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Immunology and Infection

Intralinfática inmunoterapia y vacunación en ratones

Published: February 2, 2014 doi: 10.3791/51031
Automatic Translation
1, 1
1Department of Dermatology, University Hospital Zurich

Summary

La vacunación profiláctica y terapéutica a menudo falla para estimular respuestas inmunes fuertes debido a la semana de drenaje de la vacuna a los ganglios linfáticos y en consecuencia pobres implicación de células inmunes. Por inyección directa de la vacuna a los ganglios linfáticos, así llamada inyección intralinfática, eficacia de la vacuna puede ser fuertemente mejorada y dosis de la vacuna se puede reducir.

Abstract

Las vacunas se inyectan típicamente por vía subcutánea o intramuscular para la estimulación de respuestas inmunes. El éxito de este requiere un drenaje eficaz de la vacuna a los ganglios linfáticos donde las células presentadoras de antígeno pueden interactuar con linfocitos para la generación de las respuestas inmunes buscadas. La fuerza y ​​el tipo de respuesta inmune inducida también dependen de la densidad o la frecuencia de las interacciones, así como el microambiente, especialmente el contenido de citoquinas. Como sólo una fracción de minuto de vacunas periféricamente inyectados llega a los ganglios linfáticos, las vacunaciones de ratones y seres humanos se realizaron por inyección directa de la vacuna en los ganglios linfáticos inguinales, es decir, la inyección intralinfática. En el hombre, el procedimiento es guiada por ultrasonido. En ratones, una pequeña incisión (5-10 mm) se realiza en la región inguinal de los animales anestesiados, el ganglio linfático se localiza y se inmoviliza con unas pinzas, y un volumen de 10-20 l de la vacuna se inyecta bajo control visual.La incisión se cierra con una única puntada utilizando suturas quirúrgicas. Los ratones fueron vacunados con el ADN plásmido, ARN, péptido, proteína, partículas, y bacterias, así como adyuvantes, y se observó una fuerte mejora de la respuesta inmune contra todo tipo de vacunas. El método intralinfática de la vacunación es especialmente apropiada en situaciones en las que la vacunación convencional produce inmunidad insuficiente, o cuando la cantidad de vacuna disponible es limitado.

Introduction

Las vacunas se inyectan típicamente por vía subcutánea o intramuscular para la estimulación de respuestas inmunes. El éxito de este procedimiento requiere un drenaje eficaz de la vacuna a los ganglios linfáticos donde las células presentadoras de antígeno pueden interactuar con linfocitos para la generación de T y las respuestas de células B. Además, la fuerza y ​​el tipo de respuesta inmune inducida también dependen de la densidad o de la frecuencia de tales interacciones, así como el propio microambiente, especialmente el contenido de citoquinas. Como sólo una pequeña fracción de una vacuna se inyecta en un tejido periférico llega a un nodo de linfa, las vacunaciones de ratones y seres humanos mediante inyección directa de la vacuna en los ganglios linfáticos, el sitio se se generan respuestas inmunes, se han realizado. En el hombre, el procedimiento es guiado por ultrasonido, un procedimiento también se utiliza para la administración de agentes de formación de imágenes para la visualización y el diagnóstico en el sistema linfático. En ratones, el procedimiento es invasivo. Aquí, una pequeña (5-10 mm) incision se realiza en la región inguinal de los animales anestesiados 1, el nodo linfático se localiza y se inmoviliza con fórceps, y un volumen de 10-20 l de la vacuna se inyecta bajo control visual; 10 l se utiliza para la primera inyecciones y en ratones jóvenes con pequeñas ganglios linfáticos, mientras que 20 l pueden ser inyectados en los ganglios linfáticos de los ratones más viejos o ya cebados, que tienen ganglios linfáticos más grandes. La incisión se puede cerrar con una sola puntada utilizando suturas quirúrgicas. Por este método, los ratones han vacunados con el plásmido de ADN de 2,3, el ARN mensajero 4, 1,3,5,6 péptido, proteína 7-10, las partículas 11, 12 bacterias, así como adyuvantes 7,13, y fuerte mejora de inmunológico Se han observado respuestas contra todo tipo de vacunas. El método intralinfática de la vacunación es especialmente apropiada en situaciones en las que la vacunación convencional produce inmunidad insuficiente o cuando la cantidad de vacuna disponible es limitado o very costoso. En humanos, el método intralinfática de la inmunización se ha aplicado a los pacientes de alergia 14,15 o para pacientes con cáncer de 16-21. Aunque la idea actual es que el método intralinfática es más invasivo que otros métodos inyectables tales como inyecciones intramusculares y subcutáneas, la percepción del dolor no es mayor que después de una punción venosa 15. Se espera que la vacunación intralinfática se convertirá en una alternativa o complemento a otros métodos de vacunas profilácticas y terapéuticas especialmente. En este artículo se describe en detalle cómo se realiza el procedimiento de vacunación intralinfática en ratones. Todos los procedimientos descritos, fueron aprobados por la Agencia Veterinaria Cantonal de Zúrich, y llevaron a cabo según las directrices y directivas sobre la protección de los animales utilizados para fines científicos federales suizos.

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Protocol

1. Anestesia de ratones

  1. Preparar los anestésicos mediante la mezcla de ketamina (anestésico disociativo) y xilazina (sedante y analgésico) en solución salina. Las concentraciones de ketamina y xilazina en la solución final son 12.5 y 2 mg / ml, respectivamente.
  2. Inyectar los anestésicos a los ratones mediante administración intraperitoneal usando una jeringa con una aguja de calibre 25-30. Utilice 0,1 ml/10 g de peso corporal.
  3. Aplique una pomada oftálmica a los ojos de los ratones con el fin de evitar que se reseque de las córneas.
  4. Asegúrese de que el ratón esté suficientemente anestesiado pellizcando su pie o del pie con las pinzas. Si el ratón no reacciona con reflejos para la pizca, proceder a la cirugía. Si el ratón reacciona a la pizca con los reflejos o contracciones musculares, esperar 1-2 minutos y repetir la prueba del pellizco. Si el ratón sigue reacciona, sustituya el ratón con un animal nuevo y repita el procedimiento desde el paso 1.2 en adelante.

2. Me quirúrgicancision del Área inguinal del ratón

  1. Coloque el ratón en la espalda.
  2. Humedecer una región inguinal con etanol desinfección (70%). Para proporcionar una mejor desinfección, la región inguinal puede afeitar para quitar la piel antes de la desinfección con etanol.
  3. Tome la pata trasera y doble la articulación de la cadera para producir un ángulo de aproximadamente 90 ° de la articulación de la cadera.
  4. El uso de un fórceps curvados microdissecting, tomar la piel de ratón en la zona inguinal, donde la articulación de la cadera está doblado y tire de la piel humedecida ligeramente.
  5. Mientras mantiene la piel con las pinzas, corte una pequeña incisión (<5 mm) a través de la piel utilizando tijeras quirúrgicas.
  6. Coloque la punta de las tijeras cerradas en la incisión y abrir aún más la incisión mediante la apertura de las tijeras mientras lo mantiene dentro de la incisión. Esto hará que la piel a desgarrarse y debe producir un diámetro de menos de 10 mm. Nota: Una fuente de luz fría con guías de luz flexibles se puede utilizar para mejorar la visibilidad. En más viejosratones, especialmente los varones, la identificación del ganglio linfático puede ser difícil debido a la cantidad de tejido de grasa en la región inguinal.

3. Inyección intralinfática

  1. Preparar una jeringa (0,5 ml o menos) con una aguja hipodérmica 28-30 G; un bisel corto puede ser preferible a una larga bisel. Aspirar 10 l de la vacuna que se inyecta y aseguran que la jeringa esté libre de aire.
  2. Localizar el ganglio linfático inguinal con ayuda de las pinzas curvas y la punta de la tijera cerrado. El ganglio linfático aparecerá grisáceo en el tejido graso más blanquecina y puede ser identificado más a través de aferentes y eferentes capilares que entran y salen del ganglio linfático.
  3. Inmovilizar el ganglio linfático sosteniéndolo entre las ramas de las pinzas curvas.
  4. Coja la jeringa e inserte la aguja en el ganglio linfático con el bisel hacia arriba, asegurándose de que todo el bisel entra en el ganglio linfático.
  5. Se inyecta la vacuna (10 l). Si el visto bueno linfáticoe Es la hinchazón (voladura), la inyección se puede asumir con éxito. Si la aguja no está colocada lo más profundo en el ganglio linfático, una parte o la totalidad de la vacuna puede filtrarse y no entrar en el ganglio linfático. Si se inserta la aguja demasiado profunda, la vacuna se inyecta por vía subcutánea se dará a conocer a continuación el nodo linfático. En este último caso, repetir la inyección o sustituir el ratón con un nuevo ratón no tratado.

4. Cerrar la incisión suturando

  1. Abra un paquete de sutura quirúrgica estéril.
  2. Agarre de la aguja de sutura con un soporte de aguja en la parte distal del cuerpo de aguja. Apriete el soporte de la aguja apretando hasta que las primeras capturas de trinquete.
  3. Agarre de la piel en un lado de la incisión utilizando fórceps (dependiendo de la preferencia del cirujano, fórceps o ganchos de la piel dentada o de las Naciones Unidas de dientes puede ser utilizado). Insertar la aguja CA. 2-3 mm del borde de la incisión, que entra desde el exterior de la piel.
  4. Loosen el asimiento de la piel con los fórceps y sujete el lado opuesto de la incisión con los fórceps. Insertar la aguja CA. 2-3 mm del borde de la incisión, que entra desde el interior de la piel.
  5. Afloje el soporte de la aguja y sujete el extremo de la aguja con los fórceps. Tire de la aguja con la banda de rodadura a través de la piel, dejando una longitud conveniente de la banda de rodadura fuera del primer punto de inserción de aguja (si son varios ratones a tratar, dejar un extremo más corto; 5-10 ratones puede ser operado con una aguja de sutura / Paso).
  6. Hacer el nudo preferido de acuerdo con protocolos estándar cirujano. Una puntada es suficiente si la incisión no es mayor de 10 mm. Para incisiones más grandes, hacer una segunda puntada.

5. Tratamiento post-operativa

  1. Coloque el ratón en la jaula y cubrir con los tejidos para mantener el calor. En el tratamiento de varios ratones, colocarlos cerca unos de otros para mantener el calor. Como alternativa, coloque el ratón sobre una almohadilla caliente hasta que han despertadoarriba.
  2. Observar los ratones hasta que se despiertan.
  3. Observar los ratones diariamente con respecto a la cicatrización de heridas, así como otros síntomas clínicos tales como infecciones de la herida. La herida suele ser lo suficientemente cerrado dentro de dos días, y sanó a los siete días del procedimiento.

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Representative Results

El procedimiento de inyecciones intralinfáticas en ratones, a pesar de la cirugía, es sencillo y relativamente rápido. Una persona capacitada puede realizar el procedimiento en 3-4 min. La incisión que se cierra con una puntada típicamente se cura dentro de dos días (Figura 1)

Vacunación o inmunización intralinfática se ha realizado con ARNm, ADN plásmido, péptidos, proteínas, virus y bacterias. Figura 2 ilustra la producción de anticuerpos después de la inmunización con la proteína de fosfolipasa A2 (PLA2), el alérgeno principal del veneno de abeja. Ratones CBA se inmunizaron en los días 0, 14, y 28 con 0,01, 0,1, o 10 g de PLA2 adsorbido en hidróxido de aluminio por inyección subcutánea (sc) o (ILN) inyecciones intralinfáticas. Los anticuerpos-PLA2 específica (IgG2a) se midieron en sangre después de 8 semanas, y los resultados revelaron que 0,01 g de PLA2 era suficiente para estimular fuertes respuestas de anticuerpos, mientras que se requiere 10 g de PLA2 cuando ucantar la vía subcutánea 9.

Intralinfática la vacunación también se ha utilizado para estimular respuestas de células T citotóxicas, por ejemplo, el péptido gp33 (KAVYNFATM) de la glicoproteína de LCMV, que se unen moléculas MHC de clase I en el contexto de H-2dB para la estimulación de las células T CD8. Mientras que una sola inyección subcutánea de ratones con gp33 TCR318 activa citotóxicos CD8 respuestas de células T, el efecto era aprox. seis órdenes de magnitud más fuerte después de la inyección intralinfática (Figura 3A); los ratones TCR318 son transgénicos para el receptor de células T CD8 específicas para el GP33 1.

Funciones de las células T CD4 también se ensayaron en un ensayo de desafío tumoral. Otra vez ratones C57BL / 6 fueron inmunizados por vía subcutánea o intralinfática con el péptido NP52 (SDLRGYVYQGLKSG) de la nucleoproteína de VSV, que se unen moléculas MHC de clase II para la estimulación de las células T CD4, y el péptido se mezcló con ODN CpG 1826. Cuando los ratones se expusieron por vía intravenosa con NP52-expresando células tumorales EL4 singénicos, los ratones desarrollaron linfoma sistémico (Figura 3B). Los ratones que fueron inmunizados por vía intralinfática mostraron tiempos de supervivencia mucho más largos (> 75 días) que los ratones inmunizados por vía subcutánea (<22 días).

El método de inmunización intralinfática también se ha realizado en el hombre, especialmente para el tratamiento de las alergias tales como fiebre del heno. El método se conoce actualmente como ILIT (Intra Linfático terapia inmunológica). En un estudio sobre 165 pacientes con fiebre del heno, 3 sesiones Ilit más de 2 meses con alergenos de polen de pasto era igualmente eficaz como la terapia convencional con 54 inyecciones subcutáneas durante 3 años 15. Por otra parte, la dosis podría reducirse en más de 1.000 veces. Del mismo modo, en un estudio sobre 20 pacientes con alergia al pelo de gato, 3 sesiones con administrada intralinfática alergeno piel de gato era suficiente para causar una mejor tolerancia a la exposición a los alérgenos más tarde 14.

jove_content "> Una explicación de la eficacia mejorada de la inmunización intralinfática en comparación con la inmunización subcutánea podría ser ilustrado en el hombre. Uso de una proteína marcada con 99mTc radiactivo y como se ilustra en la Figura 4, se observaron inyecciones subcutáneas para drenar mal a los ganglios linfáticos, mientras que por supuesto entrega directa de inyección intralinfática todo el contenido de la vacuna al sistema linfático, por lo tanto, por lo que es disponible a las células inmunes y para la estimulación de la respuesta inmune 22. Se obtuvieron resultados similares en los ratones inyectados con proteínas radiactivos 9.

Figura 1
Figura 1. La curación de la herida quirúrgica después de la inyección intralinfática. Ratones hembra BALB / c fueron inmunizados por inyección intralinfática. El incis ion se cerró con la sola puntada de sutura. Dos días más tarde, el sitio de la cirugía y la inyección fueron fotografiados para la gestión de la curación de la herida.

Figura 2
Figura 2. Inmunización intralinfática con la proteína para las respuestas de anticuerpos estimulación. Ratones hembra CBA se inmunizaron en los días 0, 14, y 28 con la dosis indicada de proteína de la fosfolipasa A2 adsorbido en hidróxido de aluminio. La vacuna se administró por vía subcutánea (sc) por inyección de 50 l en la piel del cuello o 10 l en un ganglio linfático inguinal: el ganglio linfático a la izquierda en días 0 y 28 y el ganglio linfático derecho en el día 14.

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Figura 3. Inmunización intralinfática con el péptido para estimulación citotóxicos CD8 respuestas de células T. (A) ratones hembra TCR318 fueron inyectados con péptido gp33 en el ganglio linfático inguinal (ILN) o por vía subcutánea (sc) en la pata trasera. Después de 24 h, los ganglios linfáticos drenantes se recogieron y se analizaron para gp33-actividad de CTL específicos en una proporción de células effector/target- (E / T) de 30:1. (B) Mujer ratones C57BL / 6 se inmunizaron en los días 0, 2, y 4 con 10 microgramos NP52 por vías de administración subcutánea (sc) o intralinfática (ILN). Los ratones fueron desafiados a continuación, con una célula de linfoma singénicas (EL-4) expresando VSVnp52, y la supervivencia de los ratones se ilustran con curvas de Kaplan-Meyer.

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Figura 4. Administración de la vacuna intralinfática en los seres humanos. Administración de la vacuna intralinfática en los seres humanos se realiza mediante la asignación de los ganglios linfáticos subcutáneos con la ayuda de ultrasonido. La aguja hipodérmica se inserta en la paracorteza de los ganglios linfáticos, y la inyección puede ser controlada mediante la observación de los ganglios linfáticos inmediata hinchazón en la imagen de ultrasonido. (A) La inyección intralinfática es guiada por ultrasonido. (B) Ecografía imagen que muestra la aguja (línea recta de color blanquecino) insertado en el paracorteza del ganglio linfático. (C) biodistribución después de la inyección de la proteína marcada radiactivamente en un nodo linfático inguinal ("Injekt im LK"; anterior derecha) y subcutánea ("subkutan Injekt"; anterior izquierda). En el hombre clic aquí para ver la imagen más grande.

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Discussion

La inmunización intralinfática e inmunoterapia han demostrado ser apropiados para la estimulación de las respuestas tanto de anticuerpos y respuestas de células T. Como se ha demostrado en este video-artículo, el procedimiento intralinfática de la vacunación es un método rápido y fácil para la estimulación de respuestas inmunes fuertes en ratones. Un cirujano entrenado puede realizar el procedimiento durante 3-4 min. En la sesión también se puede compartir entre dos cirujanos donde uno es típicamente haciendo la anestesia y la sutura y el segundo cirujano está haciendo la incisión y la inyección. La eficacia del procedimiento es más dependiente del operador que otro método de inmunización, especialmente si el cirujano no está todavía bien entrenado. Sin embargo, un operador con experiencia es capaz de reproducir los resultados experimentales también cuantitativamente como se monitorizó por análisis de la respuesta inmune. Una modificación del método es la inyección de la vacuna en el 1,2 bazo. La preparación es similar a la de la inyección intralinfática, pero thtamaño de correo de la incisión es típicamente más grande y dos puntos de sutura se hacen para cerrarla. Las principales ventajas de este tipo de inmunización intraesplénica son que el bazo es más fácil de encontrar y golpear que un ganglio linfático, grandes volúmenes de inyecciones e inyecciones más frecuentes se pueden aplicar, y si bien los daños de un ganglio linfático causada por la inserción de la aguja o inyección implicaría un área importante de los ganglios linfáticos, el daño del bazo implicaría relativamente menos del órgano y ser más de la naturaleza local.

El procedimiento de inmunización intralinfática en ratones se puede repetir (por ejemplo, vacuna impulsar inyecciones) después de un tiempo de recuperación de 3-4 semanas antes de la segunda inyección en el mismo de los ganglios linfáticos que se hace. Si se han previsto inyecciones más frecuentes, se deben utilizar ambos ganglios linfáticos inguinales izquierdo y derecho. Al menos dos inyecciones al ganglio linfático se pueden hacer, pero se necesitan más estudios para definir esta posible limitación con mayor precisión. Las siguientes inyecciones pueden ser difíciles dUE a la formación de cicatrices tanto en el ganglio linfático y en la piel, así como la formación de granulomas potencial causado por adyuvantes. Por otro lado, la inmunización causará transitoria inflamación de los ganglios linfáticos, y el aumento de tamaño de los ganglios linfáticos simplificará posterior localización y las inyecciones. De hecho, la localización del nodo linfático es una de las principales limitaciones del método. Mientras que los ratones jóvenes (menos de 5 semanas) puede tener muy pequeños ganglios linfáticos, el más antiguo y, en especial ratones machos de edad avanzada pueden tener tanta grasa subcutánea, que la localización es difícil. Las condiciones óptimas se obtienen con ratones hembra de 6-12 semanas. De hecho, uno de los pasos más críticos del procedimiento es la inyección en el ganglio linfático en sí. Una inyección en el área adyacente del nodo será equivalente a una inyección subcutánea con mucho más débil activación de la respuesta inmune que después de la inyección intralinfática directa. La razón es que la cápsula más bien sólida que rodea el nodo no es permeable para moléculas grandes.Para un antígeno para entrar en un ganglio linfático, se tiene que drenar con la linfa. Este viaje comienza típicamente en los vasos linfáticos iniciales en la piel, continúa en los conductos más grandes en la capa más profunda de la piel, que drenan la linfa a la recogida de los vasos en el tejido subcutáneo, desde donde la linfa es impulsado por el peristaltismo hacia el lado de drenaje Nódulos linfáticos 23,24. Cuanto más un antígeno se deposita aguas abajo a lo largo de este camino, menos de ella obtener acceso a la linfa aferente será.

El método de inmunización intralinfática es particularmente interesante para la administración de antígenos que son débilmente inmunogénicos cuando se administra por métodos convencionales, tales como vías intramuscular o subcutánea. Intralinfática la vacunación se ha realizado con ARNm, ADN plásmido, péptidos, proteínas, virus y bacterias 22,25-27. Mientras que los péptidos y las proteínas no tienen adyuvantes en-construir, mRNA del virus y las bacterias de ADN plásmido ejercer efe adyuvante intrínsecacts, proporcionando señales de peligro (replicación del virus y bacterias) o mediante la estimulación de los receptores tipo Toll (TLR), que pueden detectar patrones moleculares asociados a patógenos (PAMP) como el ARN de una sola hebra (TLR7 y TLR8), ARN de doble cadena (TLR3), grupos de citosina metilada-un y oligonucleótidos guanina (TLR9), flaggelin bacteriana (TLR5), lipopolisacárido (TLR2 y 4) moléculas, así como otra virales y bacterianas 28. Por lo tanto, especialmente péptidos y vacunas a base de proteínas se beneficiarían de la potenciación inmune de la inyección de la vacuna directamente en el ganglio linfático. De hecho, se ha demostrado que las respuestas de células T y B-se incrementan después de la vacunación péptido intralinfática y la proteína en ratones 1,8,9. Por otra parte, vacunas genéticas, especialmente vacunas basadas en ARNm, son muy inestables por lo que seguramente se beneficiarían de un método de administración que permitió tiempos de paso cortos en los tejidos extracelulares. De hecho, la vacunación con el antígeno intralinfática-esARN codificante provocó inmunidad profiláctica y terapéutica potente en modelos tumorales de ratón 4. Del mismo modo, la administración intralinfática de adyuvantes tales como CpG permitió una reducción de la toxicidad debido a la dosis más baja necesaria, y un aumento del efecto adyuvante se observó debido al efecto directo y sin diluir en las células inmunes 13. También el rendimiento de otros adyuvantes o sistemas de administración de antígenos tales como polímeros nano y micropartículas-así como los liposomas se puede mejorar por la administración intralinfática 11. Otra ventaja importante de intralinfática sobre rutas de vacunación convencionales es que dosis mucho más bajas se requieren típicamente. Para las proteínas y para la estimulación de respuestas de anticuerpos, la dosis podría reducirse por 100-1.000 veces 9, mientras que la dosis de ADN para la estimulación de citotóxicos CD8 respuestas de células T se puede reducir con aprox. 10.000 veces 2.

En contraste con los antígenos de subunidades o vacunas muertas, vivir virnormalmente no se espera que los otros, y vacunas bacterianas para beneficiarse de las administraciones intralinfáticas. La razón de esto es, en parte, que viven microbios normalmente drenan bien a los ganglios linfáticos sin ninguna ayuda adyuvante. Por otra parte, los microbios infecciosos pueden hacer frente a los efectos de dilución de antígeno en los tejidos periféricos por la replicación. Por lo tanto, la dosis de antígeno de llegar al sistema linfático secundario será normalmente suficiente para generar inmunidad. No obstante, cuando las vacunas vivas existentes están produciendo inmunidad insuficiente, administración intralinfática podría proporcionar la corrección necesaria para hacer la vacuna eficaz. Se ha demostrado recientemente que la inmunidad después de la vacunación con la vacuna contra la tuberculosis actualmente sólo está disponible M. bovis BCG podría mejorarse significativamente mediante la inyección directa de BCG en los ganglios linfáticos inguinales de ratones 12. Administración intralinfática también permitió una reducción de la cantidad inoculada de BCG por 100-1.000 veces en comparación con administración subcutáneatración. Esto representa un beneficio de seguridad de la vacunación intralinfática, especialmente en personas con trastornos inmunológicos.

Inmunización intralinfática e inmunoterapia en humanos hasta el momento se ha aplicado a los pacientes de cáncer y para los pacientes alérgicos. El método en el humano es no invasiva, pero los mejores resultados y el control de calidad se obtiene mediante el uso de ultrasonido para guiar la inyección, lo que puede limitar la aplicación a los hospitales o las unidades de cuidados más grandes. En estudios de cáncer, la vacunación de sensibilización-refuerzo con ADN de plásmido y péptido para el tratamiento del melanoma metastásico reveló la inmunogenicidad y la evidencia de control de la enfermedad en una población de pacientes definida 29. También la vacunación autóloga intralinfática con células dendríticas se ha realizado en pacientes con cáncer. Aunque algunos ensayos mejoraron la respuesta inmune 30,31, otros estudios no pudieron demostrar el beneficio de las administraciones intralinfáticas 32,33. El procedimiento de administración intralinfática ha demostrado ser especialmenteespecialmente beneficiosa en la inmunoterapia de los pacientes de alergia. Al cambiar al método intralinfática, el número de inyecciones para la inmunoterapia completa y exitosa podría reducirse de aproximadamente 50 inyecciones subcutáneas más de 3 años a sólo 3 inyecciones durante 2 meses 14,15. Dado que ambos números de inyección de dosis pueden ser fuertemente reducidas haciendo la inmunoterapia específica de alérgeno intralinfática, y desde los ganglios linfáticos no contienen mastocitos liberadores de histamina, los métodos representa un beneficio de seguridad, y con la corta duración del tratamiento, el cumplimiento del paciente se mejora. Durante los próximos años, la alergia es tal vez la indicación que ver beneficio más inmediato de este nuevo método de vacunación e inmunoterapia.

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Disclosures

TMK es nombrado como inventor de patentes que tratan con inmunoterapia intralinfática en el hombre. TMK ha sido asesor científico y ha recibido los gastos de viaje desde ImVisioN GmbH, Cytos Biotecnología, MannKind Corporation, y XBiotech EE.UU. Inc. PJ no le interesa el conflicto de revelar.

Acknowledgments

Los autores agradecen la ayuda experimental en el desarrollo del método de inmunización intralinfática en ratones de Iris Erdmann, Barbara von Beust, y Julia María Martínez-Gómez. Gracias también a Maggy Arras y Nikola Cesarovic para dejarnos usar su teatro quirúrgico para esta producción de vídeo.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Ketamine (Ketasol-100) Graeub AG, Switzerland Anesthetics
Xylazine (Rompun) Bayer, Germany Anesthetics
Viscotears Eye-Gel Novartis, Switzerland To keep eyes from drying out during anesthesia.
BD Micro-Fine 0.5 ml BD Medical, France 29 G Insulin syringes with permanently attached needles
6-0 Dermalon Monofilament Nylon Covidien, MA, USA For sutures (0.7 metric, 18 G, 45 cm, Blue)
Curved forceps, 4.5 in Polymed, Switzerland For incision and holding of lymph node
Straight surgical scissors, 4.5 in Polymed, Switzerland For incision
Needle holder, 5.5 in Polymed, Switzerland To close incision with suture

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Inmunología Número 84 Vacunación la inmunización la inmunoterapia intralinfática la inyección de los ganglios linfáticos las vacunas adyuvantes la cirugía la anestesia
Intralinfática inmunoterapia y vacunación en ratones
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Johansen, P., Kündig, T. M.… More

Johansen, P., Kündig, T. M. Intralymphatic Immunotherapy and Vaccination in Mice. J. Vis. Exp. (84), e51031, doi:10.3791/51031 (2014).

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