Abstract
Многие ткани, такие как взрослых человеческих сердцах, не в состоянии адекватно восстановить после повреждений. 2,3 Стратегии тканевой инженерии предложить инновации, чтобы помочь организму в восстановлении и ремонте. Например, TE подходы могут быть в состоянии ослабить ремоделирования сердца после инфаркта миокарда (ИМ) и, возможно, увеличить общий функцию сердца к почти нормальной предварительно МП уровня. 4 Как и в любой функциональной ткани, успешной регенерации сердечной ткани предполагает своевременную доставку множество различных типов ячеек с внешним стимулам в пользу интеграции и выживания имплантированной клеточной / тканевой трансплантат. Инженерные ткани должны обратиться нескольких параметров, включая: растворимые сигналы, клетки к клетке взаимодействия и матричные материалы оцениваются как средств доставки, их влияние на выживаемость клеток, прочность материала, и оказанию организации клетки к ткани. Исследования, использующие прямой впрыск привитых клеток только игнорировать эти важные элементы. 2,5,6Дизайн ткани сочетая эти ингредиенты до сих пор не разработаны. Здесь мы приведем пример интегрированных конструкций с использованием наслоение узорчатыми клеточных листов с двумя различными типами биологических полученных материалов, содержащих тип орган клеток цель и эндотелиальные клетки для повышения новое образование сосудов в "ткани". Хотя эти исследования сосредоточены на генерации сердца, как ткани, эта конструкция ткань может быть применен к другим, чем сердце с минимальными дизайна и существенных изменениях, многих органов, и предназначается, чтобы быть вне-полки продукт для регенеративной терапии. Протокол содержит пять детальные шаги. Чувствительны к температуре поли (N -isopropylacrylamide) (pNIPAAM) используется для покрытия чашках для тканевых культур. Затем конкретной ткани клетки культивировали на поверхности с покрытием пластин / micropattern поверхностей с образованием клеток листы с сильным боковым спаек. В-третьих, базовая матрица создается для ткани путем объединения пористую матрицу с неоваскулярной Permissiве гидрогели и эндотелиальные клетки. Наконец, клеточные листы поднимаются из блюд в pNIPAAM покрытием и переносили в базовом элементе, в результате чего полное конструкцию.
Protocol
1 Создание Плиты pNIPAAM покрытием
- Растворить 2,6 г pNIPAAM в 2 мл 60% толуола / 40% раствора гексана.
- Смесь нагревают до 60 ° С в течение 10 мин с перемешиванием, до тех пор, pNIPAAM не растворится.
- Вырезать фильтровальную бумагу в 60 мм круга диаметром и бумагу в воронке Бюхнера.
- Фильтр решение через воронку Бюхнера в предварительно взвешенный стеклянный стакан (не использовать пластик, как гексан будет оплавление пластмассовых деталей).
- Стакан помещают и содержание под колокольню вакууме (24 фунтов на квадратный дюйм) O / N (16 ч). Примечание: До остаток не взаимодействует с изопропил он будет окислять поэтому убедитесь, что он не вступает в контакт с кислородом.
- Взвесьте стакан установить вес pNIPAAM.
- Добавить изопропиловый спирт в pNIPAAM, создавая 50/50 вес / вес раствора.
- Поместите 2 мл раствора на поверхности планшета для культуры ткани, и слой в течение 5 мин в УФ-свете.
- Промыть пластины с 2 мл теплой PBS в два разаПеред использованием в клеточной культуре.
2 Создание Сотовые листы
Примечание: Сотовые листы для первичных клеток органа-мишени могут быть созданы с использованием ряда различных методов, или путем нанесения культуры ткани поверхностей с термо-полимера реагируют, как описано здесь. Предварительно покрытых термочувствительных пластин предлагают также ряда поставщиков.
Примечание: Этот протокол является для культуры с использованием 35 мм блюдо. Вкратце, клетки сначала инкубировали при 37 ° С в течение не менее 24 ч при слиянии установить боковые соединения между соседними ячейками. Чтобы освободить сотовые листы, плиты подвергаются воздействию температур ниже 32 ° C. Ячейка лист затем переносили в сильной базовой волокнистой матрицы, содержащей неоваскулярной разрешающий гидрогель с эндотелиальными клетками сосудов.
- Изолировать клеточной популяции. Примечание: Этот метод зависит от индивидуальных процедур вывода и типа клеток. Крыса аорты гладкая муSCLE клетки (RASMC) используются в данном примере. Эти первичные клетки гладкой мускулатуры, выделенные из брюшной аорты крысы.
- Промывают клетки 2 мл теплого PBS.
- Добавить 3 мл трипсина (или другого раскалывания / диссоциации раствора) к клеткам в течение 5 мин.
- Блокировка трипсина путем добавления 3 мл культуральной среды, или фосфатного буферного раствора (PBS), содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS).
- Собирают клетки в коническую пробирку и считать аликвоту.
- Спин клеток при 1000 оборотов в минуту (228 мкг) в течение 5 мин.
- Аспирируйте супернатант и ресуспендирования клеток в их питательной среды (SmGM2 плюс пуля комплект питательная среда используется для RASMC).
- Поместите носителей, содержащих клетки на 35 мм термочувствительной пластины - пластины, покрытой pNIPAAM в концентрации, которая будет достичь 100% слияния. Примечание: RASMCs, что число было установлено, что 100 000 клеток / см 2. Тем не менее, в связи с потерей клеток во время прохождения, 120% от этой VA LUE используется.
- Поместите в инкубатор при 37 ° CO / N. Примечание: Важно, чтобы поддерживать клетки при 37 ° С, чтобы поддерживать клеточную адгезию к пластине.
3 Получение Учредительном Matrix
Примечание: Различные 3D волокнистые матрицы могут быть использованы в слой волокнистой матрицы сильное между тонкими листами клеток. Вот несколько примеров: Gelfoam, биостекло, природные acellularized материалы 26 или nanospun материалов 27,28 свиной матрица мочевого пузыря (UBM) используется в этих исследованиях был щедро обеспечена от нашей сотрудника, доктора Badylak 29.
- Перед использованием определения характеристик матрицы включая отсутствие клеточной содержания, если используется матрица decellularized, 27,28 конкретных жизнеспособность клеток, а пустое пространство. 22
- Обрежьте предварительно стерилизуют в матрицу желаемого размера и формы. Примечание: Здесь, перфорации используется для резки диаметром 4 мм круг.
Примечание: Эндотелиальные клетки могут быть получены из различных источников, в том числе дифференциации из стволовых клеток или клеток-предшественников. Здесь HUVECs используются.
- Используйте любой разрешительный гидрогель (фибрин, коллаген гели), если сшивающего время является достаточно коротким, чтобы позволить клеткам оставаться жизнеспособным. Примечание: Здесь Гиалуроновая кислота (ГК) на основе гель сшитой с дисульфидный мостик используется.
- Подготовьте гидрогель HA в соответствии с протоколом компании.
- Соберите эндотелиальные клетки и разогнать в одном решении клеток с использованием 1x трипсин. Примечание: Accutase или клеточной диссоциации буфера также могут быть использованы для одного дисперсии клеток.
- Отключение фермента трипсина с использованием такого же количества ингибитора трипсина сои (если это важно, что клетки не вступают в контакт с сывороткой) или 10% FBS в PBS, сбор раствора / клеток в 15 мл коническую трубку.
- Cр а ф клетки, и рассчитать объем необходимой для размеров патч (ранее количественно). Примечание: Для 4 мм патча, используются здесь 2000000 эндотелиальные клетки.
- Выписка 2000000 клетки, и поместите в новый 15 мл коническую трубку.
- Отжим при (228 мкг) в течение 5 мин.
- Аспирируйте супернатант, оставляя клетки в виде гранул в конической трубе.
- Смешать жидкие материалы HA и желатин в 1: 1 рационе. Затем добавляют 80% от общего объема в коническую пробирку, содержащую осадок.
- Ресуспендируют эндотелиальные клетки в 1: 1 HA / смесь желатина
- Поместите приостановленные клетки в смеси HA / желатина в базовой волокнистой матрицы со стадии 2.
- Добавить 1/5 (20 процентов) от общего объема требуемой из сшивающего агента
- Инкубировать в течение 1 часа при 37 ° С.
5 Выделение Сотовые листы
- Снимите 35 мм pNIPAAM обращению пластин, содержащих ячейки из инкубатора и место в капот культуре клеток приRT.
- Быстро аспирации СМИ из клеток, и добавьте 2 мл 6% нормальной желатина, который был нагрет до 37 ° С.
- В то время как желатин еще теплый, разместить кристаллической решетки металла в желатин, погружая его ниже поверхности нормальной желатина (Видео 1).
- Поместите всю плиту на льду в течение 5 до 7 мин, позволяя желатин, чтобы укрепиться.
- После 7 мин, используют шпатель, чтобы тщательно отделить желатиновые края со стороны пластины, а затем с помощью щипцов для подъема решетки металла от пластины Примечание: 6% желатина, и клетка лист должен снять с решеткой.
- Перемещение клеток листа в чашку и поместить поверх базовой волокнистой матрицы-гидрогель комбинации, тщательно установив решетку в верхней части конструкции. Примечание: верхушечный сторона ячейки листа по-прежнему будет в верхнем положении.
- Добавить 2 мл теплой СМИ (37 ° C).
- Инкубируйте O / N позволяет лист клеток прилипать к поверхности гидрогеля.
- Удалить тон решетки металла после решение согревает (примерно 1 час), или на следующий день.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Блок-схема (рисунок 1) показывает общую способ изготовления многослойной патч. Сотовые листы отделены от pNIPAAM обработанной пластины, понижая температуру ниже 32 ° C. Затем клетки лист помещается на верхней части поперечно-сшитого гидрогеля, содержащей эндотелиальные клетки высевают на основной волокнистой матрицы (фиг.1). Предварительно обработанные термочувствительных пластин также может быть использован для создания клеточных листов. Специальные топологические поверхности используются специально шаблон (т.е. выровнять) клетки 30.
Основание волокнистой матрицы могут быть сформированы из матрицы decellularizing нативной ткани или electrospun. Здесь, лист материала волокнистый был сокращен до диаметра 4 мм для патч-основания (Рисунок 2A). Характеристика этого материала имеет важное значение для определения количества гидрогеля, который можно использовать для заполнения пустот. Матрица используется здесь был Пред.стрпотихоньку характеризуется и опубликованы. 22
В гидрогели, содержащие эндотелиальные клетки поперечно-сшитый после применения гидрогеля жидких компонентов га до волокнистой матрицы. Флуоресцентный / микроскопии показывают живых клеток, окрашенных кальцеина AM (фиг.2В), которые были захвачены в поперечно-сшитого гидрогеля.
Процесс создания пласт клеток изображается (рисунок 3), в том числе сравнение между нашими pNIPAAM покрытием пластин и предварительно покрытых пластинами, приобретенных у поставщика. RASMC высевают на pNIPAAM обрабатываемой поверхности, по крайней мере, 16 ч при 37 ° С. Это минимальное время позволяет клеткам создавать свои боковые границы спайки с соседними клетками (Рисунок 3А). Примечание: Клетки должны быть слияния установить эти боковые сноубордистов. После культивирования в течение по крайней мере 16 часов, тарелка клеток должны быть перемещены в РТ на падение ниже 32 ° C, и используя фразу Fили 5-8 мин ускоряет процесс охлаждения (Рисунок 3B). Падение температуры изменяет конформационные угол контакта покрывающего материала, позволяющего клеток листа отрываться от пластины. Фиг.3С показан сотовый листовой подъема от пластины.
Плиты с покрытием в лаборатории работал хорошо, через некоторое оптимизации, для создания и перемещения клеток листов. Рисунок 4D показывает сливающийся монослой RASMC перед передачей. Когда клетки были разрешены для подъема, листы, как правило, сложить и прилипают к себе (рисунок 3е). В самом деле, манипулируя клеток листов на в доме, созданного pNIPAAM или приобретенные было трудно, и часто приводит к разрыву листов (рисунок 3F). Поэтому была разработана решение для передачи листов. После того, как клетки извлекали из термостата и начинают круто, 6% желатина были использованы для покрытия ячейки с дополнительным Metal Lattice встроены в гель (Рисунок 3G). Как пластина охлаждается, клетки поднимается, а желатин затвердевает. Использование щипцов, gelatin- решетки и сотовый лист может быть удален вместе с пластины культуры; все в то же время (рисунок 3H). Затем эти три компоненты размещены на верхней части, основанного на конструкции (Рисунок 3I). Здесь клеток листа (розовый) гораздо больше, чем основной базовой матрицы (густой белый матрицы под листом розового клеток). Ячейка лист может быть легко обрезать до нужного размера.
Конечный патч клеток (фиг.4) создается путем наслоения пласт клеток на предварительно комплекса базе коммутационной и разрешающей гидрогеля. Снизу вверх, патч состоит из волокнистой матрицы затравку гиалуроновая кислота, гидрогель, содержащий эндотелиальные клетки, а затем клетки лист слой поверх этой матрицы. Ранние попытки манипулировать клеток листов без использования желатина / решетки АппарАТУС привело в очень небольших клеточных листов, что часто сложенными и рвались (Рисунок 4A-D вид сверху). 4А представляет собой раннюю патч дизайн фоторобот сочетающую Mitotracker красный окрашенные RASMC (4В), кальцеин AM зеленые флуоресцентные HUVECs (Рисунок 4С), а также изображения в проходящем свете (рис 4D). Ближе 10x изображения поставляются для сотового листа и HA / гидрогель без матрицы (Рисунок 4E-H). Фиг.4Е является композицией mitotraker красного (Рисунок 4F), Кальцеин AM зеленый HUVECs (Рисунок 4G) и проходящий свет ( Рисунок 4H). Вид снизу (базовой матрицы, HA / HUVEC), и клеток листовых образов каждого компонента шоу на рисунках 4i-L. Композитные изображения является рис 4I, с отдельными частями, представленных на рисунке 4J-L, Рис 4J шпотоки клеточной листа (красный), эндотелиальные клетки (зеленые) находятся в рисунке 4K, и изображение передачи (Рисунок 4L) составное изображение (рисунок 4M) показывает патч с равномерным клеток-лист, покрывающий всю площадь матрицы без сгибания или разрывов. На рисунках 4 М-Р также снизу смотрит в матрицу. Рис 4N является клетка листа, содержащий нейтрального красного. Опять же, толстые красные полосы появляются вокруг матрицы, так как лист складки в этих областей, непосредственно примыкающих к краю матрицы. Светопропускание томография (рис 4o) показывает морфологию клеток и структуру матрицы. Наконец (Рисунок 4P), матрица имеет особое качество флуоресцирующих на той же длине волны Dapi. Таким образом, ультрафиолетовое возбуждение матрицы используется для четкой его просмотра отделить от клеток листа (ярко-красный). Края пластыря могут быть урезаны, чтобыудалите все края брезента, которые висели над краями матрицы.
Рисунок Диаграмма 1 Поток ткани Ассамблеи. Cell-листы создаются путем посева клеток на thermoresponsive пластин pNIPAAM покрытием, и позволяет достаточно времени для клеток достичь слияния и установить боковые соединения с соседними клетками. Ячейка лист выпущен путем снижения температуры (желтый диск). Одновременно, эндотелиальные клетки встраиваются в неоваскулярной разрешительной HA гидрогеля, вводится в пустоты пространства сильнее базовой волокнистой матрицы, и химически сшитого (белый диск). Ячейка лист (желтый диск) является то слоистый с комбинацией эндотелия матрицы (белый), по мере необходимости. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобыпосмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рисунок 2. Изображения базовой матрицы и эндотелиальной инкапсуляции. (А) сильным основанием волокнистой матрицы пробита в круглую форму. Здесь 4 мм в диаметре используется на основе модели животных в естественных условиях. (B) HUVECs окрашенных Mitotracker зеленый (Кальцеин AM), взвешенных в ГК гидрогели на поверхности базовой матрицы (10X). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть больше версия этой фигуры.
Рис.3 Создание Сотовые листы. () RASMC сultured на pNIPAAM обработанных 35-мм блюда в течение 16 ч (10x). (В) RASMC сняты после размещения пластины на льду в течение 5-7 мин. (С) Изображение краю листа клеток освобождения от коммерчески приобрести thermoresponsive культуры клеток блюдо (10X). (DF) изображения изображают аналогичные результаты для генерации клеток листов из блюд в доме созданной pNIPAAM покрытием. (D) Сливной RASMC вырос на 35 мм стандартные чашки для тканевых культур (4x). (E ) После охлаждения, клеточные листы контракт и складками, как они отдельно (4X). (F) В связи с хрупкостью одноклеточного листа, клеточные листы часто повреждено во время подъема или других манипуляций (4X). (G) В Для того чтобы уменьшить перфорации в клетки листа, металлический экран был использован в качестве физической поддержки, чтобы помочь передачу клеточных листов. RASMC окрашивали нейтральным красным, покрыта 6% желатина и поддержки пористой металлической экраном,й затвердеть. (H) При поддержке экраном, сотовые листы передаются с минимальным ущербом (4X) (Я). больше клеток листа слой RASMC (розовый цвет) помещают в верхней части сильнее базовой волокнистой патч-гидрогель комбинации (стрелка). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рисунок 4 изображения слоистых сотовых патч. Клетки культивировали на pNIPPAM покрытием поверхности, а затем перемещены в виде листа к поверхности волокнистой матрицы. Ранние испытания, которые не были переданы с желатином / решетке металла привело небольших рваных патчей (AD). () Композитный образ (BD),(В) RASMCs в двух листов, окрашенных Mitotracker красного, и (с) HUVECs окрашенных зеленым цветом, и (D) в проходящем свете. (E) составное изображение клеточной-листа в сочетании с сильным основанием волокнистой матрицы-гидрогель, содержащий комбинацию Calceing AM окрашивали HUVECs (зеленый) и (F) Mitotracker Red RASMCs. (G) зеленый флуоресцентный HUVECs приостановлено в гидрогеля. (H) Передача образ сильнее базовой волокнистой матрицы-гидрогель комбинации. глядя (Я) составное изображение с Дно патча вверх через сильнее базовой волокнистой матрицы (не окрашенных), HA, содержащий HUVECs (зеленый), и сотовый лист RASMCs (красный), соответственно. (J) красный флуоресцентный RASMCs лист, как видно через базовую волокнистой матрицы- гидрогель сочетание. (К) зеленый флуоресцентный HUVECs. (L) Коробка передач образ патч конструкции.(М) Композитный картина сотовых листов (красный) над базой волокнистая матрица-гидрогель комбинированной (autofluorescent-синий). (N) Ячейки в оболочку из листовой база волокнистая матрица-гидрогель сочетание шоу увеличился флуоресценции по краям связано с группировка клеток. (O) Передача образ конструкции. (P) Природный волокнистый база матрица autofluorescent в DAPI (синий длина волны). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Фильм 1 . Процесс передачи листы клеток выделен в дополнительном фильме, представленном в документе. Шоу кино, в ступенчатой процесса, удаление клеток из инкубатора; замена средах с 6% желатина, вставки-гометалла экран электронной, охлаждение клеток на льду, передача клеток из чашки, покрытой pNIPAAM на другой чашке, образу клеток во время передачи, и, наконец, удаление экрана от листа.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Критические шаги в протоколе включают: покрытие поверхностей пластины с thermoresponsive полимера и манипулирования клеток листы после охлаждения пластин. Поскольку различные клетки обладают различными физическими свойствами, как адгезивности, время подъема должна быть оптимизирована для каждого типа клеток. Второй, и наиболее значительно сложным компонентом этого протокола, центры на манипуляции клеточной листа, важнейшего аспекта методов сборки ткани. Один слой клеток в клеточной листа довольно хрупки и легко могут разорвать, если манипулировать с помощью пинцета. Более того, когда сотовые листы не удерживается на месте, они, как правило, контракт и может раз легко. Предлагаемый клеток листа передачи с использованием поддерживающей экран помогает манипулировать листом хрупкой клеток.
Методика конструкции представлены в этой рукописи обеспечивает довольно низкую стоимость подход к созданию клеток лист для различных тканевой инженерии Appliкатионов. Кроме того, создание пластины pNIPAAM покрытием в университетской лаборатории могут быть стандартизированы с помощью этого метода и модификаций к протоколу могут быть сделаны, чтобы разместить несколько типов клеток, и поверхностей. Использование сотовых листов, а не неорганизованных отдельных клеток, помогает в сборе ткани, а также может увеличить вероятность выживания и интеграции имплантированных тканей. Тем не менее, в естественных условиях способ доставки (не упоминается в данном протоколе) из этих конструкций должны быть оптимизированы для каждого типа ткани. Будущие приложения включают изыскания и оптимизированные методики генерации тканей для конкретных систем органов.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Reagents | |||
| Calcein-AM | Invitrogen | C3099 | Cell tracker / live dye |
| Lysotracker Red | Invitrogen | L7528 | Cell tracker |
| Neutral Red | Sigma | N7005 | Visible Cell dye |
| pNIPAAM | Sigma Aldrich | 412780250 | Poly(N-isopropylacrylamide) |
| Toluene | Sigma Aldrich | 244511-1L | |
| Hexane | Sigma Aldrich | 296090-1L | |
| RAOSMC | Lonza | R-ASM-580 | Rat Aortic Smooth Muscle Cells |
| SmGM2 | Lonza | CC-4149 | Smooth Muscle Media |
| HUVEC | Invitrogen | C-003-5C | Human Venous Endothelial Cells |
| HyStem | Glycosan/Biotime | ||
| Isopropyl alcohol | VWR International | BDH1133-4LP | |
| Trypsin | Corning Cellgro | 25-053-C1 | |
| PBS | Gibco | 14287-072 | |
| FBS | Gibco | 16140-071 | |
| Specific Equipment | |||
| Filter paper | Ahlstrom | 6310-0900 | |
| Buchner Funnel | Sigma Aldrich | Z247308 | |
| UpCell Plates | Nunc | 2014-11 | |
| UV light | Jelight Company | UVO Cleaner Model No.42 | |
References
- Ohashi, K., Okano, T. Functional tissue engineering of the liver and islets. Anat Rec (Hoboken). 297, 73-82 (2014).
- Chen, Q. Z., Harding, S. E., Ali, N. N., Lyon, A. R., Boccaccini, A. R. Biomaterials in cardiac tissue engineering: Ten years of research survey. Mat Sci Eng R. 59, 1-37 (2008).
- Jakob, P., Landmesser, U. Current status of cell-based therapy for heart failure. Curr Heart Fail Rep. 10, 165-176 (2013).
- Tongers, J., Losordo, D. W., Landmesser, U. Stem and progenitor cell-based therapy in ischaemic heart disease: promise, uncertainties, and challenges. Eur Heart J. 32, 1197-1206 (2011).
- Etzion, S., et al. Influence of embryonic cardiomyocyte transplantation on the progression of heart failure in a rat model of extensive myocardial infarction. J Mol Cell Cardiol. 33, 1321-1330 (2001).
- Masuda, S., Shimizu, T., Yamato, M., Okano, T. Cell sheet engineering for heart tissue repair. Adv Drug Deliv Rev. 60, 277-285 (2008).
- Koh, G. Y., Soonpaa, M. H., Klug, M. G., Field, L. J. Strategies for myocardial repair. J Interv Cardiol. 8, 387-393 (1995).
- Li, R. K., et al. Construction of a bioengineered cardiac graft. J Thorac Cardiovasc Surg. 119, 368-375 (2000).
- Muller-Ehmsen, J., et al. Rebuilding a damaged heart: long-term survival of transplanted neonatal rat cardiomyocytes after myocardial infarction and effect on cardiac function. Circulation. , 105-1720 (2002).
- Reinecke, H., Zhang, M., Bartosek, T., Murry, C. E. Survival, integration, and differentiation of cardiomyocyte grafts: a study in normal and injured rat hearts. Circulation. , 100-193 (1999).
- Roell, W., et al. Cellular cardiomyoplasty improves survival after myocardial injury. Circulation. 105, 2435-2441 (2002).
- Soonpaa, M. H., et al. Potential approaches for myocardial regeneration. Ann N Y Acad Sci. 752, 446-454 (1995).
- Akins, R. E. Can tissue engineering mend broken hearts. Circ Res. 90, 120-122 (2002).
- Goodell, M. A., et al. Stem cell plasticity in muscle and bone marrow. Ann N Y Acad Sci. 938, 208-218 (2001).
- Menasche, P., et al. Myoblast transplantation for heart failure. Lancet. 357, 279-280 (2001).
- Murry, C. E., Wiseman, R. W., Schwartz, S. M., Hauschka, S. D. Skeletal myoblast transplantation for repair of myocardial necrosis. J Clin Invest. 98, 2512-2523 (1172).
- Orlic, D., et al. Transplanted adult bone marrow cells repair myocardial infarcts in mice. Ann N Y Acad Sci. 938, 221-229 (2001).
- Elia, R., et al. Silk-hyaluronan-based composite hydrogels: a novel, securable vehicle for drug delivery. J Biomater Appl. 27, 749-762 (2013).
- Kai, D., et al. Stem cell-loaded nanofibrous patch promotes the regeneration of infarcted myocardium with functional improvement in rat model. Acta Biomater. , (2014).
- Hong, H. J., et al. Tracheal reconstruction using chondrocytes seeded on a poly(l-lactic-co-glycolic acid)-fibrin/hyaluronan. J Biomed Mater Res A. , (2014).
- Serpooshan, V., et al. The effect of bioengineered acellular collagen patch on cardiac remodeling and ventricular function post myocardial infarction. Biomaterials. 34, 9048-9055 (2013).
- Turner, W. S., et al. Cardiac tissue development for delivery of embryonic stem cell-derived endothelial and cardiac cells in natural matrices. J Biomed Mater Res B Appl Biomater. 100, 2060-2072 (2012).
- Sato, M., Yamato, M., Hamahashi, K., Okano, T., Mochida, J. Articular cartilage regeneration using cell sheet technology. Anat Rec (Hoboken). 297, 36-43 (2014).
- Sawa, Y., Miyagawa, S. Present and future perspectives on cell sheet-based myocardial regeneration therapy. Biomed Res Int. 2013, 583912 (2013).
- Demirbag, B., Huri, P. Y., Kose, G. T., Buyuksungur, A., Hasirci, V. Advanced cell therapies with and without scaffolds. Biotechnol J. 6, 1437-1453 (2011).
- Song, J. J., Ott, H. C. Organ engineering based on decellularized matrix scaffolds. Trends Mol Med. 17, 424-432 (2011).
- Badylak, S. F., et al. The use of extracellular matrix as an inductive scaffold for the partial replacement of functional myocardium. Cell Transplant. 15, Suppl 1. S29-S40 (2006).
- Wang, Y., et al. Lineage restriction of human hepatic stem cells to mature fates is made efficient by tissue-specific biomatrix scaffolds. Hepatology. 53, 293-305 (2011).
- Gilbert, T. W., et al. Collagen fiber alignment and biaxial mechanical behavior of porcine urinary bladder derived extracellular matrix. Biomaterials. 29, 4775-4782 (2008).
- Luna, J. I., et al. Multiscale biomimetic topography for the alignment of neonatal and embryonic stem cell-derived heart cells. Tissue Eng Part C Methods. 17, 579-588 (2011).
