Методика пересадки "Экстремальный Передней домен" лицевой ткани между Xenopus Laevis эмбрионы была разработана. Ткань может быть перемещен из одного гена фоне выражения в другую, что позволяет изучение местных требований к черепно-лицевого развития и для взаимодействия между регионами лица сигнализации.
Черепно-лицевые врожденные дефекты встречаются в 1 из каждых 700 родившихся живыми, но этиология редко известны в связи с ограниченным пониманием черепно-лицевого развития. Чтобы определить, где сигнальные пути и тканей действовать во паттерна развивающихся лице, методика "пересадка лица" была разработана в зародышах лягушки Xenopus Laevis. Область предполагаемого лицевой ткани («Экстрим Передняя Domain" (ЕАД)) удаляется из донорской эмбриона на стадии хвостовой почки, и пересадить к хост эмбриона одной сцене, из которого эквивалентна область была удалена. Это может быть использовано, чтобы генерировать химерный лицо, где хозяин или донор ткани имеет потерю или усиление функции в гене, и / или включает метку линии. После заживления, исход развития контролируется, и указывает роли сигнального пути в донора или окружающих тканях хозяина. Xenopus является ценным образцом для развития лица, так как регион лица большой и легкоccessible для микроманипуляций. Многие эмбрионы могут быть проанализированы, в течение короткого периода времени, так как развитие происходит быстро. В ходе проверки этой лягушки актуальны для развития человека, так как черепно-лицевые процессы появляются сохраняется между Xenopus и млекопитающих.
Чтобы понять механизмы, лежащие черепно-лицевые врожденные дефекты 1-2, важные ткани и их сигнальные взносов в течение черепно-лицевого развития должны быть определены. В лягушка Xenopus Laevis, части лица, в том числе полости рта и ноздрей форме от "Extreme Передняя Domain" (EAD), где эктодерма и энтодерма непосредственно примыкающего 3-4. EAD также действует как центр сигнализации влиять окружающие ткани, в том числе черепа нервного гребня, который образует челюсти и другие области лица 5. Чтобы идентифицировать гены, которые способствуют функции EAD, методика «пересадка лица" был разработан, где ткань пересаживается от донора в хозяйскую эмбриона, после удаления соответствующего хоста регион. После пересадки, в результате развития лица оценивается. Таким образом, эффекты потери функции (LOF) или усиления функции (GOF) для конкретного гена в EAD проанализированы на месте, где остальная часть чEAD и тело состоит из дикого типа ткани. Взаимное пересадка может быть выполнена, где дикого типа ткани пересаживается в эмбрионов с глобальной LOF или GOF в специфических генов. Трансплантация была часто используется в Xenopus и цыпленок изучает 6. Например, трансплантация Xenopus обратился homogenetic нейронной индукции, объектив и нейронной компетентность, и нервного гребня миграции 7-10. Перепела-цыпленок химерные прививки проанализировал развитие передней части нервной пластинки, передней части нервной хребта, нервного гребня и костей черепа 11-14. Это первый метод пересадки для изучения черепно-лицевого развития в Xenopus. Эта техника продемонстрировала новую роль ингибиторов Wnt Frzb1 и Полумесяца в регулировании образование базальной мембраны в презумптивной рта 5. Xenopus Laevis является идеальной моделью для изучения черепно-лицевого развития как эмбрионы большие, развивать внешне,й лицо хорошо видна, позволяя микроманипуляция и визуализации развития. Механизмы, лежащие в основе развития лица появляются сохраняется, указывая, что выводы, сделанные в лягушку обеспечить понимание человеческого развития 4,15-16.
Критические шаги и ограничения: Процедура трансплантации лица ЕАД время и работать интенсивно. Это требует практики, устойчивые руки, и ловкость, чтобы усовершенствовать. Протокол пересадка лица зависит от способности исследователя эффективного удаления и пересадки тканей. Если ?…
The authors have nothing to disclose.
Мы благодарим Radek Šindelka за помощь и Cas Bresilla для оказания помощи с лягушкой хозяйства и подготовки эмбриона. Эта работа финансировалась NIH через грант R01DE021109 к HLS Лаура Jacox финансировалось Гершель Смит стипендий в Гарвардском университете и F30 индивидуальный стипендии, F30DE022989-01 через NIDCR.
Pasteur pipette | VWR | 14672-400 | Lime Glass |
Size 5 3/4’’ | Cotton Plugged | ||
Disposable | |||
Graduated Transfer Pipette | VWR | 16001-180 | Disposable |
Polyethylene | |||
#5/45 forceps | Fine Science Tools by Dupont medical | 11251-35 | Angled 45 degrees |
Standard Pattern Forceps | Fine Science Tools | 11000-20 | Straight; serrated tip |
Stainless Steel; | |||
20cm long | |||
Capillary Tubing (for needles) | FHC | 30-30-1 | Borosil 1.0mm OD x 0.5mm ID/Fiber |
100mm each | |||
Cover slip | VWR | 48393 252 | 24x60mm |
micro cover glass | or | or | |
(for glass bridges) | 48393 230 | 24x40mm | |
No.1.5 | |||
Ficoll 400 | Sigma-Aldrich | F9378 | |
Needle Puller | Sutter Instrument Co | Needle Puller: discontinued Filament: FB300B | The most similar, currently available needle puller is the P-97. For filaments, use Sutter 3.00mm square box filaments, 3.0mm wide. |
Model P-80 | Flaming / Brown micropipette puller | ||
(discontinued) | |||
Stereomicroscope | Zeiss | ||
Zeiss Stemi 1000 | |||
Stereomicroscope Lighting by Fostec | Fostec | Use a light box with 2 fiberoptic arms. | |
Nickel Plated Pin Holder | Fine Science Tools | 26018-17 | Jaw Opening Diameter: 0 to 1mm |
Length: 17cm | |||
Moria Nickel Plated Pin Holder | Fine Science Tools | 26016-12 | Jaw opening Diameter: 0 to 1mm |
Length: 12cm | |||
Tungsten Needles | Fine Science Tools | 10130-05 | 0.125mm Rod diameter |
Van Aken Plastalina | Blick | #33268-2981 | |
Modeling Clay- white, red or yellow | |||
mMessage mMashine SP6 or T7 Kit | Ambion | AM1340 |