Summary
סמנים ביולוגיים הם אינדיקטורים ביולוגיים ישירות נמדדים של מחלה או בריאות. באוכלוסייה ובמדעי חברה, סמנים ביולוגיים צריכים להיות קל להשגה, תחבורה, ולנתח. אוסף ספוט דם יבש (DBS) עונה על צורך זה, יכול להיות שנאסף בתחום עם שיעורי תגובה גבוהים וניתח עבור מגוון רחב של סמנים ביולוגיים.
Abstract
סמנים ביולוגיים הם אינדיקטורים ביולוגיים ישירות נמדדים של מחלה, בריאות, חשיפות, או מידע ביולוגי אחר. באוכלוסייה ובמדעי חברה, סמנים ביולוגיים צריכים להיות קל להשגה, תחבורה, ולנתח. כתמי דם יבשים לענות על צורך זה, ויכולים להיות שנאסף בתחום עם שיעורי תגובה גבוהים. אלמנטים אלה חשובים במיוחד בעיצובי מחקר אורך כוללים התערבויות בי ההתשה היא קריטית להימנע, ושיעורי תגובה גבוהים ישפרו את הפרשנות של תוצאות. איסוף דגימת ספוט הדם יבש הוא פשוט, מהיר, ללא כאבים יחסית, פחות פולשנית ואז venipuncture, ודורש דרישות אחסון שדה מינימליות (כלומר דגימות לא צריכה להיות מייד קפוא והוא יכול להיות מאוחסן במשך תקופה ארוכה של זמן בסביבת מקפיא יציבה לפני assay). דוגמאות ניתן לנתח עבור מגוון רחב של analytes שונה, כוללים כולסטרול, חלבון מגיב C, המוגלובין מסוכר, ציטוקינים רבים, וoanalytes יס, כמו גם לספק חומר גנטי. אוסף DBS מתואר כמועסק בכמה מחקרים שנעשה לאחרונה.
Introduction
סמנים ביולוגיים יכולים לספק מידע רב ערך על תהליכים ביולוגיים הנעים בין נורמלי לפתוגניים שעשויות לתרום למחלה קלינית לזיהוי 1. בהגדרות מחקר, כתמי דם יבשים (DBS) הופכים להיות מועדפים יותר ויותר לvenipuncture כשיטה לאיסוף סמנים בדם כולו. אוסף DBS הוא פשוט, יחסית, ללא כאבים, פחות פולשניות אז venipuncture, ודורש דרישות אחסון מינימליות (כלומר דגימות לא צריכים להיות קפוא באופן מיידי והוא יכול להיות מאוחסן במשך תקופה ארוכה של זמן בסביבת מקפיא יציבה לפני assay). דגימות DBS ניתן לבדוק עבור מגוון רחב של analytes שונה, כוללים כולסטרול, חלבון מגיב C, המוגלובין מסוכר, נוגדני וירוס אפשטיין בר, וכמה ציטוקינים.
Venipuncture כבר זמן רב את תקן הזהב לאוסף של סמנים ביולוגיים בדם. עם זאת, קבלת, אחסון ומשלוח דגימות דם דורשת adherenCE למספר הפרוטוקולים וקודי בריאות, שלא יכול להיות אפשרית בפרוטוקולי מחקר מסוימים. מתרימי דם חייבים להיות מאושר באופן רשמי לvenipuncture, ואילו נהלי דגימת DBS הם פשוטים ואינו דורשים הסמכה רשמית. איסוף דם ורידים גם דורש יותר ציוד מאשר אוסף DBS (כלומר מחטים, צינורות, שערים מסתובבים), ומאמץ יותר פוסט אוסף. דגימות venipuncture חייבים להיות מעובד (כלומר בסרום או פלזמה המופק מדגימת הדם באמצעות צנטריפוגה או עומדים בטמפרטורת חדר למשך פרק זמן נתון) והקפוא בין -20 מעלות צלזיוס ו-70 ° C באופן מיידי על מנת למנוע ההידרדרות של analytes , ואילו דגימות DBS חייבת פשוט להיות מותרת לייבוש באוויר ולאחר מכן ניתן לאחסן בטמפרטורת חדר במשך שבוע או יותר, תלוי באנליטי, לפני ההעברה להקפאה 2. דגימות DBS הן פחות יקרות כדי לאסוף דגימות מ venipuncture לסיבות שתוארו לעיל. דגימות DBS גםתופס פחות מקום, הפחתת עלויות משלוח ואחסון לפני assay.
השימוש ברוק כסמן ביולוגי הפך מרכזי במחקרי biobehavioral. רוק מציע שיטה פשוטה, לא פולשנית לאסוף סמנים ביולוגיים והפך לסטנדרט לעבודת שטח שנועדה למדידת קורטיזול או קוטינין 3-5. שתן הוא דגימה נוספת שניתן לאסוף noninvasively וניתן להשתמש בו במחקרים ברמת אוכלוסייה למבחנים של מלטונין או לטוקסיקולוגיה. בעוד שני שתן ורוק מציעים ישר קדימה הליכי גבייה שיכולים להתבצע על ידי משתתפים עצמם, ניתן למדוד לא כל analytes בתקשורת אלה.
DBS מציע פשוט, חסכונית, אלטרנטיבה לvenipuncture והופך להיות כלי מחקר מיושם יותר ויותר בתחום ולימודי אוכלוסייה 6.
Protocol
הפרוטוקול הבא אושר על ידי דירקטוריון הסקירה המוסדי הישים ונערך בהתאם להצהרת הלסינקי.
1. לפני תחילת: רגיל Precuations
ודא כי כל צוות איסוף הדגימה חלפו NIOSH נדרש דם הנישא הפתוגן הדרכה (BBP).
- בקרה הנדסית
- שימוש מזון והתרופות אמריקניות אישרו לרשות מכולות חדות להיפטר מאזמלים לשימוש יחיד המשמשים סטרילי,. השתמש חבית biowaste כותרתו כראוי לכל חומר אחר שבא במגע עם חומר ואולי נגוע.
- אל תמלא יותר מדי מיכל החד. רק למלא מיכל חד עד 3/4 משרה לפני שתחליף את המכל כדי למנוע פגיעה. יש אינדיקציה למלאות compartmental על כל מיכל חד.
- להיפטר רק מחדים במכל החד. אל תשתמש במכל החד לכל otהפסולת שלה.
- השלך כל חומר nonsharp שבא במגע עם BBP פוטנציאל בקנה biowaste שכותרתו כראוי.
- ציוד מגן אישי (PPE)
- תמיד להשתמש כראוי PPE כדי להגן מפני זיהום מBBP. PPE משמש במהלך האיסוף של DBS כולל כפפות, חלוקי מעבדה, הגנה על העין, מכנסיים ארוכים ונעליים סגורות אצבעות.
- ללבוש כפפות כדי להתמודד עם דם או כל דבר שיצר קשר עם דם או חומרים אחרים שעלולים להיות מדבקים (OPIMs). כפפות לא צריכים להיות הדוקות מדי ולא רפויות מדי, מכיוון שהדבר עלול לעכב את התהליך של "חליבה" (שיתואר בהמשך). אל תלבשו טבעות תוך איסוף כתמי דם כפי שהם יכולים לנקב את הכפפה.
- ללבוש חלוק מעבדה כדי להגן על עור ובגדים מהדם וOPIMs. חלוק מעבדה שבא במגע עם BBP יש לבצע כביסה ב10% פתרון אקונומיקה / מים לפני שימוש חוזר. ללא קשר לחשיפה, חלוק המעבדה צריך להיות מכובס באופן קבוע כדי לשמור אותו גלהישען.
- ללבוש את נעליים צבאיות סגורות כדי להגן על רגליים מפני מגע אפשרי עם דם וOPIMs.
- אם תרצה, לחבוש משקפי מגן על מנת להגן מפני מגע אפשרי עם דם וOPIMs בשל מתיז.
- כדי לשמור על הניקיון של סביבת עבודה, להסיר את כל PPE לפני שעזבת את אזור העבודה, כדי למנוע זיהום פריטים מחוץ לאזור המעבדה.
- בקרת עיסוק עבודה
- שטוף את הידיים עם סבון ומים חמים ל20 שניות לפני ואחרי מגע פיזי עם כל אחד ממשתתפים. השתמש במגבת כדי לכבות את המים זורמים. אם כיור אינו זמין, להשתמש Sanitizer יד של אלכוהול לפחות 60%.
- ללא קשר להזדמנות לשטוף את הידיים, השתמש ביד אלכוהול Sanitizer לפני מריחה ולאחר הסרת כפפות. השתמש בחומר חיטוי מספיק כדי לכסות את כל פני השטח של שני הידיים ולשפשף את הידיים ביחד עד יבש. אין לשטוף או לנגב את הידיים במגבת כמו זה יהיה להפחית את היעילות של חומר החיטוי.
- אין לאכול אולשתות או להחיל עדשות איפור או מגע באזורי איסוף דם. חשיפה אישיות לBBPs יכולה להתרחש דרך נתיבים אלה, כי הם מסלולים ישירים לקרומים ריריים.
- לא להתמודד עם חומר ביולוגי מסוכן בלי כפפות ולא להתמודד עם חומר לא מזיק עם כפפות שנגעו בחומרים ביולוגיים מסוכנים בעבר.
- ניקיון נאות
ניהול משק בית טוב ימשיך לסייע בהגנה מפני חשיפה לBBP וימנע חוצי לזהם את הסביבה.- השתמש במגבוני חיטוי חיידקי virucidal לכראוי אזורים נקיים מזוהמים במהלך איסוף DBS.
- שמור ביולוגי מסוכן או פסולת מזוהמת בנפרד מאשפה רגילה; חומרים מזוהמים הם אלה שיש להם דם או OPIM גלויים עליהם.
- תגובת חשיפה
אם נחשף לBBP, להגיב באופן הבא.- שטוף את האזור החשוף באופן מיידי וביסודיות עם מים וסבון.פעולה מהירה יכולה להפחית את הסיכון לזיהום.
- לזהות את המקור ומסלול של החשיפה כדי להיות מסוגל להסביר את המצב למפקח השדה ו / או הרופא להגיב.
- הודע לממונה על שיחה מייד לאחר החשיפה מתרחשת. יודגש, כדי לקבל תמיכה ממפקח שדה כדי להבין את רמת הסיכון לזיהום ולכן ניתן להעריך אותו אם טיפול רפואי מיידי הוא הכרחי. הנחיות שהותוו בתוכניות ספציפיות בקרת חשיפה (ECPs) חייבים להינתן לכל אלה שנמצאים בסכנה של חשיפה לBBP.
2. הגדרה של חדר אוסף וחומרים
- בחר מדגם מיקום אוסף שאינו מיועד לאכילה, כגון breakroom, וכי הוא חופשי של כל ציוד הפרויקט שאינו קשור. אף אחד לא רוצה להיות באזור שהוא צפוף, זה חשוב לנו להקל על תנועה. הבא מתאר כיצד להגדיר את איסוף דם-spot המיובש (lאזור ab).
- הגדר את חבית הפסולת הביולוגית המסוכנת ומרפד את פנים עם שקית פסולת ביולוגית מסוכנת. חבית הפסולת צריכה להיות נגישה תוך כדי ישיבה.
- נקה את האזור ביסודיות עם אוסף מגבוני חיטוי או מוצר דומה. השלך את כל החומר המשמש כדי לנקות את אזור המעבדה בחבית הפסולת הביולוגית המסוכנת. ללבוש כפפות במהלך שלב זה כדי להגן על עור מחשיפה לכימיקלים מזיקים.
- להחליף כפפות ולהקים אספקת אוסף שנותרה.
- כפפות מקום ואלכוהול Sanitizer יד על שולחן האוסף.
- הנח את המכל החד בהישג יד של הכיסא של האספן. המכל החד יש לטפל בכפפות בכל העת ולאחר מכן להשליכם כהלכה כשמלא.
- מניחים את כל החומרים נותרים עבור אוסף DBS בunderpad מגן באזור הגבייה. כולל כרטיס אוסף נייר סינון, כמה אזמלים, רפידות אלכוהול, פדה גזה, ופלסטרים, אבל לא יותר מדי כדי שהאזור הוא עמוס. לעשותלא להגדיר יותר ממה שעשוי לשמש לכל משתתף.
3. Cellection דוגמא DBS
תמיד ללבוש PPE (מעבדה מעיל, כפפות, מכנסיים ארוכים, נעליים צבאיות סגורות ואם ארצה בכך, משקפי בטיחות) במהלך איסוף ומקום underpad מגן (chux) על הברכיים כדי להגן על בגדי הרחוב של אחד.
- הכנת המשתתף:
- לאחר קבלת הסכמה, לשאול את המשתתף אם הוא / היא מעדיפה להשתמש ביד ימין או השמאל לאוסף ובחר אצבע לאוסף. הימנע מאצבעות מיובלות או פגומות בכבדות (שסעו) וכל אצבעות טבעתיים. בדרך כלל הזרת והאגודל לא נבחרו כדי למזער את כאב משתתף ולהקל על איסוף, בהתאמה. הצדדים של קצות אצבעות משמשים כאתר האוסף לעקביות וקלות אוסף.
- האם המשתתף לשפשף את ידיהם יחד כדי לחמם את ידיהם ולהמריץ את זרימת דם. יד וואrmer עשוי לשמש, או המשתתף רשאי להפעיל את ידיהם במים חמים, אם כיור נגיש. טכניקה נוספת כדי להמריץ את זרימת דם תהיה לקבל המשתתף לסירוגין לאגרף ולהירגע היעד השני, ולאחר מכן לנוח באופן מלא לפני fingerstick.
- נקה את האצבע שנבחרה עם כרית אלכוהול והנח לו להתייבש באופן מלא. חזור על פעולה עם כרית אלכוהול שנייה כדי להסיר לחלוטין כל מזהם או קרם ידיים. האצבע חייבת להיות יבשה לחלוטין לפני שתמשיך עם מקל האצבע או האלכוהול יזהם את דגימת הדם. כמו עם כל חומרים המשמשים האוסף, מייד להשליך מגבוני האלכוהול במכל הפסולת הביולוגית המסוכן.
- הכנת האתר לנקב על האצבע של המשתתף:
- Secure זרועו של המשתתף כדי למנוע תנועה במהלך איסוף ולהירגע הזרוע ושרירי יד. לנוח המרפק של המשתתף בקצה השולחן או על ברכיהם. לשמור על יד קופה של המשתתףitioned בנוחות מתחת לרמת לב והשרירים שלהם רגועים כדי להקל על זרימת דם.
- לתפוס את האצבע נבחרה בין האגודל ואצבע מורה ובעדינות לחלוב את האצבע באיטיות ובתקיפות לסחוט את האצבע תוך כדי תנועת האחיזה מכף היד לקצה אצבעות כדי למשוך את הדם לכיוון קצה האצבע.
- לחץ על מיקרו-Lancet בתקיפות נגד האצבע של המשתתף בניצב לטביעת האצבע ולפרוק את האזמל. אין לנקב את המרכז של האצבע או בסמוך למיטת הציפורן, אלא לכוון בין שתי נקודות אלה, בצד האולנרי של האצבע. מייד להשליך Lancet בשימוש במכל החד.
- איסוף כתמי דם:
- נגב את טיפת דם הראשונה משם עם תחבושת סטרילית כדי להסיר את נוזל הרקמות מן המדגם ומייד להשליך את הגזה לתוך חבית הפסולת הביולוגית המסוכנת.
- תוך שמירה על ידו של המשתתף מתחת ללב שלהם עם זווית כלפי מטה, gently לחלוב את יד הזינוק בשורש כף היד ולעבוד עד לבסיס של האצבע כדי לייצר דם. האם לא פשוט לסחוט את האצבע, כמו זה יהיה להפחית את זרימת דם. לחלוב את האצבע עד טיפה גדולה תלויה מקצה האצבע.
- לאסוף נקודות באמצעות נייר האוסף.
- מקם בזהירות את נייר האוסף מתחת לאצבע ומאפשר הירידה לרדת מהמשקל שלה. זה מאפשר איסוף של כתמי דם של נפח מקסימאלי. אם בריכות דם על נייר הסינון, כלומר "חרוזים", לטפוח בעדינות את הכרטיס כדי לעודד את הדם כדי להרוות לתוך הנייר.
- אם הדם הוא צמיג מדי או טיפות קטנות מדי כדי ליפול מהמשקל שלהם, לאט להביא נייר האוסף במגע עם טיפת הדם כדי לספוג את הדם מהאצבע באמצעות פעולת נימים בלי לגעת באצבע. אם האצבע נוגעת בנייר האוסף, לעבור למקום אחר על הנייר כמו שאזור האוסף נפרץ. sho האצבע של המשתתףULD לעולם אין לגעת בנייר הסינון.
- אל תניח טיפות דם על גבי זו, גם אם נקודת דם לא למלא את מעגל האוסף.
- אל תתנו את הדם לרוץ במורד האצבע או על גבי הציפורן כמו זה הופך את האוסף של כתמים גדולים יותר קשה.
- אם הדם של משתתף קרישים כל עת במהלך תהליך האיסוף, לבקש רשות לדקור את האצבע אחרת, ולאחר מכן נקי ולחבוש את האתר לנקב הראשוני ולהתחיל מחדש אם הבקשה תתקבל.
- כדי למנוע קרישה, תמשיך לחלוב את האצבע של המשתתף כדי לשמור את הדם זורם או לנסות בתקיפות מנגבים את לנקב עם גזה סטרילית לשבש היווצרות קריש דם.
הערה: אצבע מקלות נוספים עשויים להיות נחוצים עבור כמה סיבות: חדר קר עלול לגרום לקרישה מהירה יותר; גם את צמיגות הדם של המשתתפים לא יכולה להיות אידיאלית, או טכניקות חליבה גרועות יכולות להשפיע גם על זרימת דם. מחממי יד, או מים זורמים חמים, המשמש לפני puncמכשור יכול להפוך את ההשפעה של חדר קר.
- כדי למנוע קרישה, תמשיך לחלוב את האצבע של המשתתף כדי לשמור את הדם זורם או לנסות בתקיפות מנגבים את לנקב עם גזה סטרילית לשבש היווצרות קריש דם.
- לאחר DBS כבר נאסף, או אם המשתתף לא רוצה אצבע מקלות שלאחר מכן, לנקות את האתר לנקב של כל דם זר.
- לחבוש את האתר לנקב על מנת למנוע זיהום פוטנציאלי ברגע שהמשתתף עוזב את אזור איסוף דגימה.
- FI בקרת איכות הערכה (QC):
עם השלמת איסוף דגימה, להעריך את הדגימות לאיכות. ודאו כתמים הם 1) לפחות 0.375 בקוטר כפי שנמדדו מהחלק האחורי של אזור האיסוף; 2) ספוג כראוי באמצעות נייר האוסף כדי להיות בגודל דומה בשני הצדדים של נייר הסינון, כתמים שאינם עומדים בקריטריון זה מצביעים אוסף באמצעות מגע של האצבע לנייר האיסוף וסביר להניח שמריחה; 3) אינו באות במגע אחד עם השני (שטחים חופפים של כתמים אינו assayable). - השלמת איסוף הדגימה
- gui הבאdelines המתואר בשלב 1.1, להיפטר מכל חומרי אוסף מזוהמים שנותרו, כולל כל פריטים שייתכן שהיו במגע עם חומרים שעלולים להיות מדבקים.
- סטנד נייר האוסף בunderpad מגן לייבוש. חלל כרטיסי האוסף כדי לאפשר זרימת אוויר טובה ביניהם. הסכום המינימאלי של זמן אוויר היבש הוא 15 דקות, רצוי לפחות 30 דקות. כדי לאפשר זרימת אוויר המרבית, חשוב לקפל את גב כרטיס האוסף בצורה שהוא יכול לעמוד באופן חופשי ולספק זרימת אוויר מאחורי דוגמאות על נייר האוסף.
- עם כל השלבים מלאים, להסיר PPE.
- תגובה לנושא קלוש תחושה או לא טוב
אמנם סביר, משתתף יכול להיות סחרחורת, סחרחורת, או קלוש במהלך או אחרי מקל האצבע. להיות ערניים לסימנים כגון חיוורון, זיעה על הפנים ומצח, תלונות על טשטוש ראייה, צניחה או לעפעף בעפעפיים, או תלונות של בחילה. התפרצות של tהסימפטומים hese הוא לעתים קרובות פתאומי; אספני מדגם חייבים להיות מוכנים להגיב במהירות אם באחת מהתופעות גלויות. אם כל התופעות הללו קיימים בכל נקודה במהלך ההליך, להגיב בהתאם לנהלים הבאים.- אם משתתף מרגיש חולשה, סחרחורת, סחרחורת, או מראה כל סימנים של עילפון, לבצע את הפעולות הבאות:
- לעצור את ההליך.
- תשמור על עצמך כי המשתתף אינו נופל או להיות פצוע.
- שלווה להרגיע את המשתתף ובמידת צורך, לשאול את המשתתף ללהתכופף במותניים ולשים את הראש שלו / שלה בין / רגליו שלה. אם הניידות היא מוגבלת ומשתתף ניתן להעביר, מיקום מרופד סמוך יכול לשמש כדי לנוח.
- יש את השאר המשתתף ל10 דקות.
- לחדש את ההליך אם הסכמות המשתתף כדי להמשיך.
- אם משתתף מתעלף, לבצע את הפעולות הבאות:
- לעצור את ההליך.
- לדאוג כיהמשתתף אינו נופל או להיות פצוע.
- יש שקר המשתתף על גב שלו / שלה מהר ככל האפשר עם רגליים מורמות. משתתפים יהיה הורה ישכב ישירות מהמצב של הישיבה ללא עמידה.
- שאל את המשתתף כדי לשחרר כל בגדים צמודים.
- יש את השאר המשתתף ל10 דקות.
- אוסף כתם דם לא צריך להמשיך.
- אם המשתתף אינו מגיב לאחר 1 דקות, להתקשר 911.
- אם משתתף מרגיש חולשה, סחרחורת, סחרחורת, או מראה כל סימנים של עילפון, לבצע את הפעולות הבאות:
- פירוק אזור המעבדה:
ברגע שהאוסף של כתמי דם הושלם, אזור האוסף חייב להיות שבור למטה והאזור לחטא לעשות שעוברות אורח אילוצים קודמים מסוימים לא יהיה נגוע בBBP. אזור איסוף הדם, מכולות הציוד, חומרי אוסף, ומיכלי פסולת חייבת להיות נקיים מBBP. כמו תמיד, ללבוש PPE בעת טיפול בחומרים שעלולים להיות מדבקים.- הסר מאזור האיסוף ואורז מחדש את כל החומרים מזוהמים.
- השלך כל חומרי פסולת מזוהמים שנותרו לתוך חבית biowaste.
- סגור את המכל החד ולאחסן אותו באזור שמספק הגנה מפני זיהום. אם המכל החד הוא 3/4 מלא, כראוי להיפטר ממנו ולהחליף עם מיכל חד חדש.
- נגב את אזור איסוף דגימה כולו עם מגבוני חיטוי חיידקי virucidal.
- ברגע שכל החומר הביולוגי המסוכן כבר ממומשים, יכולה להיות autoclaved שקית Biohazard. כאשר מוציא את השקית מחבית הפסולת, להיות זהיר לגעת רק את החלק החיצוני של התיק ולאטום את השקית בחוזקה. זה גם תרגול טוב לשימוש חיידקי virucidal מגבונים לניקוי החיצוני של כל הציוד למניעת זיהום צולב.
4. אימון לאיסוף DBS
ודא כל אספן נקודת דם יבש הוא מאושר על ידי אדם מוסמך לפני ביצוע proceדורה על חולים או נושאי מחקר. ודא אספנים להפגין כבוד למשתתפים, בטחון ומיומנות בשימוש בPPE ואספקת אוסף דם, באוסף של כתמים של נפח מספיק, ובהשלמת ההליך במועד ויעיל, באופן אידיאלי בתחת 10 דקות.
5. אריזה ואחסון מדגם
- ודא דגימות DBS התייבשו לדקות 15 מינימליות לפני שהם ארזו לאחסון, כרטיס רווי עשוי להימשך 30 דקות או יותר כדי יבשות במידה מספקת. סגור את מכסה כרטיס אוסף, כדי להבטיח את המדגם הוא יבש לחלוטין כדי למנוע מריחות ומזהם את המדגם.
- קח את שקית דגימת Biohazard ולמקם את שקיק יבוש לתוך שקית הדגימה. מניחים את מדגם DBS לתוך שקית דגימת Biohazard. תמיד ללבוש כפפות בעת טיפול דגימות די. אל תאפשר לדגימות הדם לגעת החיצוניות של תיק הדגימה.
- מניחים כל דגימה בשנינות תיק מדגם Biohazard שלהחה מנות יבוש. לשטח את השקית כדי להסיר אוויר עודף ואז לאטום את השקית בחוזקה. מניחים את המדגם ארז בצידנית אחסון להובלה או אחסון זמני. הימנע מטמפרטורות גבוהות.
- להקפיא או assay דגימות DBS בתוך שבועיים מאוסף, כמו דגימות DBS עשויות להיות מאוחסנות בדרך כלל בטמפרטורת חדר במשך שבועיים ללא השפלה משמעותית בהתאם אנליטי 7,2.
6. תחבורה לדוגמא ומשלוח
- אלא אם כן ידוע מכילים חומרים מזהמים, דגימות דם במקום ספינה יבשות כדגימות אנושיות פטורות לפי הוראות משרד תחבורה בארה"ב ובהתאם לחלק 2, פרק 6, § 6.3.2.3.6 של ההוראות טכניות של הארגון הבינלאומי לתעופה אזרחית (ICAO) 8 .
- אם קפוא, דגימות ספינת הלילה על קרח יבש עם אמצעי זהירות מיוחדת נדרש לחומרים מסוכנים, או עם gelpaks הקפוא ל-80 ° C. ספינה ביום שני, רביעיכדי להימנע מהפשרה במעבר בשל עיכובים או בסופי שבוע / חגים, עם אישור מהאתר המקבל שהם מצפים ומוכנים לקבל ולהקפיא דגימות.
7. הערכת בקרת איכות
- בעקבות איסוף ולפני assay (רצוי לפני ההקפאה על מנת לצמצם את מספר להקפיא להפשיר מחזורים) להעריך דגימות עבור איכות.
- כולל את הקריטריונים הבאים בהערכה של איכות מדגם, אריזה נכונה, יבוש בצבעים שנותרו ללא פגע (יבש), הרוויה של כתמים, גודל של כתמים, שיטות לאיסוף נכונה כולל כתמים אינם חופפים או מרוח על כרטיס המציין מגע עם אצבע נושא.
8. מקפיא אחסון
למרות שפעמי השפלה שונות בכל אנליטי, להקפיא דגימות DBS בתוך שבועיים גבייה לתוצאות הטובות ביותר. להקפיא דגימות עם יבוש במקפיא כיתה מעבדה. כמו בכל דגימה ביולוגית, למזער להקפיא להפשיר גycles, אם כי כמה מבחני בדגימות DBS הראו שום עדות להידרדרות בעד שישה להקפיא להפשיר מחזורים 9-11.
Representative Results
מדגם איור 1. יבש דם במקום. כרטיס אוסף מוצג עם ארבעה, כתמים שנאספו בתוקף בתהליך של ייבוש. לחץ כאן לצפייה בתמונה גדולה יותר.
דגימות איור 2. טוב ורע מיובשות במקום דם. תוצאות מוצלחות אוסף DBS (מימין) ולא מוצלח (משמאל) מוצגות. לחץ כאן לצפייה im הגדול יותרגיל.
איור 3. גישות ונהלים הקשורים לסיכון למחל הקרדיו עובד 6 מנהלים. נתון זה שונה מברקמן, LF, בקסטון, OM, ארטל, ק & Okechukwu, הפרקטיקות של ג המנהל קשורות לעבודה, משפחת איזון לחזות לב וכלי דם לעובדים סיכון ומשך שינה במסגרות טיפול ממושכים. כתב העת של בריאות תעסוקתית פסיכולוגיה 115, 316-329 (2010). עובדים חשופים למנהלים עם ציוני עבודה למשפחה באמצע או נמוכים של פתיחות ויצירתיות שעזרו עם העבודה של העובדים שלהם ואת הצורך של משפחה, יש סיכויים מוגברות משמעותיים מבחינה סטטיסטית שיש שתיים או יותר סיכוני לב וכלי דם (מעשן הנוכחי, השמנת יתר, לחץ דם גבוה או ההייפrtension, כולסטרול גבוה, והמוגלובין גבוה מסוכר (A1C המוגלובין) או אבחון סוכרת). לוחות העליונים ואמצעיים מתארים ערכים ממוצעים ± סטיית תקן לכולסטרול כללי שהוערך על ידי כתם דם יבש וA1C המוגלובין הוערך על ידי נקודה של מכשיר טיפול (אשר יכולים להיות גם מדידה באופן מהימן על ידי כתמי דם יבשים). פנל תחתון מראה את סיכון למחל לב וכלי דם על ידי ציון מנהל. ניתוח המוגבל לאחיות ועובדים אחרים מתן טיפול ישיר מצביע על כך שחשיפה למנהלים עם יצירתיות ופתיחות נמוכות בנושאים הקשורים לעבודה, בני משפחה עשויה להיות חשובה במיוחד עבור אנשים אלו (או לציון WF נמוך = 6.4, p = 0.01). כל הדגמים לשלוט על גיל, מין, שכר, חינוך, גזע / מוצא אתני, ואתר עבודה. לחצו כאן לצפייה בתמונה גדולה יותר.
Discussion
סמנים ביולוגיים הם כלים מאוד שימושיים על פני תחומים רבים, ובם רפואה, ביולוגיה של תא, גנטיקה, פסיכולוגיה, סוציולוגיה, דמוגרפיה, ואפידמיולוגיה חברתית. בתוך כל דיסציפלינה, מחקר סמן ביולוגי תוקף השלב המוקדם ואמינות היה בשימוש כדי לחשוף גם את סיכון למחלות נסתרות ומספק תחזית ארוכת טווח של תוצאות בריאותיות. במקרים אלה, סמנים כי הם מדויקים, עמידים (כלומר הם יכולים לשרוד את הפער בין איסוף דגימה ויישום של assay המעבדה כדי לחלץ את הסמן הביולוגי), ותכליתי (כלומר שימושי במגוון רחב של דגמים) נדרשים.
בעוד אוסף DBS הוא הליך פשוט יחסית, כמה טכניקות יכולות לעזור למקסם את עוצמת הקול של נקודות שנאספו. לפני האוסף מתחיל, על מנת להבטיח את היד של משתתף הוא חם, ולכן שכלי דם מורחבים, יסייע בזרימת דם ברגע שהאצבע הוא ניקב. שימוש במחממי יד או שישמשתתף להפעיל את ידיהם במים חמים יכול לעזור בתהליך זה. חליבת האצבע לפני האוסף תמשוך דם לקצה האצבע ולחמם את היד כדי לעזור את זרימת דם. חליבה היא תהליך שמשתפר עם תרגול. אספן צריך להשתמש בכל טכניקה הם מוצאים נוחים ויעילים ביותר, אך הגישה הנפוצה ביותר כרוך בחליבת היד של המשתתף עם היד הנגדית של האספן. שיטה זו תאפשר לאגודל של האספן לעבודה עמוקה לתוך כף ידו של המשתתף ואילו היד הנגדית יכולה לייצב פרק כף היד של המשתתף. כדוגמא, אם אחד היה איסוף דם מאצבע ביד השמאל של המשתתף, האספן יתייצב פרק כף היד של המשתתף עם יד השמאל שלהם וחלב עם יד הימין שלהם. טעויות נפוצות שנעשו על החליבה ואילו לא כוללת שימוש אחיזה איתנה, מושכת את העור מעל היד ולא עובדת בשרירים כדי למשוך את הדם לכיוון קצה האצבע. כמו כן, חשוב להימנע מסיכהצ'ינג האצבע בחליבה ביד או בחוזקה אוחז בשורש כף ידו של המשתתף עם nonmilking היד, אשר שניהם לעכב את זרימת דם.
כאשר ניקוב האצבע, להפיק את לנקב עמוק ככל האפשר על ידי הלחיצה בחוזקה Lancet לאצבע לפני השחרור. לנקב רדוד תוצאות בפחות זרימת דם וקרישה מהירה יותר. לאחר ניקוב האצבע, עובד במהירות הוא מפתח. דם דק מוביל לאוסף וכתמים גדולים יותר קלים יותר. לאחר ניקור, הדם הופך להיות יותר וצמיג יותר עד קרישה. פחות הזמן הדרוש כדי לאסוף כתמי דם על הכרטיס גדול יותר את נפחן.
באופן אידיאלי הדם של המשתתף יהיה דק מספיק כדי שהטיפין ייפלו מהמשקל שלהם, אבל זה לא יהיה המקרה עבור כל המשתתפים, כמו הדם של אנשים מסוימים הוא עבה יותר או קרישים מהר יותר מאחרים. אם הדם הוא עבה מדי כדי ליפול מהאצבע, כרטיס המסנן יש להביא את הדם לאוסף. מה עלי לעשותen להביא את הכרטיס לדם חשוב להחזיק את הכרטיס במגע עם הטיפה בזמן שהוא תלוי מהאצבע כל עוד אפשרי, ולא רק מספיג את הדם לכרטיס. זה יעזור לי דם למשוך מהאצבע כדי למקסם את הגודל של המקום. טכניקה זו דורשת ידיים יציבים כדי לשמור על קשר בין הדם ואת הכרטיס. שימוש בשתי הידיים, אחת כדי לייצב את משתתפי יד ואחד להחזיק בכרטיס, ושמירה על שני הידיים במגע אחד עם השני עוזרת לייצב את הכרטיס והדם ביחד.
תחומי מחקר מתקדמים, כגון הערכת סיכון הקרדיו, יש לסמוך ארוך על סמנים ביולוגיים כגון C-reactive protein (CRP), אינסולין, וההמוגלובין מסוכר (HbA1c) לגילוי מוקדם סיכון ואת מאמצים למניעה, כמו גם סמנים ביולוגיים של "נקודות קצה קשות" למחלת לב וכלי דם סיכון (CVD) ותמותה הקשורים CVD 12. אפידמיולוגיה קלינית לעתים קרובות מעריכה סמנים ביולוגיים לprospectively לחזות תוצאות סיכון הקרדיו כגון מחלות לב וסוכרת מסוג II. אולי בשימוש נרחב ביותר של כל הסמנים הביולוגיים הוא ציון סיכון פרמינגהם, מרוכבים הכוללים לחץ דם, רמות כולסטרול HDL ורמות כולסטרול כוללת שהוכיח תועלת בניבוי CVD 13. עם זאת, ציון פרמינגהם חווה כמה מחלוקות טכניות, ויש לו מגבלות במחקרים התמקדו בקישור בין גורמים חברתיים וסביבתיים לבריאות, דבר המצביע על הצורך בסמנים יותר מדויקים וספציפיים הקשורים למחקר לב וכלי דם.
ישנן מספר ערכות זמינות מסחרי באמצעות ELISA או בטכניקות דומות זמינות עבור assay של דגימות די. הכרחי עבור assay של דגימות DBS הם השימוש בצעדי elution ספציפיים ומותאמים להביא דגימות מיובשות לפתרון 2. מדובר בשטח הרחבת של מחקר כמבחנים ליותר analytes כרגע בשלבי הפיתוח 1. בין המבחני דואר כבר תוקף ונמצא בשימוש נרחב הם כולסטרול 2, CRP 10,14,15, IgE16, EBV 9,15, לפטין 17, וcyotkines 18. ישנן מספר המעבדות המתמחות בassay של DBS, כולל מחלקת אוניברסיטת וושינגטון של מעבדה לרפואה (באוניברסיטת וושינגטון מעבדת Med) המעבדה סמנים ביולוגית (במאי: מארק Wener).
בהתחשב בכך שפנל של סמנים ביולוגיים, ולא סמן ביולוגי בודד, הוא שימושי ביותר בתחומי מחקר לב וכלי דם וסוכרת, סמנים ביולוגיים צריכים להילקח בחשבון יחד עם מגוון רחב של גורמים קונטקסטואליים על מנת למקסם את התועלת שלהם. מחקר סמן ביולוגי יכול להיות יקר עם זאת, הן מבחינה כלכלית והן בזמן לאיסוף נתונים. וכך, בעוד היא חיונית כדי לבחור סמנים כי הם מדויקים, עמידים, תכליתי, מחקר סמן עבודה והמשפחה חייב להיות מושרש במעשיות על ידי בחירת סמנים כי הם לא יקרים, מתאימים, ויכול להיות שנאסף במהירות wiקלות ה. יתר על כן, שיקולים מעשיים לעתים קרובות לגרום לאי יכולת למקסם את בו זמנית מחיר, איכות והמהירות בהליך אחד. במסמך זה לשקר את הצעדים הבאים במחקר סמן ביולוגי בריאות במחקרי שדה ואוכלוסייה. תחום מחקר סמן נמצא כעת בתקופה של צמיחה דרמטית, עם זאת, את רוב העבודה הוא עדיין לבוא.
Disclosures
Orfeu קסטון קיבל מענק ביוזמת חוקר מSepracor Inc (החברה Sunovion; ESRC-0977, ClinicalTrials.gov מזהה NCT00900159); משמש כיועץ ומומחה עדים לDinsmore LLC, במועצה המייעצת המדעית של Matsutani אמריקה, וקיבל ייעוץ עמלות משרות המרכז רפואי של אוניברסיטת יער.
Acknowledgments
עבודה זו נתמכה על ידי העבודה, המשפחה ובריאות ברשת (www.WorkFamilyHealthNetwork.org), אשר ממומנת על ידי הסכם שיתוף פעולה דרך מכוני בריאות הלאומיים ואת המרכזים לבקרת מחלות ומניעתן: מכון יוניס קנדי שרייבר הלאומי לבריאות הילד ופיתוח אנושי (גרנט # U01HD051217, U01HD051218, U01HD051256, U01HD051276), מכון לאומי להזדקנות (גרנט # U01AG027669), משרד של התנהגות ומחקר מדעי מדע, הלאומי ללב, ריאות ודם מכון (R01HL107240), ומכון הלאומי לעיסוק בטיחות והבריאות (גרנט # U01OH008788, U01HD059773). מענקים מקרן ויליאם ט 'גרנט, אלפרד סלואן קרן P, והמנהל לילדים ומשפחות סיפקו מימון נוסף. את תוכנו של פרסום זה הוא באחריות בלעדית של הכותבים ואינו בהכרח מייצג את הדעות הרשמיות של מוסדות ומשרדים אלה.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Asepti II Microbial Wipes | EcoLab | D12330345 | 3rd party shipping |
| Biohazard waste bags | VWR | 14220-092 | High Strength Autoclavable Polypropylene Biohazard Bags, 2 mil |
| Biohazard waste barrel | Tyco | 58578-092 | 8 g Slide lid |
| Sharps Container | BD Medical | BD305487 | 1.4 qt |
| Chux | VWR | 82020-845 | Absorbent bench underpads |
| Gloves | VWR | XSmall: 89038-267 | Powder-free, latex-free nitrile gloves |
| Small: 89038-268 | |||
| Medium: 89038-270 | |||
| Large: 89038-272 | |||
| XLarge: 89038-274 | |||
| Hand sanitizer (e.g. Purell) | Johnson Johnson | 89040-210 | 3rd party shipping |
| Alcohol wipes | Webcol and Curity | 82003-856 | Prep pads |
| Gauze | Versalon | 82004-826 | Nonwoven sponges |
| Band-Aids | Nutramax Stat Strips | 15431-475 | |
| Lancets | Owen Mumford | 82028-060 | 3.0 mm, 21 G |
| Protein paper collection cards | Whatman | Custom-build | 903 Protein Saver Collection paper |
| Desiccant | VWR | 61161-319 | Humidity sponges |
| Specimen bags | Lab Guard Reclosable Biohazard Bags, ITW Minigrip | 56766-370 | 6 in x 9 in |
| Specimen storage cooler | Igloo | Playmate Mini | 4 qt; direct from manufacturer |
References
- McDade, T. W., Williams, S., Snodgrass, J. J. What a drop can do: dried blood spots as a minimally invasive method for integrating biomarkers into population-based research. Demography. 44, 899-925 (2007).
- Kirschbaum, C., Read, G. F., Hellhammer, D. H. Assessment of hormone and drugs in saliva in biobehavioral research. , Hogrefe & Huber Publishers. (1992).
- Piazza, J. R., Almeida, D. M., Dmitrieva, N. O., Klein, L. C. Frontiers in the use of biomarkers of health in research on stress and aging. J. Gerontol. Series B Psychol. Sci. Soc. Sci. 65, 513-525 (2010).
- Smyth, J. M. Individual differences in the diurnal cycle of cortisol. Psychoneuroendocrinology. 22, 89-105 (1997).
- Berkman, L. F., Buxton, O. M., Ertel, K., Okechukwu, C. Manager's practices related to work-family balance predict employee cardiovascular risk and sleep duration in extended care settings. J. Occup. Health Psychol. 115, 316-329 (2010).
- Buxton, O. M., Malarick, K., Wang, W., Seeman, T. Changes in dried blood spot Hb A1c with varied postcollection conditions. Clin. Chem. 55, 1034-1036 (2009).
- McDade, T. W. Epstein-Barr virus antibodies in whole blood spots: a minimally invasive method for assessing an aspect of cell-mediated immunity. Psychosom. Med. 62, 560-567 (2000).
- McDade, T. W., Burhop, J., Dohnal, J. High-sensitivity enzyme immunoassay for C-reactive protein in dried blood spots. Clin. Chem. 50, 652-654 (2004).
- McDade, T. W., Shell-Duncan, B. Whole blood collected on filter paper provides a minimally invasive method for assessing human transferrin receptor level. J. Nutr. 132, 3760-3763 (2002).
- Gerszten, R. E., Wang, T. J. The search for new cardiovascular biomarkers. Nature. 451, 949-952 (2008).
- D'Agostino, R. B., Grundy, S., Sullivan, L. M., Wilson, P. Validation of the Framingham coronary heart disease prediction scores: results of a multiple ethnic groups investigation. J. Am. Med. Assoc. 286, 180-187 (2001).
- McDade, T. W., Rutehrford, J., Adair, L., Kuzawa, C. W. Early origins of inflammation: microbial exposures in infancy predict lower levels of C-reactive protein in adulthood. Proc. R Soc. B.. , (2009).
- McDade, T. W. Measuring Stress in Humans. A Practical Guide for the Field. Ice, G. H., James, G. D. , Cambridge University Press. 181-207 (2007).
- Tanner, S., McDade, T. W. Enzyme immunoassay for total immunoglobulin E in dried blood spots. Am. J. Hum. Biol. 19, 440-442 (2007).
- Miller, A. A., Sharrock, K. C., McDade, T. W. Measurement of leptin in dried blood spot samples. Am. J. Hum. Biol. 18, 857-860 (2006).
- Miller, E. M., McDade, T. W. A highly sensitive immunoassay for interleukin-6 in dried blood spots. Am. J. Hum. Biol. , (2012).
