Alle modeller av spontan metastatisk nyrecellekarsinom (RCC) sykdomsprogresjon kan brukes for å vurdere behandlinger i en klinisk relevant setting. Denne protokollen demonstrerer ulike prosedyrer for orthotopic nyre svulst celle implantasjon, riktig nefrektomi, og til slutt skisserer en obduksjon guide for visuell og bioluminescent scoring av metastatisk belastning og lokalisering.
En av de viktigste utfordringene for økt testing av nye eksperimentelle behandlingsformer i nyrecellekreft (RCC) er utvikling av modeller som trofast rekapitulere tidlig og sent stadium metastatisk sykdom progresjon. Typiske tumorimplantasjonen modellene benytter ektopisk eller orthotopic primærtumor implantasjon, men få er systemisk spontan metastatisk sykdom som etterligner klinisk setting. Denne protokollen beskriver viktige skritt for å utvikle RCC sykdomsprogresjon iscenesetter lik pasienter. Først, bruker den en svært metastatisk mus tumor cellelinje i en syngene modell for å vise orthotopic svulst celle implantasjon. Metoder er overfladiske og indre implantering inn i sub-capsular plass med celler kombinert med matrigel for å unngå lekkasje og tidlig spredning. Neste det beskriver prosedyrene for eksisjon av tumor bærende nyre (nefrektomi), med kritisk pre-og postoperativ mus omsorg. Til slutt, skisserer den nødvendige skritt for å overvåke og vurderemikro-og makrometastatisk sykdom progresjon, inkludert bioluminescent bildebehandling i tillegg gir en detaljert visuell obduksjon guide å score systemisk sykdom distribusjon. Målet med denne protokollen beskrivelse er å legge til rette for utstrakt bruk av klinisk relevante metastatisk RCC modeller for å forbedre den prediktive verdien av fremtidig terapeutisk testing.
Den viktigste årsaken til dødelighet hos pasienter med nyrecellekreft (RCC) er systemisk metastatisk sykdom som vanligvis oppstår etter kirurgisk fjerning av en primær tumor vokser i nyrene. Men svært få prekliniske tumormodeller evaluere eksperimentelle behandlingsformer i mus inkluderer metastatisk sykdom, og enda færre trofast rekapitulere de kliniske stadier av lokaliserte vekst, kirurgi, og spontan mikrometastatisk initiering og progresjon 1-3. Dette gapet i testing har blitt stadig viktigere i vurderingen av nye behandlingsformer som noen ganger slående anti-tumor effekter sett i dyremodeller har ikke alltid oversatt til tilsvarende vellykket behandling av pasienter fire. Slike forskjeller i resultater kan stamme fra differensial narkotika efficacies mellom lokaliserte ektopisk eller ortotopiske primærtumormodeller og sent stadium metastatisk sykdom 5-7. I tilfellet med RCC, har bare noen få studier anvendes etablertNimal protokoller som inkluderer spontan tilbakevendende sykdom som etterligner pasienter som vanligvis har hatt svulst bærende nyrer helt eller delvis fjernet 2,3. Årsakene til denne mangelen i musemodell testing varierer. Først, det er den høye dyret kostnader og iboende variabilitet av tumor celleutvalget og metastatisk potensial. For eksempel, menneskelige nyrecellelinjer har en tendens til å sjelden metastaserer, og må velges over flere runder med orthotopic primære implantasjon og metastatisk utvalg å utlede varianter som konsekvent spre og danne fjerne lesjonene (se beskrivelse av en slik human cellelinje avledning 8-10) . Motsatt, mus celler i immunkompetente modeller har en tendens til å oppføre seg aggressivt, og lave celle tall må injiseres med matrigel å redusere umiddelbar systemisk spredning tre. For det andre tekniske problemer i å utføre forsvarlig implantasjon, kirurgisk reseksjon (nefrektomi), og sporing (og kvantifisering) spontan metastatic vekst kan være utfordrende og flere kritiske variabler må vurderes ved ansettelse av denne teknikken (se diskusjon for detaljer). Hensikten med denne protokollen er å beskrive de grunnleggende trinnene (så vel som potensielle fallgruver) av orthotopic implantasjon, reseksjon (nefrektomi), og overvåking av spontan metastatisk RCC sykdom og å tilby en retningslinje for standardisert (og mer utbredt) bruker blant vitenskapelige laboratorier som vurderer effekten av eksperimentelle behandlingsformer.
Hensikten med denne protokoll er å vurdere klinisk relevant spontan metastatisk sykdom ved hjelp av en syngen tumor mus modell for å beskrive implantasjon / reseksjon teknikker. Foreløpig gjør de fleste av prekliniske studier som evaluerte nye eksperimentelle behandlingsformer ikke inkluderer studier av metastatisk sykdom og bare få rekapitulere stadier av primær tumorvekst, kirurgisk reseksjon, og eventuell spontan metastatisk spredning. Til dags dato, genmanipulerte mus modeller (GEMMs) genereres å lokke fram s…
The authors have nothing to disclose.
Vi er takknemlige til laboratoriet av Dr. Robert S. Kerbel (University of Toronto, Sunnybrook Research Institute, Toronto, Canada) for teknisk hjelp og ekspertise i utviklingen av denne prosedyren. Vi vil også gjerne takke Dr. Sandra Sexton og Roswell Park Cancer Institute Institutt for Forsøksdyr Resources. Dette arbeidet ble støttet av en pris fra Roswell Park Alliance Foundation (til JMLE).
DMEM-high glucose with Pyr. And L-Glutamine | Corning | 10-013-CV | |
FBS | Invitrogen | 10437-028 | |
0.25% Trypsin EDTA | Corning | 25-053-CL | |
1x DPBS without Calcium & Magnesium | Corning | 21-031-CV | |
Matrigel | BD Biosciences | 354234 | must be kept on ice |
Artifical tears-lubricant opthalmic ointment | Akorn Animal Health | 17478-162-35 | |
Pocket pro pet trimmer | Braintree scientific | CLP9931B | |
Alcohol swab | VWR | 326895 | |
Betadine solution swab | VWR | 67618-152-01 | |
MICRO DISSECTING sissors straight,blunt – 25mm blades – 4.5" | Southpointe surgical | RS-5982 | |
Iris Forceps, serrated, curved, 10cm long | Kent scientific | INS15915 | need two of these |
10µl Hamilton syringe | Hamilton | 7635-01 | |
30G, 45 degree, RN needle | Hamilton | 7803-07 | |
Sterile cotton tipped appicator | VWR | 10805-144 | |
High temperature cautery kit | Kent scientific | INS500392 | |
5-0 coated Vicryl, conventional cutting needle | Ethicon | J834 | |
Reflex clip applier for 7mm clips | Kent scientific | INS500343 | |
Reflex clips, 7mm, non-sterile | Kent scientific | INS500344 | |
Removing forceps, 12cm lone | Kent scientific | INS500347 | |
0.9% Sodium Chloride | Baxter Healthcare | 2B1322 | |
Buprenorphine 0.01mg/mL | |||
25G 5/8" needle | VWR | BD305122 | |
1mL syringe w/out needle | VWR | BD309659 | |
D-Luciferin | Gold Bio technology | LUCK-1G |