуры для изучения человеческого атеросклеротического поражения биологиюэкс естественных. Короче говоря, свежие бляшки получаются из пациентов, перенесших эндартерэктомия или аортокоронарное шунтирование и хранится в RPMI среде на льду до использования. Образцы нарезают на мелкие кусочки, после чего случайным распределением в 48-луночный планшет, содержащий среду RPMI в дополнение к интерес вещества, такие как цитокины или хемокины отдельности или в комбинации для определенных периодов времени. После инкубации налета части могут быть заморожены шок для выделения мРНК, заливали в парафин или октября для окрашивания иммуногистохимии или разбили и лизируют для вестерн-блоттинга. Кроме того, клетки могут быть выделены из бляшки для анализа проточной цитометрии. Кроме того, супернатанты могут быть собраны для измерения белка по ELISA. В заключение представлены экс естественных модель открывает возможность для дальнейшего изучения воспалительный поврежденной биологии, которая может привести к идентификации механизмов роман заболеваний и терапевтических целей.
Introduction
Атеросклероз как хроническое воспалительное заболевание является одним из основных причин смерти в промышленно развитых странах 1-2. Осложнения атеросклероза, особенно острых коронарных синдромов, были связаны с разрывом уязвимых поражений, в результате чего Атеротромбоз и окклюзии сосудов 3. Врожденного и адаптивного иммунитета видимому, участвуют во всех этапах атерогенеза 2,4-5. Несмотря на значительный прогресс был достигнут в лечении инфаркта миокарда, эффективной профилактики атеросклероза и неблагоприятных сердечно-сосудистых событий по-прежнему нерешенными. Таким образом, изучение поврежденной биологию имеет важное значение для увеличения нашего знания о патофизиологии атеросклероза и позволить идентификацию новых терапевтических целей и разработке новых видов лечения.
Во многих случаях, мышиные модели используются для изучения патофизиологии конкретных заболеваний. Однако, изучая атеросклероза с помощью модели мыши является АККОmpanied несколькими ограничениями: (1) Как правило, атеросклеротические мыши получают с высоким содержанием холестерина. Уровни холестерина в этих моделях не может сравниться с теми, у пациентов с повышенным уровнем холестерина в сыворотке крови 6. (2) Есть существенные различия между мышиных и иммунной системы человека; Таким образом, Foxp3 является специфическим маркером мышиных регуляторных Т-клеток, тогда как человеческий Foxp3 выражение в человеческих Т-клеток не обязательно придавать фенотип регулирующую 7. Кроме того, парадигма Th1/Th2, как это определено в организме человека не полностью перенести в мышиных Т-клеток. (3) количество маркеров, которые используются для идентификации мышиных моноцитов и макрофагов, такие как F4/80 и маркеров классической (M1) по сравнению с альтернативной (M2) картины активации не существует в миелоидных клетках человека 8. (4) экспрессии генов мышиных и человеческих моноцитов периферической крови было обнаружено, что существенно отличается 9.
Таким образом, в целях повышения нашего пониманияхронические воспалительные процессы в человеческом атеросклероза, мы должны сделать использование моделей, работающих с тканями человека, крови или клеток. Здесь мы описываем модель человеческой культуре доска ткани, что позволяет расследование потенциальных новых веществ в концепции человеческого воспалительного поврежденной биологии.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Подготовить среду следующим образом
- Культура Средний: RPMI среда.
- Добавить 10% эмбриональной телячьей сыворотки (FCS).
- Добавить 100 ед / мл пенициллина G и 100 мкг / мл стрептомицина.
2. Хранения свежего налета цилиндра до использования
- Операция каротидная эндартерэктомия пациентов с или без ишемических симптомов (инсульт, преходящей ишемической атаки) со значительным стенозом артерии сонной будет сделано сосудистых хирургов и эндартерэктомии коронарной артерии во время аортокоронарного шунтирования по кардиохирургов. Сонные / коронарные бляшки должны быть удалены целиком, чтобы сохранить структуру зубного налета, как описано выше 5.
- После налета месте экстирпация образец в средней заполнено трубы и хранить его на льду (доска не должна быть полностью покрыта среды) до использования.
3. Обработка доска
- Используйте адекватный блюдо культуры клеток (например, 60 мм)и добавить 5 мл RPMI среднего.
- Поместите зубного налета ткани в культуральной чашке (доска должна быть полностью покрыта среды).
- Удерживая зубного налета ткань тщательно по краям ткани с помощью стерильного пинцета.
- Отрежьте края образца бляшек с помощью стерильного скальпеля.
- Разделите налета ткани в два раза.
- Оценивать поражения морфологии макроскопически (кальцинированная, липидов богаты, разрыв, тромб, фиброз).
- Анализ точное налета морфологию после экс естественных условиях эксперимента иммуногистохимии. Используйте классификации AHA 10.
- Откажитесь бляшки с тяжелой кальцификации или фиброза.
- Обрежьте зубного налета ткани в гомологичных мелкие кусочки (3 х 3 х 3 мм).
- Шоковой заморозки два налета части и хранить их в жидком азоте для основных ценностей поражения до использования.
- Подготовка 48-луночный планшет с.
- Добавить 500 мкл RPMI среду в каждой лунке использовали для эксперимента.
- Пожалуйста, используйтет мере два налета штук для каждой группы.
- Добавить содержание интерес (например, специфических цитокинов и хемокинов).
- Используйте нестимулированных бляшек части в качестве контроля.
- Случайно посадить присвоил ряд бляшек штук в лунки.
- Культура из налета пьесы для указанных временных точках.
- Для бляшек ткани стимуляции эксперимента с липополисахарида (LPS)
- Используйте следующие моменты времени: 3 ч., 8 ч и 24 ч..
- Используйте 2 бляшек части для ЛПС и два для нестимулированной группы для каждой временной точке соответственно.
- Добавить 1 мкг / мл липополисахарида.
- Во время инкубации, поддерживать 48-луночный планшет при 37 ° С в увлажненной атмосфере воздуха, содержащего 5% СО 2.
4. После указанные время сбора урожая доска кусочки ткани
- Удар заморозить бляшек части для изоляции мРНК и синтеза кДНК (для подробной информации, см. протоцв раздел 5).
- Сбор супернатант и хранить его при температуре -20 ° С в течение анализа ELISA.
- Для вестерн-блоттинга, разбить и лизировать налета ткани. Фильтр лизата через 0,65 мкм и 0,1 мкм центробежной фильтрующего устройства.
- Вставить налета ткани в ткани-TEC или парафин для иммуногистохимических окрашивания.
5. Выделение РНК из культивируемых налета штук
- Используйте TissueLyser для гомогенизации.
- Изолировать РНК с использованием набора (см. таблицу материалов) в соответствии с инструкциями производителя.
- Определить количество РНК и качество образцов с спектрофотометра.
- Используйте комплект Boehringer кДНК для обратной транскрипции в соответствии с инструкциями изготовителя.
- Для количественной ПЦР, использовать, например Рош ПЦР в реальном времени комплект с SYBR Green.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Здесь мы представляем ряд фигур, которые демонстрируют результаты экс естественных бляшек культивирования. Для оценки изменений в воспалительной среде в ответ на агента интереса к экс естественных условиях модельного эксперимента, мы измеряем различные молекулы, которые, как известно, в основном занимается атерогенеза. Как представительных проатерогенных цитокинов мы выбираем TNFa, IL-6 и IFNg 2,11. Кроме того, мы используем фактор фон Виллебранда и тканевой фактор для оценки про-тромботических изменений. Кроме того, для решения развитие бляшек неустойчивости, вызванной агента интерес, матрицы metallopeptidase 9 (MMP9) уровни будут проанализированы. Chemoattractance также является важным шагом в прогрессии бляшки и регрессии 11, таким образом, мы исследуем уровни CCL2, также называемые хемотаксиса моноцитов белок-1 (МСР-1), принцип хемоаттрактанта для моноциты / макрофаги. После прокатки клеток привлечение клеток и адгезии являются следующие шаги.Из-за этого мы выбираем ICAM-1. При дальнейшем анализе сигнальных путей зависит от интересующего вещества мы используем внеклеточные-регулируемой киназы (ERK1 / 2), широко экспрессируется и активированный многими различными стимулами, такими как цитокины, апоптоз, дифференцировка, вирусные инфекции и лигандов для гетеротримерного г белка -рецепторов, сопряженных с 12.
Во-первых, мы показываем, зависящих от времени изменения воспалительного соединения нестимулированных культивируемых атеросклеротических поражений, проанализированные с помощью количественной реальном времени полимеразной цепной реакции (Qrt-ПЦР) (рис. 1). Во время налета культивирования, увеличение активности воспалительного поврежденной среде можно наблюдать. Никакой разницы не было обнаружено после 3 ч по сравнению с отсутствием культуры (данные не показаны). Через 8 ч бляшки культуры, мы обнаружили лишь незначительное повышающая регуляция некоторых молекул, таких как IL-6, но не ФНО а и IFN г, а после 24 часов, было регуляцияиз различных молекул, таких как TNF, IL-6 A и IFN г. Следует отметить, что чем больше время бляшки культуры тем выше изменение экспрессии молекулы.
Во-вторых, чтобы продемонстрировать возможность влиять на воспалительный среду, в атеросклеротических поражений, мы представляем результаты налета штук инкубировали с 1 мкг / мл ЛПС в течение 3 часов, измеренных Qrt-ПЦР (рис. 2). Нестимулированные налета штук служил в качестве отрицательного контроля . Мы обнаружили, что ЛПС индуцировал значительное увеличение степени активации воспалительного соединения внутри атеросклеротических поражений. Различные цитокины (IL6, TNF и т.п., 2А-В), хемокины (CCL2 и т.д., не показано), адгезия (ICAM1, не показана), зубной налет дестабилизирующий (Matrix metallopeptidase 9 (ММР9), не показан) и про- тромботические молекулы (фактор фон Виллебранда, Рисунок 2C, В-третьих, оценить белка изобилие, супернатанты культивируемых поражений были проанализированы ELISA и разбил бляшек тканей помощью вестерн-блоттинга (рис. 3D). На фиг.3А-С, показано, ELISA анализ IFN-G, MCP-1 и ФНО-в супернатанте культивируемых образцов, инкубированных с ЛПС или контролем в течение 8 час. Кроме того, вестерн-блот анализ для (фосфорилированным) ERK 1/2 разбитых и lysated налета тканей, либо стимулировали ЛПС или контроля, демонстрируется на рис 3D. 
Рисунок 1. Влияние бляшек культивирования на воспалительного поврежденной соединения с течением времени. Атеросклеротической бляшки части были немедленно шокировать замороженные или культивировали в течение 8или 24 часа в сутки и экспрессия указанных цитокинов IL-6 (А), IFN г (B) и TNF (С) анализировали с помощью Qrt-PCR. Результаты, показанные представляют собой среднее из пяти независимых экспериментов. Пять атеросклеротические штук поражение для каждой группы были использованы для указанной точке времени. Значения нормированы на б-актина и выражается в кДНК копий / 1000 б-актина экземпляров. Результаты представлены в виде коробки участков отображения среднее и 25-го и 75-го процентили как коробки и 10-го и 90-го процентили как усы. *: Р <0,01. 
Рисунок 2. LPS стимуляции культивируемых налета частей индуцированных увеличение различных воспалительных молекул. Налета частей инкубировали с 1 мкг / мл LPSили стимулированных в течение 3 часов и анализировали с помощью Qrt-PCR. Результаты, показанные представляют собой среднее из пяти независимых экспериментов. Были использованы две пьесы для каждой группы. Значения нормированы на б-актина и выражается в кДНК копий / 1000 б-актина экземпляров. Результаты представлены в виде коробки участков отображения среднее и 25-го и 75-го процентили как коробки и 10-го и 90-го процентили как усы. *: Р <0,01. 
Рисунок 3. Выражение белка в супернатанте культурного бляшки. Представитель ELISA измерения цитокинов ИФН-г (А), ФНО-а (В) и МСР-1 (C) в супернатанте налета штук обработанных LPS или нестимулированных на 8 ч показаны. Результаты, показанные представляют собой среднее из пяти независимых экспериментальныхц. Результаты представлены в виде коробки участков отображения среднее и 25-го и 75-го процентили как коробки и 10-го и 90-го процентили как усы. Кроме того, представитель Вестерн-блоттинг для (фосфорилированной ERK) 1/2 ЛПС стимулировали или контролировать культивируемые атеросклеротических поражений после 3 ч продемонстрирована на рис 3D. В баре колонка Графики, изображающие среднее + SEM, как усы представляют собой среднее из пяти независимых экспериментов. *: Р <0,01.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Здесь мы представим Экс Vivo модель культуры бляшек исследовать влияние потенциально соответствующих веществ на атеросклеротического поражения биологии. Основным преимуществом этого экс виво способа является возможность оценить влияние указанных веществ на воспалительных клеток и их клеточного взаимодействия, а также воспалительных путей и каскадов внутри атеросклеротических поражений человека. Несколько используемые методы (например, RT-PCR, вестерн-блот, иммуногистохимия, проточной цитометрии, ИФА) помогают обеспечить всесторонний анализ воздействия этого вещества на уплату процентов по атеросклеротического поражения воспаления.
Воспалительные процессы в мышиной атеросклероза хорошо понятны, также благодаря мышиных моделях сверхэкспрессирующих или отсутствуют некоторые гены, представляющие интерес 11. Однако результаты не всегда в точности соответствуют человека 6-9,13. Атеросклеротические мышей обычно получают патологический высокую Cholesterol диету 6. Кроме того, известно, что иммунные системы между людей и мышей показывают существенные различия 7-9. Здесь мы представляем Экс Vivo налета модель культуры, которая позволяет изучать влияние вещества интереса на воспалительную соединения в атеросклеротических поражений человека, как показано на Niessner др.. 14. Кроме того, различные дополнительные методы могут быть использованы для анализа результатов культуральной эксперимента бляшек, сопоставимый с исследованиях на мышах. Таким образом, экс естественных модель открывает возможность замены мышиного в естественных условиях исследования в некоторых случаях и может представлять отличную метод перемычки между предполагаемым атеросклероза, способствующего молекулу в мышиной системы и перевода в человеческой биологии.
Человеком экс естественных модель для атеросклероза не сравнима с в пробирке клеток экспериментов. Клеточные линии могут быть легко сохранены и культивируют, но фенотипически и фуnctionally не идентичны первичных клеток. Свежие клетки могут быть получены по обычной крови привлекает, но это иногда очень трудно их культуры и культуры подвергают многих факторов. Кроме того, с помощью в пробирке культивирования клеток эксперименты, это не возможно исследовать влияние специфических молекул на воспалительную соединения в атеросклеротических поражений. Таким образом, эксперименты в пробирке важны для начальной (поступательного) шаг для человеческой биологии исследований, но не для дальнейшего анализа роли интерес молекулы в концепции человеческого атеросклероза, особенно клеточного взаимодействия и влияния на воспалительные каскады и пути в пределах атеросклеротических поражений .
Монако и др.. Установили важную краткосрочную систему культуры клеток, выделенных из человеческой атеросклеротической ткани 15. Они использовали ферментативный смесь коллагеназы, эластазы и ДНКазы. Этот метод позволяет исследовать LESIрных эксперименты межклеточные, сигнализации анализ пути и переноса генов исследования с аденовирусных векторов. Но остается неизвестным, как ферментативная смесь влияет на клетки, т.е. град активации, поверхность экспрессия маркеров и т.д. Кроме того, она может быть поставлена под сомнение результаты этих экспериментов, отражают ли реальные процессы внутри атеросклеротических поражений. Кроме того, исходное расположение клеток будут уничтожены ферментативной смеси и краткосрочный система культура имеет те же ограничения, что и в пробирке клеток экспериментов.
Для определенных клеток или клеточной популяции исследований внутри атеросклеротическом поражении, можно использовать лазер захвата метод микро вскрытия. Клетки или клеточной интерес соединение будет вырезали из ткани с помощью инфракрасного или ультрафиолетового лазера и РНК, ДНК или анализ белка может быть выполнено. Лазерный захвата микро рассечение, кажется, не повредить клетки, то Expre рецептора поверхности клеткиssion и т.д. Преимущество способа является анализ ячейки или расположения внутри интерес атеросклеротическом поражении. Но это не можно дополнительно оценить клетки, такие как в пробирке исследования.
Экс естественных модель подразумевает широкий спектр возможных методов для измерения и анализа результатов. В режиме реального времени полимеразной цепной реакции может быть выполнена после выделения РНК и синтеза кДНК исследовать уровень экспрессии гена, как показано на Niessner соавт. 14. Иммуногистохимия является признанным инструментом для оценки уровня белка для того, чтобы доказать экспрессию белка и клеточное происхождение внутри атеросклеротических поражений. Вестерн-блоттинг могут быть использованы для анализа сигнальных путей. Кроме того, изолятор расщеплением в раствора фермента открывает возможность выступать проточной цитометрии анализа для дальнейшего анализа для типа экземпляра клеток, клеточных подтипов и степени активации. Кроме того, после выделения клетокspectratyping представляют хороший метод для дальнейшего анализа изменчивости Т-клеточного рецептора. Более того, после выделения пищеварение магнитного клеток является проверенным методом высокого качества разделения клеток конкретных сотовых подтипов для дальнейших исследований в пробирке или микрочипов анализа. Наконец, супернатанты могут быть собраны для измерения белка по ELISA. В заключение экс естественных модель является ценным инструментом для изучения точных изменений в воспалительной среде в атеросклеротических поражений человека.
Экс естественных модель основана на образцах эндартерэктомии. Использование атеросклеротические бляшки, полученные от разных людей может привести к большей степенью дифференциального клеточного состава и, таким образом, более высокой изменчивости уровней генов / белков, представляющих интерес. Таким образом, важно использовать богатой липидами или сложные образцы зубной налет, а не фибросклеротической поражений 10, так как воспалительный ответ заметно ниже в фибросклеротической lesioнс. Таким образом, это представляет большой интерес для оценки зубного налета морфологию, прежде чем анализировать результаты налета экспериментов культуры.
Кроме того, каждый образец образец включает в себя различные этапы атеросклеротического поражения развития / прогрессии, от начального эндотелиальной дисфункции и липидного шагом накопления, к жировые прожилки и развития некроза ядра к разорванных бляшек. Таким образом, чтобы свести к минимуму неоднородность ткани зубного налета, необходимо, чтобы сократить края, которые обычно представляют ранние стадии атерогенеза.
Она не может быть исключено, что режущая вызывает ткани ответов травмы. Но наши налета Культура ткани эксперименты показали сопоставимые уровни экспрессии генов из культивируемых налета тканей к не-культивируемых налета тканей. Таким образом, это подчеркивает, что нынешний метод является хорошим инструментом для расследования воспалительный среду в атеросклеротических поражений.
Культураналет частей ограничивается период времени до одного дня. Если налет ткань культивируют более суток, изменение результатов резко возрастает. Кроме того, после 3 дней состав зубной налет и морфология разрушается.
Существуют ограничения, которые должны иметь в виду, при применении этой модели. Экс естественных модель является хорошим методом для изучения воспалительный среду в атеросклеротических поражений. Тем не менее, основные компоненты отсутствуют в данном контексте. Нет гемодинамики особенности не применимы и системные влияния полностью отсутствует. Кроме того, с помощью этого метода можно только исследовать краткосрочные изменения, но не хватает долгосрочного анализа из-за распада бляшки морфологии.
В заключение, приведем здесь метод, который будет полезен для исследователей, которые заинтересованы в расследовании относительно потенциальных новых молекул на атеросклеротического поражения воспаления человека. Экс естественных доска сulture модель делает страдают от различий между мышиных и иммунной системы человека, но это дает нам возможность анализировать клеточную взаимодействие в контексте атеросклеротических поражений и представлять возможность исследовать местные поврежденной воспалительные каскады и пути. Экс естественных доска способ культивирования, описанный здесь, проста в использовании и является воспроизводимым и может помочь определить и утвердить механизмы новых заболеваний и терапевтические цели.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы не имеют никаких конфликтов раскрывать.
Acknowledgments
Мы благодарим Надин Wambsganss за отличную техническую помощь. Эта работа была поддержана Немецкого исследовательского фонда (DFG) ER 682/2-1 и исследовательской стипендии от немецкого общества кардиологов к С. Эрбель, а также научно-исследовательской стипендии от Германской службы академических Гейдельберге к Л. Чжао.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| RPMI medium | Gibco | 21875-091 | |
| FCS | Gibco | 10270-106 | |
| Penicillin-streptomycin | Sigma | P-4458 | |
| 15 ml Tube | Sarstedt | 62,554,502 | |
| Culture dish (60 mm) | Orange Scientific | 5550200 | |
| LPS | Sigma | L4516 | |
| Cell culture plates 48-well | Greiner | 677102 | |
| Scalpel - single use | Feather | FEA200130011 | |
| TissueLyser | Precellys 24 Dual | Cat. No. EQ03119.200.RD010.0 | |
| RNeasy (Mini) Kit | Qiagen | Cat. No. 74104 | |
| Boehringer cDNA kit | Roche Diagnostics | Cat. No. 11483188001 | |
| Nanodrop spectrophotometer | Thermo Fisher Scientific |
References
- Lusis, A. J. Atherosclerosis. Nature. 407, 233-241 (2000).
- Hansson, G. K., Libby, P. The immune response in atherosclerosis: a double-edged sword. Nat Rev Immunol. 6, 508-519 (2006).
- Virmani, R., Kolodgie, F. D., Burke, A. P., Farb, A., Schwartz, S. M. Lessons from sudden coronary death: a comprehensive morphological classification scheme for atherosclerotic lesions. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 20, 1262-1275 (2000).
- Erbel, C., et al. Expression of IL-17A in human atherosclerotic lesions is associated with increased inflammation and plaque vulnerability. Basic Res Cardiol. 106, 125-134 (2011).
- Erbel, C., et al. Functional profile of activated dendritic cells in unstable atherosclerotic plaque. Basic Res Cardiol. 102, 123-132 (2007).
- Bentzon, J. F., Falk, E. Atherosclerotic lesions in mouse and man: is it the same disease. Curr Opin Lipidol. 21, 434-440 (2010).
- Tran, D. Q., Ramsey, H., Shevach, E. M. Induction of FOXP3 expression in naive human CD4+FOXP3 T cells by T-cell receptor stimulation is transforming growth factor-beta dependent but does not confer a regulatory phenotype. Blood. 110, 2983-2990 (2007).
- Raes, G., et al. Arginase-1 and Ym1 are markers for murine, but not human, alternatively activated myeloid cells. J Immunol. 174, 6561-6562 (2005).
- Ingersoll, M. A., et al. Comparison of gene expression profiles between human and mouse monocyte subsets. Blood. 115, 10-19 (2010).
- Stary, H. C. Natural history and histological classification of atherosclerotic lesions: an update. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 20, 1177-1178 (2000).
- Galkina, E., Ley, K. Immune and inflammatory mechanisms of atherosclerosis. Annu Rev Immunol. 27, 165-197 (2009).
- Suganuma, T., Workman, J. L. MAP kinases and histone modification. J Mol Cell Biol. 4, 348-350 (2012).
- Libby, P., Ridker, P. M., Hansson, G. K. Progress and challenges in translating the biology of atherosclerosis. Nature. 473, 317-325 (2011).
- Niessner, A., et al. Synergistic proinflammatory effects of the antiviral cytokine interferon-alpha and Toll-like receptor 4 ligands in the atherosclerotic plaque. Circulation. 116, 2043-2052 (2007).
- Monaco, C., et al. Canonical pathway of nuclear factor kappa B activation selectively regulates proinflammatory and prothrombotic responses in human atherosclerosis. Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 5634-5639 (2004).
