Большеберцовой модели перерезки нерва хорошо переносятся, проверены, и воспроизводимые модели атрофии скелетных мышц. Модель хирургического протокола описаны и продемонстрированы в C57Black6 мышей.
Большеберцового нерва модель пересечение является хорошо переносимым, проверять и воспроизводимые модели индуцированную путем денервации атрофию скелетных мышц у грызунов. Хотя первоначально разработан и широко используется в крысу из-за его больших размеров, большеберцового нерва у мышей достаточно большой, что его можно легко манипулировать с помощью либо раздавить или рассечение, оставив малоберцовой и икроножной нервные ветви седалищного нерва нетронутым и тем самым сохраняя их мышцы цель. Таким образом, эта модель предлагает преимущества индуцировать меньше заболеваемости и препятствием к передвижению чем седалищного нерва модель рассечения, а также позволяет исследователям изучать физиологические, клеточные и молекулярные биологические механизмы, регулирующие процесс атрофии мышц у генетически модифицированных мышей. Большеберцового нерва поставляет икроножной, камбаловидной мышцы и подошвенной мышцы, так что его пересечение позволяет исследовать денервированного скелетных мышц состоит из быстрые волокна типа волокон II и / или замедленного типа I подергиваниеволокон. Здесь мы показываем, большеберцовой модели перерезки нерва в C57Black6 мыши. Мы определяем атрофия икроножных мышцах, как представитель мышцы, через 1, 2 и 4 недели после денервации мышцы путем измерения веса и типа волокна конкретной площади поперечного сечения на парафин гистологические иммуноокрашиванию для быстрого миозина подергивания.
Скелетные денервации мышцы, из-за травматического повреждения периферического нерва, болезнь или фармакологического вмешательства, приводит к немедленному потерю мышечной добровольный сократительной функции. Мышцы одновременно начинает атрофироваться и эта атрофия обратима, если своевременной, качественной реиннервация происходит 1,2. При отсутствии реиннервации, миофибрилл атрофии прогрессирует, и необратимые изменения биологических в мышце происходят с фиброз мышц и мышечных волокон смерти. Здесь мы показываем, большеберцовой модели перерезки нерва, модель денервацией индуцированной атрофии скелетных мышц и фиброза у мышей. Эта модель позволяет ученым изучать физиологические, клеточные и молекулярные биологические механизмы, лежащие в основе атрофии мышц в естественных условиях в икроножной и камбаловидной мышц. В то время как исторически использовались преимущественно в крысах, более поздние применение этой модели в нокаут и трансгенных линий мышей частности, позволяет исследователям оценить роль ихконкретный белок (белки), представляющие интерес в индукции, развитие и поддержание или, альтернативно, разрешение, атрофия мышц и фиброза в естественных условиях.
Большеберцовый нерв является смешанным моторно-сенсорной периферического нерва у грызунов задние конечности, и является одной из трех ветвей терминала седалищного нерва. Перерезка большеберцового нерва denervates икроножной, камбаловидной и подошвенной мышцы (и три маленьких глубоких мышц сгибателей стопы в том числе задней большеберцовой, длинного сгибателя пальцев и длинного сгибателя hallicus) и является хорошо стандартизацию и апробацию модели у крыс 3,4 . Икроножной и камбаловидной мышцы можно легко расчлененный на последовательные моменты времени после большеберцовой рассечения нерва, фиксировали и обрабатывали для оценки гистологии мышц и мышечных волокон морфометрии или быстро замораживали для извлечения мышц РНК и белка с целью изучения, например, клеточных сигнальных сетей регулирующих атрофию мышц. GAstrocnemius мышц является смешанным мышечного типа волокна (тип I и тип II, хотя преимущественно тип II) и камбаловидной мышце состоит из большую долю волокон типа I, тем самым обеспечивая быстрых и медленных мышечных за оценку 5,6. Большеберцовой модели перерезки нерва подходит для изучения процесса денервации атрофию мышц и в короткий срок (в днях) 7 и долгосрочные (от недель до месяцев) 4,8.
В отличие от модели седалищный нерв пересечение (вторая модель индуцированную путем денервации атрофию мышц, обычно используемые в грызунов), большеберцовой рассечения нерва вызывает меньше осложнений у животных, что делает его более привлекательным модели. Перерезка седалищного нерва denervates все мышцы ног (ниже колена) и ног, нарушая способность животного передвигаться на 2, тогда как перерезка большеберцового нерва оставляет малоберцовой и икроножной нервные ветви седалищного нерва нетронутым, что позволяет сохранитьих целевые мышцы и сенсорные территорий. Мыши не в состоянии подошвенной гибкого или инвертировать ногой, но способен передвигаться легко и веса несет одинаково с обеих задних конечностей, тем самым значительно уменьшая заболеваемость модели. Походка анализ исследований по оценке походки были выполнены у крыс после большеберцовой и седалищного нерва травм и продемонстрировать, что размеры и вес несущих лучше сохраняется с травмой голени 9,10. Кроме того, в большеберцовой модель рассечения нерва, малоберцовый нерв может быть мобилизован в более поздний момент времени и передается в качестве источника задержкой реиннервации, если исследование конструкция требует 3. В отличие от этого, задержка реиннервации в седалищный нерв модель пересечение требует использования нерва трансплантата на седалищный нерв дефицит, очень значительно увеличивает техническую сложность модели и ограничивает его использование для квалифицированных хирургов.
В то время как модель большеберцовой перерезки нерва Requires знакомство оператора стерильной оперативной техники в хирургии животных, как большеберцового нерва и икроножные мышцы Он иннервирует легко доступны и идентифицируемых для манипуляций, так что лица, не являющиеся хирургов или опытных животных с хирургией, может легко освоить эту модель .
Большеберцовой модели перерезки нерва денервацией индуцированной атрофии скелетных мышц является обычно используемым и хорошо проверенных модели у крыс. Мы адаптировали эту модель для использования в мышах, что позволяет следователю, чтобы воспользоваться наличием генетически мод?…
The authors have nothing to disclose.
Эта работа была поддержана грантами от CIHR исследований нервно-мышечной партнерства (JNM – 90959, для JAEB).
Reagents and Materials | |||
10-0 Nylon suture | Ethicon | 2850G | |
5-0 Vicryl suture | Ethicon | J553G | |
Equipment | |||
Spring microdissecting scissors | Fine Surgical Tools | 15021-15 | |
Ultra fine forceps | Fine Surgical Tools | 11370-40 | |
Non locking micro needle holder (driver) | Fine Surgical Tools | 12076-12 | |
Spring retractor | Fine Surgical Tools | 17000-02 |