Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

Sağlık Biyomarkörler Kan Toplama Noktası Nüfus Etütleri Katılımını özdeyiş Kurutulmuş

Published: January 28, 2014 doi: 10.3791/50973

Summary

Biyomarkerler hastalık veya sağlık direkt ölçülen biyolojik göstergelerdir. Nüfus ve sosyal bilimlerde, biyolojik belirteçler, taşıma elde etmek kolay, ve analiz etmek gerekir. Kurutulmuş Kan Noktası (DBS) koleksiyonu bu ihtiyacını karşılayan, yüksek yanıt oranları ile alanda toplanan ve biyomarkerler çeşitli analiz edilebilir.

Abstract

Biyobelirteçler hastalık, sağlık, pozlama, veya diğer biyolojik bilgilerin doğrudan ölçülen biyolojik göstergelerdir. Nüfus ve sosyal bilimlerde, biyolojik belirteçler, taşıma elde etmek kolay, ve analiz etmek gerekir. Kurutulmuş Kan Spotlar Bu ihtiyacı karşılamak ve yüksek yanıt oranları ile alanda toplanabilir. Bu elementler yıpratma önlemek için kritik müdahaleler de dahil olmak üzere uzunlamasına bir çalışma tasarımları özellikle önemlidir, ve yüksek yanıt oranları sonuçların yorumlanmasını geliştirmek. Kurutulmuş Kan Nokta numune toplama sonra Damara, basit, hızlı, nispeten ağrısız, daha az invaziv ve minimal alan depolama şartları gerektirir (yani numuneleri derhal dondurulmuş olması gerekmez ve istikrarlı bir dondurucu bir ortamda önce uzun bir süre saklanabilir tahlili). Numuneler, kolesterol, C-reaktif protein, glikozile hemoglobin, çok sayıda sitokin, ve o dahil olmak üzere farklı analit, çok çeşitli analiz edilebilirorada analitler, hem de genetik malzeme sağlar. Birçok yeni çalışmalarda istihdam gibi DBS toplama tasvir edilir.

Introduction

Biyomarkerler normal klinik olarak tanımlanabilir hastalığına 1 katkıda bulunabilir patojenik değişen biyolojik süreçler hakkında değerli bilgiler sağlayabilir. Araştırma ayarlarında, kurutuldu, kan lekeleri (DBS) tam kan biyomarkörler toplanması için bir yöntem olarak damar delinerek için giderek daha fazla tercih edilir hale gelmektedir. DBS toplama sonra Damara, basit ve nispeten ağrısız, daha az invaziv ve minimal depolama gereksinimlerini (yani örnekler hemen dondurulacak ve tahlil önce istikrarlı bir dondurucu bir ortamda uzun bir süre saklanabilir gerekmez) gerektirir. DBS örnekleri kolesterol, C-reaktif protein, glikozile hemoglobin, Epstein-Barr virüsü antikorlar, ve çeşitli sitokinler dahil olmak üzere farklı analit, çeşitli test edilebilir.

Damara uzun kandaki biyomarkerların koleksiyonu için altın standart olmuştur. Ancak, elde depolama ve kan örnekleri nakliye adheren gerektirirbelirli araştırma protokolleri mümkün olmayabilir protokolleri ve sağlık kodları, bir dizi ce. DBS örnekleme işlemleri basittir ve resmi sertifika gerekmez iken Phlebotomists resmen, kateterizasyon sertifikalı olmalıdır. Venöz kan koleksiyonu da DBS toplama (yani iğneler, tüpler, turnike) göre daha fazla ekipman gerektirir ve daha sonrası toplama çabası. Damara Girme örnekler ve -20 ° C ve -70 ° C arasındaki Dondurulmuş santrifüj (ya da zaman içinde belirli bir süre boyunca oda sıcaklığında bekledikten yoluyla kan numunesinden ekstre örneğin, serum veya plazma) C hemen analitlerin bozunmasını önlemek için işlenmelidir , DBS örnekler sadece hava ile kurumasına izin gerekir ve daha sonra bir dondurucuda 2 aktarılmadan önce, bir hafta ya da daha fazla analit bağlı olarak, oda sıcaklığında saklanabilir iken. DBS numuneleri yukarıda açıklanan nedenlerle Damara örnekleri toplamak için daha az pahalıdır. DBS örnekleri detahlilden önce nakliye ve depolama maliyetlerini azaltarak, daha az yer kaplar.

Belirteç olarak tükürük kullanımı Biyodavranışsal çalışmalarda önemli hale gelmiştir. Tükürük Biyobelirteçleri toplamak için basit, invaziv olmayan bir yöntem sunuyor ve kortizol veya kotinin 3-5 ölçmeye yönelik saha çalışması için standart haline gelmiştir. İdrar noninvaziv alınabilir ve melatonin deneyleri için veya toksikoloji için nüfus düzeyi çalışmalarında kullanılabilecek başka bir örnektir. Idrar ve tükürük hem yalındır katılımcıların kendileri tarafından tamamlanması mümkün toplama yöntemleri sunarken, tüm analitler bu medya ölçülebilir.

DBS Venipunktur için basit, uygun maliyetli, alternatif sunmak ve alanında giderek uygulanan araştırma aracı haline gelmektedir ve nüfus 6 inceler.

Protocol

Aşağıdaki protokol uygulanabilir kurumsal inceleme kurulu tarafından onaylandı ve Helsinki Bildirisi'ne uygun olarak gerçekleştirilmiştir.

1.. Standart Precuations: Beginning önce

Sağlamak için, tüm numune toplama personel NIOSH Kan kaynaklı patojen (BBP) Eğitim gereklidir geçti.

  1. Mühendislik Kontrolleri
    1. Kullanım Gıda ve İlaç Dairesi kullanılan steril, tek kullanımlık lancets atmanız diyez bertaraf kapları onayladı. Muhtemelen enfekte malzeme ile temas başka bir malzeme için, bir şekilde etiketlenmiş, biyo varil kullanın.
    2. Kesici kabını aşırı doldurmayın. Sadece yaralanmayı önlemek için kabı değiştirmeden önce 3/4 kapasiteli bir diyez kabı dolduracak. Her kesici kabın üzerine kompartmental dolgunluk için bir göstergesi vardır.
    3. Sadece kesici kapta Keskilerin atmayın. Herhangi bir ot için diyez kabı kullanmayınOnun atık.
    4. Düzgün etiketli biyo varil potansiyel BBP ile temas herhangi nonsharp malzemeyi.
  2. Kişisel Koruyucu Ekipman (KKE)
    1. Her zaman düzgün BBP gelen enfeksiyona karşı korumak için KKE kullanın. DBS toplama sırasında kullanılan KKD'ler eldiven, laboratuvar mont, göz koruması, uzun pantolon ve kapalı burunlu ayakkabılar yer alıyor.
    2. Kan ya da kan veya diğer potansiyel enfeksiyöz maddelerin (OPIMs) temasa geçti şey işlemek için eldiven giyin. Bu (daha sonra tarif edilecek olan) "sağma" sürecini engelleyebilecek olarak eldivenler çok sıkı ne de çok gevşek olmamalıdır. Onlar eldiven delinme olabilir gibi kan lekeleri toplarken yüzük takmayın.
    3. Kan ve OPIMs cilt ve giyim korumak için bir laboratuvar önlüğü giymek. Bir BBP ile temas olan bir laboratuvar kaplama tekrar kullanılmadan önce, bir% 10 oranında çamaşır / su çözeltisi içinde yıkanması gerekmektedir. Ne olursa olsun maruz kalma, laboratuvar önlüğü tutmak için düzenli c yıkanmalıdıryalın.
    4. Kan ve OPIMs ile olası temas karşı ayakları korumak için kapalı burunlu ayakkabılar giyin.
    5. Eğer istenirse, kan ve sıçramak nedeniyle OPIMs ile olası temas karşı korumak için gözlük.
    6. Bir çalışma alanının temizliğini korumak için, laboratuvar alanı dışında eşyaları kirletmesini önlemek için çalışma alanını terk etmeden önce KKE kaldırın.
  3. Çalışma Uygulama Kontrolleri
    1. Her katılımcı ile fiziksel temastan önce ve sonra 20 saniye boyunca sabun ve ılık su ile yıkanmalıdır. Akan suyu kapatmak için havlu kullanın. Bir lavabo mevcut değilse, en az% 60 alkol, bir el Temizleyici kullanın.
    2. Ne olursa olsun dezenfektanı uygulamadan önce ve eldiven çıkarıldıktan sonra, ellerinizi yıkayın alkol elinizi kullanmak için fırsat. Iki elin tüm yüzeylerini ve kuru kadar birlikte ellerini ovmak için yeterli Dezenfektan kullanın. Durulama veya bu dezenfektan etkinliğini azaltacaktır gibi kuru bir havlu ile ellerinizi silmeyin.
    3. Yemek ya da etmeyiniçmek veya kan toplama alanlarında makyaj veya kontakt lens uygulanır. BBPs Kişisel maruz mukoza için doğrudan yolları olan bu yollar aracılığıyla meydana gelebilir.
    4. Eldiven olmadan biyolojik tehlikeli malzeme ele etmeyin ve daha önce biyolojik olarak tehlikeli malzeme dokundu eldiven ile tehlikesiz malzeme kolu yok.
  4. Uygun Kat
    İyi temizlik Bir BBP maruz karşı korunmasına yardımcı olmak için devam edecek ve çevreyi çapraz kirlenmesine engel olacaktır.
    1. Düzgün, temiz alanlar DBS toplama sırasında kontamine için virüsit mikrobiyal dezenfektan mendil kullanın.
    2. Biyolojik tehlikeli ya da sıradan çöp ayrı kontamine atık tutmak; kirlenmiş malzemelerin üzerlerine görünür kan veya OPİM sahip olanlardır.
  5. Pozlama Tepki
    Bir BBP maruz kalırsa, şu şekilde yanıt verir.
    1. Sabun ve su ile derhal ve iyice yıkayınız.Hızlı aksiyon enfeksiyon riskini azaltabilir.
    2. Alan danışman ve / veya yanıt hekime durumu izah edebilmek için maruz kalma kaynağı ve rota belirlemek.
    3. Pozlama gerçekleşir hemen sonra çağrı üzerine gözetmen bildir. Bu acil tıbbi müdahale gerekli olması halinde bu değerlendirilebilir böylece enfeksiyon için risk düzeyini anlamak için bir alan gözetmen destek almak olduğunu vurguladı. Belirli Pozlama Kontrol Planları (ECP'ler) ortaya konulan kurallar BBP maruz kalma tehlikesiyle karşı karşıya olduğunu herkese sağlanmalıdır.

2. Toplama Odası ve Malzemelerin Kurulumu

  1. Böyle bir breakroom gibi, yeme yönelik, ve tüm ilgisiz proje ekipmanların ücretsiz DEĞİLDİR bir örnek toplama konumu seçin. Bir kalabalık bir alanda olmak istemiyor, bu hareket kolaylığı olması önemlidir. Aşağıdaki kurumuş kan-spot koleksiyonu (l kurmak için nasıl açıklanırab) alan.
  2. Biyolojik tehlikeli atık varili kurmak ve biyolojik tehlikeli atık torbası ile iç hat. Otururken atık varil erişilebilir olmalıdır.
  3. Dezenfekte mendil veya benzer ürün ile iyice toplama alanı temizleyin. Biyolojik tehlikeli atık varil laboratuvar alanını temizlemek için kullanılan tüm malzemeler imha edin. Zararlı kimyasallara maruz cildi korumak için bu adımı sırasında eldiven giyin.
  4. Eldivenleri değiştirin ve kalan koleksiyon malzemeleri kurmak.
    1. Toplama masasına yerleştirin eldiven ve alkol el dezenfektanı.
    2. Koleksiyoncu sandalyenin ulaşılabilecek diyez kap yerleştirin. Kavuz konteyner her zaman eldiven ele ve sonra düzgün dolu olduğunda atılmalıdır.
    3. Toplama alanında koruyucu underpad DBS toplanması için gerekli tüm kalan malzemeleri yerleştirin. Bir filtre kağıt toplama kartı, bir kaç neşter alkol pedleri, gazlı bez, ve bant-Aids, ancak alanı kalabalık bu yüzden çok az içerir. DoHer katılımcı için kullanılabilecek olandan daha fazla kurmak değil.

3. DBS Örnek cellection

Hep KKE (laboratuvar mont, eldiven, uzun pantolon, kapalı burunlu ayakkabılar ve istenirse, güvenlik gözlüğü) toplanması sırasında aşınma ve kişinin sokak giysileri korumak için kucağına koruyucu underpad (chux) yerleştirin.

  1. Katılımcıyı hazırlanması:
    1. O / o koleksiyonu için sol veya sağ elinizi kullanın ve tahsilat için bir parmak seçmek için tercih ediyorum eğer onayı alındıktan sonra, katılımcıdan. Ağır nasırlı veya hasarlı (yırtılmış) parmakları ve herhangi bir halkalı parmak kaçının. Sırasıyla, katılımcı ağrı en aza indirmek ve toplanmasını kolaylaştırmak amacıyla Genellikle serçe ve başparmak seçili değildir. Parmak uçları kenarları tutarlılık ve toplama kolaylığı için toplama alanı olarak kullanılır.
    2. Katılımcı ellerini ısıtmak ve kan akışını teşvik etmek için birlikte ellerini ovmak var. Bir el warmer kullanılabilir, ya da bir lavabo varsa katılımcı ılık su altında ellerini çalıştırabilirsiniz. Kan akışını teşvik etmek için bir başka teknik katılımcı dönüşümlü sıkmak ve hedef elini rahatlayın, daha sonra, önceki Parmak çubuğu tamamen dinlenmek zorunda olacaktır.
    3. Bir alkol pedi ile seçili parmağı temizlemek ve tamamen kuru izin verir. Tam olarak herhangi kirlenmektedir veya el losyonlar kaldırmak için ikinci bir alkol pedi ile tekrarlayın. Parmak parmak sopa veya alkol ile devam etmeden önce kan örneği kontamine tamamen kuru olmalıdır. Kullanılan tüm koleksiyon malzemeleri gibi, hemen biohazard çöp bidonuna alkol mendil atmayın.
  2. Katılımcının parmağına delinme siteyi hazırlanması:
    1. Toplama sırasında hareketini önlemek ve kol ve el kasları gevşer katılımcının kolunu sabitleyin. Masanın kenarına ya da kucağına katılımcının dirsek dinlendirin. Katılımcının eli Poz tutunrahat kalp seviyesinin ve kan akışını kolaylaştırmak için rahat kaslarının altında itioned.
    2. Başparmak ve işaret parmağı arasında seçilen parmak tutun ve hafifçe parmak doğru kan çekmek için parmak ucu avuç kavramak taşırken yavaş ve sıkıca parmak sıkarak parmak süt.
    3. Parmak dik katılımcının parmak karşı sıkıca mikro-neşter basın ve neşter boşaltın. Parmak ya da tırnak yatağına yakın merkezi delmeyin; yerine bu iki nokta arasındaki hedefliyoruz parmağın ulnar tarafında. Hemen kesici kap içinde kullanılan lanseti atmayın.
  3. Kan lekeleri Toplama:
    1. Örnek doku sıvısını çıkarın ve hemen biyolojik tehlikeli atık varil içine gazlı bez atmak için steril bir gazlı bezle uzak kan ilk damla silin.
    2. Aşağıya doğru bir açı, gen ile kalp altında katılımcının elini korurkently bilek el başlangıç ​​süt ve kan üretmek için parmak tabanına aşağı çalışır. Bu kan akışını azaltacaktır olarak sadece, parmak sıkmak etmeyin. Büyük bir damla parmak ucundan asılı kadar parmak süt.
    3. Toplama kağıt kullanarak noktalar toplayın.
      1. Dikkatlice parmak altında toplanması kağıt yerleştirin ve açılan kendi ağırlığının düşmesine izin. Bu maksimum hacim kan lekelerinin toplanmasını sağlar. Filtre kağıdı üzerinde kan havuzları, yani "boncuk", yavaşça kağıt içine doyurmak için kan teşvik kartı dokunursanız.
      2. Kan çok zor akışlı ya da damlalar, kendi ağırlığının düşmesi için çok küçük ise, yavaşça parmak dokunmadan kılcal hareket aracılığı ile uzağa parmaktan kan emmek için kan damlası ile temas içine toplama kağıdı getirmek. Parmak toplama kağıdı dokunursa, o toplama alanı aşıldığını gibi kağıt üzerinde başka bir noktaya taşımak. Katılımcının parmak should filtre kağıdı asla dokunmayın.
      3. Kan nokta toplama daireyi doldurmak değil, hatta varsa, birbiri üstüne kan damla koymayın.
      4. Bu büyük noktalar toplanması daha zor yapar gibi kan parmak veya tırnak üzerine çalışmasına izin vermeyin.
    4. Sonra temiz ve ilk delinme siteyi bandaj ve istek kabul edilirse yeniden başlamak; katılımcının kan toplama işlemi sırasında herhangi bir zaman pıhtıları varsa, başka bir parmak dikmek için izin isteyin.
      1. Pıhtılaşmasını önlemek için, akan kan tutmak veya sıkıca pıhtı oluşumunu bozar steril gazlı bez ile patlağı silerek denemek için katılımcının parmağını sağım devam etmektedir.
        Not: Daha sonraki parmak sopa birkaç nedenden dolayı gerekli olabilir: Bir soğuk oda daha hızlı pıhtılaşmasını neden olabilir; ayrıca katılımcıların kan viskozitesi ideal olmayabilir, ya da kötü sağım teknikleri de kan akışını etkileyebilir. El ısıtıcıları, ya da ılık akan su, Punc önce kullanılanTure soğuk odanın etkisini tersine çevirebilirsiniz.
    5. DBS toplanan, ya da katılımcı sonraki parmak sopa istemiyorsa, herhangi bir yabancı kan delinme siteyi temizlemek edildikten sonra.
    6. Katılımcı örnek toplama alanı yaprakları kez potansiyel kontaminasyonu önlemek için delinme siteyi bandaj.
  4. FI Kalite kontrol (QC) değerlendirme:
    Örnek toplama tamamladıktan sonra, kalite örnekleri değerlendirmek. Toplama alanına arkasından ölçüldüğünde noktalar çapı 1), en azından 0.375 olduğu temin etmek; filtre kağıdın her iki tarafına benzer boyutta olacak şekilde 2) yeterli toplama kağıdı ile ıslatılır, bu kriteri karşılamayan noktalar göstermektedir toplama kağıda parmak teması ve büyük olasılıkla bulaşması yoluyla toplanması, 3) birbiri ile temas içinde (noktalar alanlar örtüşmeyen) taranabilir değildir.
  5. Örnek toplama Tamamlanıyor
    1. Aşağıdaki guiAdım 1.1 'de tarif delines, potansiyel bulaşıcı malzemeler ile temas etmiş olabilecek öğeleri de dahil olmak üzere, kalan kontamine toplama malzemelerini atın.
    2. Kuruması için bir koruyucu underpad üzerinde toplama kağıdı durun. Aralarında iyi hava akışı sağlamak için uzay toplama kartları. Kuru hava zaman miktarı en az 15 dakika, tercihen en az 30 dk. Maksimum hava akışına izin vermek için, serbestçe öne ve toplama kağıt üzerinde numunelerin arkasında hava akımı sağlamak için bir şekilde toplama kartın arka katlamak için önemlidir.
    3. Tüm adımlar ile tamamlandı, KKE kaldırın.
  6. Bir konu duygu soluk ya da yanıt
    Muhtemel rağmen, bir katılımcı parmak sopa, sırasında veya sonrasında baş dönmesi sersemleme, veya soluk olabilir. Böyle solukluk, yüz ve alında terleme, göz kapakları, görme bulanıklığı sarkık veya çırpınan şikayetleri veya mide bulantısı şikayetleri gibi belirtileri için uyanık olun. T başlangıcıHese belirtiler genellikle ani değil, örnek koleksiyoncular belirtilerden herhangi görünür olup olmadığını hızlı bir şekilde cevap vermeye hazırlıklı olmalıdır. Bu belirtilerin herhangi birinin işlemi sırasında herhangi bir noktada mevcut olan, aşağıdaki prosedürlere göre tepki verir.
    1. Bir katılımcı bayılma hissi varsa, sersemleyebilir baş dönmesi, bayılma ya da herhangi bir belirti gösterir, aşağıdaki eylemleri gerçekleştirin:
      1. Prosedür durdurun.
      2. Katılımcı düşme ya da yaralı hale gelmez dikkat edin.
      3. Sakince katılımcı güven ve gerekirse, kıvrılmıs ve onun / onun bacaklarının arasına / başını koymak için katılımcıdan. Hareketlilik sınırlıdır ve katılımcı hareket durumunda, bitişik bir yastık-benzeri yer dinlenmeye kullanılabilir.
      4. 10 dakika için katılımcı kalan yazıldı.
      5. Katılımcı rıza devam eğer prosedürü sürdürün.
    2. Bir katılımcı bayılıyor ise, aşağıdaki önlemleri alır:
      1. Prosedür durdur.
      2. Özenkatılımcı düşme veya yaralı olmaz.
      3. Metre yükselmiş ile kısa sürede onun / onun arkasındaki katılımcı yalan var. Katılımcı kalkmadan oturduğu yerden doğrudan yatmak için talimat olacaktır.
      4. Herhangi bir sıkı giysi gevşetmek için katılımcı isteyin.
      5. 10 dakika için katılımcı kalan yazıldı.
      6. Kan nokta toplama devam etmemelisiniz.
      7. Katılımcı 1 dakika sonra yanıt vermezse, 911'i arayın.
  7. Laboratuvar alanının aşağı Breaking:
    Kan lekelerinin koleksiyon tamamlandığında, toplama alanı aşağı kırılmış olması ve belli ki passer-bys yapmak Arındırılan alan BBP tarafından enfekte olmayacak. Kan toplama alanı, ekipman kaplar, koleksiyon malzemeleri ve çöp konteynerleri BBP temiz olmalıdır. Potansiyel bulaşıcı malzeme taşırken her zaman olduğu gibi, KKE giyerler.
    1. Toplama alanı kaldırmak veTüm kirletilmemiş malzemeleri paketleyin.
    2. Biyo varil içine kalan kontamine atık bertaraf edin.
    3. Kavuz kabı kapatın ve kirlenmeye karşı koruma sağlayan bir alanda saklayın. Kesici kap 3/4 dolu ise, uygun şekilde atın ve yeni bir kesici konteyner ile değiştirin.
    4. Virüsit mikrobiyal dezenfektan mendil ile tüm numune toplama alanı silin.
    5. Tüm biyolojik tehlikeli malzeme bertaraf edildikten sonra, biyolojik tehlike çanta otoklav edilebilir. Atık varil gelen çanta çıkarırken, sadece torbanın dışına dokunmamaya ve sıkıca torbasının dikkatli olun. Bu virüsit mikrobiyal çapraz bulaşmayı önlemek için tüm ekipmanın dışını temizlemek için mendil kullanmak da iyi bir uygulamadır.

4. DBS Toplama Eğitimi

Doğrulayın kurumuş kan nokta toplayıcı prosedürü gerçekleştirmeden önce yetkili bir kişi tarafından onaylanmıştırHastaların veya araştırma konularda Duré. Koleksiyoncular yeterli hacim noktalar koleksiyonunda, ve 10 dakika altında ideal olarak, zamanında ve etkin bir şekilde prosedürünü tamamladıktan KKE ve kan toplama malzemeleri kullanımı, katılımcılar, güven ve yeterlilik için saygı göstermek emin olun.

5. Örnek Paketleme ve Depolama

  1. Onlar depolama için Torbalı önce DBS numuneler en az 15 dakika boyunca kurumuş olun, doymuş kart 30 dakika ya da yeterince kuru uzun sürebilir. Numune bulaşması ve örnek kirlenmesine önlemek için tamamen kuru olduğundan sağlanması, toplama kartı kapağını kapatın.
  2. Bir biohazard örnek çanta almak ve numune torbaya bir kurutucu kese yerleştirebilirsiniz. Biohazard numune torbaya DBS örnek yerleştirin. DBS örnekleri ele daima eldiven giyin. Kan örnekleri numune torbasının dışında temas etmesine izin vermeyin.
  3. Kendi biohazard numune torbası zekâ her numunesi yerleştirinkurutucu paket ha. Fazla havayı kaldırmak ve daha sonra sıkıca torbasının çanta düzleştirin. Taşıma veya geçici depolama için bir depolama soğutucuda Torbalı örnek yerleştirin. Yüksek sıcaklıklarda kaçının.
  4. DBS örnekleri, tipik olarak bir analit 7,2 bağlı olarak önemli bir bozulma olmaksızın, iki hafta boyunca oda sıcaklığında muhafaza edilebilir, toplama iki hafta içinde DBS örnekleri dondurma veya deneyi.

6. Numune Taşıma ve Sevk

  1. Enfeksiyöz ajanlar içeren bilinmektedir sürece, Ulaştırma düzenlemeler Bakanlığı'nın altında ve Bölüm 2, Bölüm 6 uyarınca muaf insan örneklerinde olduğu gibi gemi kuru kan örnekleri, Uluslararası Sivil Havacılık Örgütü (ICAO) Teknik Talimatları 8 6.3.2.3.6 § .
  2. Donmuş ise, gecede tehlikeli maddeler için gerekli ek önlemler ile kuru buz üzerinde gemi örnekleri, ya da -80 ° C'ye dondurulmuş gelpaks Pazartesi-Çarşamba günü gemibeklediklerini ve numuneleri almak ve dondurmak için hazır olan alıcı sitesinden onayı ile, gecikme ya da hafta sonları / tatil için transit çözülme önlemek için.

7. Kalite Kontrol Değerlendirmesi

  1. Toplama ve analiz edilmeden önce izlenerek (tercihen önce, dondurma-çözme döngüsü sayısını en aza indirmek için, donma) kalitesi için numunelerinin değerlendirilmesidir.
  2. Uygun paketleme, bozulmamış (kuru) kalan renk kodlu kurutucu, noktalar doygunluk, noktalar boyutunu, konu parmak ile temas gösteren örtüşen veya kart üzerinde sıvanmamaktadır noktalar dahil olmak üzere uygun toplama yöntemleri, örnek kalite değerlendirmesinde aşağıdaki kriterleri içermektedir.

8. Dondurucu Depolama

Bozulma kez analit tarafından farklı olmasına rağmen, en iyi sonuçlar için toplama iki hafta içinde DBS örnekleri dondurma. Laboratuar dereceli dondurucuda kurutucu ile örnekleri dondurun. Herhangi bir biyolojik numune olduğu gibi, donma-çözülme c azaycles, DBS örneklerinde bazı tahliller altı donma-çözülme döngüleri 9-11 kadar bozulma hiçbir kanıt göstermiştir rağmen.

Representative Results

Şekil 1
Şekil 1.. Kurutulmuş kan nokta örneği. Koleksiyonu kart kurutma sürecinde dört, geçerli toplanan noktalar ile gösterilmiştir. resmi büyütmek için buraya tıklayın.

Şekil 2,
Şekil 2.. İyi ve kötü kurutulmuş kan nokta örnekleri. Başarılı (sağda) ve başarısız (sol) DBS toplama sonuçları gösterilmiştir. büyük im görmek için buraya tıklayınyaş.

Şekil 3,
Şekil 3.. Yöneticileri ve tutumları çalışan Kardiyometabolik hastalık riski 6 ile ilgili uygulamalar. Bu rakam Berkman, LF, Buxton, OM, Ertel, K. & Okechukwu, denge-aile iş ile ilgili C. Yöneticisi'nin uygulamalardan modifiye edilmiş çalışanı kardiyovasküler tahmin genişletilmiş bakım ortamlarında risk ve uyku süresi Mesleki Sağlık Psikolojisi 115, 316-329 (2010) ait. Dergisi. Çalışanlarının iş ve aile ihtiyacı olan yardım için açıklık ve yaratıcılık orta veya düşük iş-aile puanları ile yöneticiler maruz çalışanlar, iki veya daha fazla kardiyovasküler risk (şimdiki sigara, obezite, yüksek kan basıncı ya da yutturmaca olan istatistiksel olarak anlamlı bir artış oran varrtension, yüksek kolesterol ve yüksek glikozillenmiş hemoglobin (Hb A1C) veya diyabet tanı). Üst ve orta paneller kurutulmuş kan nokta ve (aynı zamanda güvenilir kurumuş kan lekeleri ile ölçülebilir) bakım cihazın alanına göre değerlendirilir Hb A1c tarafından değerlendirilen toplam kolesterol için ± standart sapma ortalama değerleri tasvir. Alt panel yöneticisi skorla kardiyovasküler hastalık riskini gösterir. Doğrudan bakım veren hemşire ve diğer çalışanlara sınırlı analiz için çalışma-aile sorunları ile ilgili, düşük yaratıcılık ve açıklık ile yöneticiler maruz kalma bu bireyler için özellikle önemli olabileceğini göstermektedir (OR düşük WF skor = 6.4, p = 0.01). Tüm modeller, yaş, cinsiyet, ücret, eğitim, ırk / etnisite, ve şantiye için kontrol. resmi büyütmek için buraya tıklayın.

Discussion

Biyobelirteçler tıp, hücre biyolojisi, genetik, psikoloji, sosyoloji, demografi ve sosyal epidemiyoloji de dahil olmak üzere farklı disiplinlerde son derece yararlı araçlardır. Her bir disiplin içinde, erken faz geçerlik ve güvenirlik biomarker araştırma gizlenmiş hastalık riskini hem de ortaya çıkarmak ve sağlık sonuçlarının uzunlamasına tahmin sağlamak için kullanılmıştır. Bu durumlarda, doğru biyomarkerler, dayanıklı (yani biyogöstergesini ayıklamak için numune toplama ve laboratuar testinin uygulanması arasındaki gecikme yaşayabilir) ve (modelleri çeşitli yani faydalıdır) çok yönlü gereklidir.

DBS koleksiyonu oldukça basit bir işlemdir iken, çeşitli teknikler toplanan noktalar hacmi maksimize yardımcı olabilir. Toplama başlamadan önce, bir katılımcının elini sağlanması sıcak ve parmak delinir kez nedenle kan damarları dilate olduğu, kan akışını yardımcı olacaktır. El ısıtıcıları kullanarak ya sahip birkatılımcı ılık su altında ellerini çalıştırın bu süreçte yardımcı olabilir. Toplamadan önce parmak sağım parmak ucu kan çekin ve kan akışını yardımcı olmak için elini sıcak olacak. Süt uygulama ile geliştiren bir süreçtir. Koleksiyonerler onlar en rahat ve etkili bulmak ne tekniği kullanmanız gerekir, ancak en yaygın yaklaşım koleksiyoncu elinin tersiyle katılımcının elini sağım içerir. Bu yöntem, karşısındaki eli katılımcının bileğini stabilize olurken koleksiyoncu başparmak derin katılımcının avuç içine çalışmak için izin verecektir. Bir katılımcının, sol taraftan bir parmak kan toplama olsaydı, bir örnek olarak, toplayıcı kendi sağ eli ile sol el ve süt ile katılımcının bileğini stabilize olacaktır. Sağım yerine parmak ucuna doğru kan çekmek için kas içine çalışan el üstünde deri çekerek, sağlam bir tutuş kullanılarak olmamak üzere iken yapılan hatalar. Bu pin önlemek için de önemlidirching sıkı kan akışını engelleyebilir, her ikisi de nonmilking eliyle katılımcının bileğini kavrama sağım el ile veya parmak.

Parmak delme zaman, sıkıca boşaltılmadan önce parmak içine neşter basarak mümkün olduğunca delinme gibi derin yapmak. Sığ bir delinme daha az kan akışı ve çabuk pıhtılaşmasına neden olur. Parmak delme sonra, hızlı çalışma anahtarıdır. İnce, kan toplama daha kolay ve daha büyük noktalar yol açar. Delinme sonra, kan pıhtılaşması kadar daha fazla yapışkan hale gelir. Kartın daha kendi hacmi üzerinde kan lekeleri toplamak için gereken daha az zaman.

İdeal katılımcının kan kendi ağırlığının düşecek damla ince yeterli olacaktır, ancak bazı insanların kan kalın veya pıhtılar diğerlerinden daha hızlı olarak, tüm katılımcılar için durum olmayacaktır. Kan parmak düşmeye çok kalın olursa, filtre kart koleksiyonu için kan getirilmelidir. Whkana kartı getiren en bunun yerine sadece karta kan dabbing göre, mümkün olduğunca uzun süre için parmak asılı iken damla temas kartı tutmak önemlidir. Bu nokta büyüklüğünü en üst düzeye çıkarmak için, parmak çekme kan yardımcı olacaktır. Bu teknik, kan ve kartı arasında iletişim sağlamak için sürekli eller gerektirir. Her iki elinizi kullanarak, bir kart tutmak için katılımcıların elini ve biri sabit, ve birbirleri ile temas halinde her iki ellerini tutarak birlikte kartı ve kan stabilize etmek için yardımcı olur.

Böyle Kardiyometabolik risk değerlendirmesi gibi gelişmiş araştırma alanları, uzun, C-reaktif protein (CRP), insülin ve glikozillenmiş hemoglobin (HbA1c) erken risk algılama ve önleme çabaları için, hem de "sert uç noktaları" biyomarkerlerinin olarak biyomarkerlerin dayanmıştır Kardiyovasküler hastalık (CVD) riski ve CVD mortalite 12 için. Klinik epidemiyoloji sık prospectivel için biyomarkerlar değerlendiriyory, kalp hastalığı ve Tip II diyabet gibi kardiyometabolik risk sonuçlarını tahmin. Belki de en yaygın Framingham risk skoru, CVD 13 öngörülmesinde yarar göstermiştir kan basıncı, HDL kolesterol düzeyleri ve total kolesterol düzeylerini içeren kompozit tüm biyomarkerların olduğunu kullanılır. Ancak, Framingham skor bazı teknik tartışmalar yaşadı ve kardiyovasküler araştırma ile ilgili daha doğru ve spesifik belirteçlerin ihtiyacını düşündüren, sağlık, sosyal ve çevresel faktörleri birbirine bağlayan odaklanmış çalışmalar sınırlamaları sahiptir.

ELISA veya DBS numunelerinin tahlilinden için benzer teknikler kullanılarak ticari olarak temin edilebilen kitler vardır. DBS numunelerinin tahlilinden için gerekli çözelti 2 içine kuru örnekleri getirmek için özel ve optimize elüsyon adımların kullanımı vardır. Daha analitlerle için tahliller anda 1 geliştirilmekte olan bu araştırma genişleyen bir alandır. Th arasındazaten doğrulanmış ve yaygın olarak kullanılan e tahliller kolesterol 2, CRP 10,14,15, IgE16, EBV 9,15, leptin 17, ve 18 cyotkines. Laboratuvar Tıp Üniversitesi Washington Bölümü (UW Lab Med) Biyomarker Laboratuvarı (: Mark Wener Yönetmen dahil) DBS deneyde, uzmanlaşmış laboratuvarlar vardır.

Yerine yalnız bir biyolojik belirteç daha biyobelirteçlerinin panel, kardiyovasküler ve diyabet araştırma alanlarında en yararlı olduğunu akılda tutarak, biyolojik belirteçler faydalarını maksimize etmek için bağlamsal faktörlerin çeşitli birlikte dikkate alınması gerekir. Biyomarker araştırma hem maddi ve veri toplama için zaman, ancak pahalı olabilir. Wi o, doğru, dayanıklı ve çok yönlü biomarkerlerin seçmek için hayati iken Böylece, iş ve aile biomarker araştırma, ucuz uygun biomarkerlerin seçerek pratiklik köklü olmalı ve hızlı bir şekilde toplanabilirinci kolaylığı. Ayrıca, pratik hususlar çoğu zaman aynı anda bir prosedür içinde fiyat, kalite, hız ve maksimize etmek için bir yetersizlik neden. Burada alan ve nüfus çalışmaları kapsamında sağlık biyomarkeri araştırmalarında bir sonraki adımları yalan. Biyobelirteç araştırmaları alanında dramatik bir büyüme dönemine şu anda, ancak işin en gelmek henüz.

Disclosures

Matsutani Amerika Bilimsel Danışma Kurulu, bir danışman ve Dinsmore LLC için bilirkişi olarak hizmet veren ve danışmanlık verildi; (; ESRC-0977, ClinicalTrials.gov tanıtıcı NCT00900159 şimdi Sunovion) ​​Orfeu Buxton Sepracor Inc bir araştırmacı tarafından başlatılan hibe aldı Wake Forest Üniversitesi Tıp Merkezi'nden ücretleri.

Acknowledgments

Çocuk Sağlığı Eunice Kennedy Shriver Ulusal Enstitüsü: Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüleri ve Hastalık Kontrol ve Önleme Merkezleri aracılığıyla bir işbirliği anlaşması tarafından finanse edilmektedir Çalışma, Aile ve Sağlık Ağı (www.WorkFamilyHealthNetwork.org) tarafından desteklenmiştir ve İnsan Gelişimi (Grant # U01HD051217, U01HD051218, U01HD051256, U01HD051276), Ulusal Enstitüsü (Grant # U01AG027669) Yaşlanma, Davranışsal ve Fen Bilimleri Araştırma, Ulusal Kalp, Akciğer ve Kan Enstitüsü (R01HL107240) ve Mesleki Ulusal Enstitüsü Ofisi Sağlığı ve Güvenliği (Grant # U01OH008788, U01HD059773). William T. Grant Vakfı, Alfred P Sloan Vakfı, Çocuk ve Aileler için İdaresi hibe ek finansman sağladı. Bu yayının içeriği sadece yazarların sorumluluğundadır ve mutlaka bu kurumları ve ofislerin resmi görüşlerini temsil etmemektedir.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Asepti II Microbial Wipes EcoLab D12330345 3rd party shipping
Biohazard waste bags VWR 14220-092 High Strength Autoclavable Polypropylene Biohazard Bags, 2 mil
Biohazard waste barrel Tyco 58578-092 8 g Slide lid
Sharps Container BD Medical BD305487 1.4 qt
Chux VWR 82020-845 Absorbent bench underpads 
Gloves VWR XSmall: 89038-267 Powder-free, latex-free nitrile gloves
Small: 89038-268
Medium: 89038-270
Large: 89038-272
XLarge: 89038-274
Hand sanitizer (e.g. Purell) Johnson Johnson 89040-210 3rd party shipping
Alcohol wipes Webcol and Curity 82003-856 Prep pads
Gauze Versalon 82004-826 Nonwoven sponges
Band-Aids Nutramax Stat Strips 15431-475
Lancets Owen Mumford 82028-060 3.0 mm, 21 G 
Protein paper collection cards Whatman Custom-build 903 Protein Saver Collection paper
Desiccant VWR 61161-319 Humidity sponges
Specimen bags Lab Guard Reclosable Biohazard Bags, ITW Minigrip 56766-370 6 in x 9 in
Specimen storage cooler Igloo Playmate Mini 4 qt; direct from manufacturer

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. McDade, T. W., Williams, S., Snodgrass, J. J. What a drop can do: dried blood spots as a minimally invasive method for integrating biomarkers into population-based research. Demography. 44, 899-925 (2007).
  2. Kirschbaum, C., Read, G. F., Hellhammer, D. H. Assessment of hormone and drugs in saliva in biobehavioral research. , Hogrefe & Huber Publishers. (1992).
  3. Piazza, J. R., Almeida, D. M., Dmitrieva, N. O., Klein, L. C. Frontiers in the use of biomarkers of health in research on stress and aging. J. Gerontol. Series B Psychol. Sci. Soc. Sci. 65, 513-525 (2010).
  4. Smyth, J. M. Individual differences in the diurnal cycle of cortisol. Psychoneuroendocrinology. 22, 89-105 (1997).
  5. Berkman, L. F., Buxton, O. M., Ertel, K., Okechukwu, C. Manager's practices related to work-family balance predict employee cardiovascular risk and sleep duration in extended care settings. J. Occup. Health Psychol. 115, 316-329 (2010).
  6. Buxton, O. M., Malarick, K., Wang, W., Seeman, T. Changes in dried blood spot Hb A1c with varied postcollection conditions. Clin. Chem. 55, 1034-1036 (2009).
  7. International Civil Aviation Organization. Technical Instructions for the Safe Transport of Dangerous Goods by Air. , (2010).
  8. McDade, T. W. Epstein-Barr virus antibodies in whole blood spots: a minimally invasive method for assessing an aspect of cell-mediated immunity. Psychosom. Med. 62, 560-567 (2000).
  9. McDade, T. W., Burhop, J., Dohnal, J. High-sensitivity enzyme immunoassay for C-reactive protein in dried blood spots. Clin. Chem. 50, 652-654 (2004).
  10. McDade, T. W., Shell-Duncan, B. Whole blood collected on filter paper provides a minimally invasive method for assessing human transferrin receptor level. J. Nutr. 132, 3760-3763 (2002).
  11. Gerszten, R. E., Wang, T. J. The search for new cardiovascular biomarkers. Nature. 451, 949-952 (2008).
  12. D'Agostino, R. B., Grundy, S., Sullivan, L. M., Wilson, P. Validation of the Framingham coronary heart disease prediction scores: results of a multiple ethnic groups investigation. J. Am. Med. Assoc. 286, 180-187 (2001).
  13. McDade, T. W., Rutehrford, J., Adair, L., Kuzawa, C. W. Early origins of inflammation: microbial exposures in infancy predict lower levels of C-reactive protein in adulthood. Proc. R Soc. B.. , (2009).
  14. McDade, T. W. Measuring Stress in Humans. A Practical Guide for the Field. Ice, G. H., James, G. D. , Cambridge University Press. 181-207 (2007).
  15. Tanner, S., McDade, T. W. Enzyme immunoassay for total immunoglobulin E in dried blood spots. Am. J. Hum. Biol. 19, 440-442 (2007).
  16. Miller, A. A., Sharrock, K. C., McDade, T. W. Measurement of leptin in dried blood spot samples. Am. J. Hum. Biol. 18, 857-860 (2006).
  17. Miller, E. M., McDade, T. W. A highly sensitive immunoassay for interleukin-6 in dried blood spots. Am. J. Hum. Biol. , (2012).

Tags

Tıp Sayı 83 kurumuş kan lekeleri (DBS) Biyobelirteçler kardiyometabolik risk iltihap standart önlemler kan toplama
Sağlık Biyomarkörler Kan Toplama Noktası Nüfus Etütleri Katılımını özdeyiş Kurutulmuş
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Ostler, M. W., Porter, J. H.,More

Ostler, M. W., Porter, J. H., Buxton, O. M. Dried Blood Spot Collection of Health Biomarkers to Maximize Participation in Population Studies. J. Vis. Exp. (83), e50973, doi:10.3791/50973 (2014).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter