Abstract
Mit Labormausmodellen werden die molekularen Signalwege für die Stoffwechselleistungen der Ausdauerbelastung verantwortlich beginnt, definiert werden. Die gebräuchlichste Methode zur Beurteilung der Ausdauerübung in Mäusen nutzt gezwungen auf einem motorisierten Laufband mit einem Schock Gitter ausgestattet läuft. Tiere, die Lauf beenden werden durch die Bewegungslaufband auf einem Raster, die einen elektrischen Fuß-Schock liefert geschoben; um den negativen Reiz nicht entziehen, die Mäuse auf dem Band laufen zurück. Allerdings können Vermeidungsverhalten und psychische Belastung durch den Einsatz einer Schockgerät mit Quantifizierung der laufenden Ausdauer, sowie verwechseln Messungen der Nachtrainingszeit Serum Hormon und Zytokin-Ebenen stören. Hier demonstrieren und validieren eine raffinierte Methode, um Ausdauer laufen in naiven C57BL / 6 Mäusen auf einem motorisierten Laufband ohne Verwendung eines Schockgitter messen wir. Wenn Mäuse auf dem Laufband preacclimated, mit Gang freiwillig laufen sie beschleunigt spezifisch für jede mouse. Die Nutzung der Schock Gitter durch sanfte Ermutigung durch einen menschlichen Bediener mit einem Spatel auf den freiwilligen Bereitschaft auf Seiten der Maus laufen gepaart mit Sensibilität ersetzt. Klar Endpunkte zur Quantifizierung Laufzeit zu Erschöpfung für jede Maus definiert und in der Verhaltens Anzeichen von Erschöpfung wie gespreizt Körperhaltung und Atemschwierigkeiten wider. Diese Methode ist eine Verfeinerung, die humane sinkt auch die verwirrende Auswirkungen von Stress auf experimentellen Parameter.
Introduction
Übergewicht, Insulinresistenz und Typ-2-Diabetes sind miteinander verknüpft Stoffwechselstörungen, die tiefgreifende Auswirkungen auf die Gesundheit der sowohl in den USA und weltweit Populationen 1-4 auszuüben. Ausdauertraining kann zu verhindern, sowie Genuss, diese Bedingungen 5,6. Darüber hinaus Beurteilung der Gehgeschwindigkeit und Ausdauer werden verwendet, klinisch als Diagnosetests für Gebrechlichkeit, Sarkopenie und die Folgen anderer Erkrankungen wie chronisch-obstruktive Lungenerkrankung, bei Menschen 7.
Die zugrunde liegenden biochemischen Wege die wohltuende Wirkung des Ausdauertrainings auf die Körperzusammensetzung und der Insulinempfindlichkeit beginnen, erläutert, mit Hilfe gentechnisch veränderter Mäuse oder pharmakologisch, die erweitert oder reduziert die körperliche Belastbarkeit 8-11 Display. Allerdings haben viele solcher Studien motorisierten Laufbänder mit Schock Gitter ausgestattet, um Mäuse zu zwingen, 8-11 laufen verwendet. Tiere, die Lauf beenden werden durch geschobendie Bewegungslaufband auf einem Raster, die einen elektrischen Fuß-Schock liefert; um den negativen Reiz nicht entziehen, die Mäuse auf dem Band laufen zurück. Solche Verfahren können psychischer Stress und Vermeidungsverhalten als Störfaktoren beeinflussen experimentellen Parameter 12 einzuführen. Andere Methoden zur Messung von Ausdauer, wie die Quantifizierung der ambulanten Tätigkeit mit einem Strahlgerät Pause oder Quantifizierung von In-Käfig Rad läuft, kann durch Modulation des Tagesrhythmus, Angst, unbeabsichtigte Training oder Essen sucht Verhalten 12-16 verwechselt werden. Darüber hinaus sind diese Verfahren erfordern einzigen Gehäuse, eine andere Quelle der psychologischen Stress für Mäuse. Daher ist eine direkte Messung der sportliche Ausdauer nicht durch Stress verwechselt benötigt.
Um diese Bedenken zu beseitigen, hat sich unser Labor entwickelt und validiert eine Methode, um eine maximale Laufleistung zu bewerten und anhaltender Laufgeschwindigkeit bei untrainierten, naiven Mäusen mit Hilfe eines motorisierten Laufband nicht equipped mit einem Schock Netz. Der Raum am Ende des Laufbandes, wo der Schock Grid meistens wohnt, wird dann zu einer Plattform für die Mäuse, um Ruhe, und bietet einen Platz für Maus, die zu laufen, bis aus der Vorrichtung entfernt sitzen zu verweigern. Mäuse sind aufgefordert, von einem menschlichen Beobachter laufen mit Antippen oder Berühren mit einem Spatel auf den freiwilligen Bereitschaft auf Seiten der Maus laufen gepaart mit Sensibilität. Diese Methode wurde verwendet, um Unterschiede in der Trainingsausdauer zwischen C57BL / 6 Mäusen gentechnisch veränderten und zu kontrollieren, die in der Expression des Zytokins Interleukin abgeleitet Muskel-15 (IL-15) 16,17 unterscheiden zu quantifizieren. Diese Methode ist eine Verfeinerung, die die humane verwirrende Effekte der negativen Verstärkung durch die Verwendung eines Raster Schock verursacht abnimmt.
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Protocol
Das hier beschriebene Verfahren wurde von der VA Puget Sound Institutional Animal Care und Use Committee genehmigt und erfüllt die ILAR Leitfaden für die Pflege und Verwendung von Labortieren.
1. Versuchsvorbereitung
- Entscheiden, ob vorher Blut oder Gewebesammel bald nach dem Training erforderlich ist, und wenn ja, bestimmen die Post-Belastungs-Intervall zum Leiten solcher Verfahren. Beispiele sind die Bestimmung der Übung induzierte Hormon oder Zytokin-Freisetzung in die Zirkulation (erforderlich Blutentnahme), Bestimmung der Übung induzierte Expression von mRNA-Spezies von Interesse (erforderlich Euthanasie gefolgt von Gewebe-Sammlung). Wenn unmittelbar nach Ausübung Blut oder Gewebe Sammlung angezeigt wird, müssen Materialien für diese Verfahren auf der Hand in den Behandlungsraum. Erhalten Institutional Review Board Genehmigung und durchzuführen, gemäß der Richtlinien. Nicht alle Experimente erfordern Nachtrainingszeit Blut oder Gewebe collectiauf; Ein einfacher Vergleich der laufenden Ausdauer kann alles, was erforderlich ist.
- Im Voraus entscheiden, auf experimentellen Gruppen und Nachtrainingszeit Verfahren für Mäuse (Beschreibung siehe oben).
- Legen Sie das Laufband auf einen stabilen Tisch in einem ruhigen Raum während der laufenden Studien zu diesem Verfahren gewidmet.
- Stellen Sie das Laufband für Maus-Größe Gassen und mit einer Neigung entsprechend dem Protokoll. Die Neigung der +5 o wird hier verwendet, um Muskelschäden durch exzentrische Übung (Verlängerung der Muskeln zur gleichen Zeit wie Kontraktion), die während der Bergabfahrt erfolgt zu vermeiden.
- Ein saugfähigen Kissen unter dem Laufband, um Kot zu fangen.
2. Akklimatisierung von Mäusen auf das Laufband
Entscheiden, ob eine "sitzende" (keine Übung) Gruppe von Mäusen notwendig ist, und setzen sitzende Mäuse auf dem Laufband laufen, ohne wie in den Schritten 2.1 skizziert - 2.5. Festzustellen, ob 2 oder 4 Versuchsgruppen benötigt werden,. zB Sitzende / Übung (2 Gruppen); Ausgeübt Kontrollen / Ausgeübt Behandlung (2 Gruppen, keine sitzende Tiere); oder Sitzende / Ausgeübt x Steuer / Behandlung (4 Gruppen). Die "Behandlung" kann ein oder transgenen Knockout-Genotyp, eine pharmakologische Therapie, spezielle Diät oder anderen experimentellen Intervention.
- Lassen Sie die Maus, um das Verfahren in seinem Zimmer transportiert Käfig zu gewöhnen, mit Käfig Kollegen, mit 1 - 2 Stunden.
- Wählen Sie eine einzelne Maus und Rekord-Tag-Nummer; wiegen Maus und Rekordgewicht.
- Bewegen Sie die Maus in dem Laufband ohne Motor eingeschaltet, Akklimatisierung, ca. 5 min. Schalten Sie das Gerät auf, ohne Laufband läuft, und lassen Sie die Maus an die Maschine zu gewöhnen Lärm für weitere 5 min.
- Mäuse entfernen in der "sitzende" Gruppen (falls verwendet, siehe Anmerkung 1) aus dem Laufband an dieser Stelle und bringt sie zu ihrem Käfig oder führen nach dem Training Verfahren gemäß dem Versuchsplan (siehe Anmerkung 2).
- Nach Akklimatisierung, drehen Sie den Gurt auf eine niedrige Geschwindigkeit (10 m / min), wenn das Tier die Erkundung der Band und nicht auf der Plattform.
- Klopfen Sie leicht oder heben Sie die Hinterhand von der Maus mit einem Spatel, ein bis drei Mal, um nur ungern Tiere zu ermutigen, auf dem Laufband laufen und zu bleiben.
HINWEIS: Die meisten Mäuse leicht laufen, aber sie manchmal für kurze Zeit zu stoppen. Wenn dies der Fall, verwenden Sie den Spatel vorsichtig tippen oder heben Sie den hinteren Teil des Tier um die Wiederaufnahme der laufenden Förderung. Oft haben die Mäuse nicht zu dem Zungenspatel berührt werden; bemerken die Hand mit dem Spatel auf sie zukommen bewirkt, dass die Mäuse, etwas mehr laufen. - Starten Sie ein Labor-Timer, sobald die Maus in der Anfangsgeschwindigkeit von 10 m / min läuft.
- Drehen Sie die Geschwindigkeit langsam, wenn die Maus an der Spitze (bergauf) Ende der Gürtel, in Schritten von 1 m / min, ca. alle 2 min.
- Drehen Sie den Drehzahl auf dievorherige Einstellung, wenn die Maus immer wieder in kurzen Schüben verläuft und nicht in einem gleichmäßigen Tempo.
- Bestimmen Sie die maximale Laufgeschwindigkeit aufrechterhalten jeder Maus (in der Regel 14 bis 17 m / min für C57BL / 6 Mäuse) durch Einstellen der Geschwindigkeit und beobachten Sie die Maus. Notieren Sie sich diese Geschwindigkeit.
HINWEIS: Die Position des Tieres auf dem Laufband Queues die Ermittler über die Bereitschaft des Tieres, bei einer höheren Geschwindigkeit. Wenn die Maus am anderen (bergauf) Ende und etwa in die Wand laufen, ist es bereit, bei einer höheren Geschwindigkeit. Wenn die Maus in konstanter Geschwindigkeit ausgeführt wird, in der Mitte des Laufbandes kann auf seine maximale Geschwindigkeit sein oder kann weiter angepasst werden müssen, abhängig von der Qualität des Laufs.
4. Endpunkte und Mäuse, die Stop-
- Verwenden Sie den Spatel vorsichtig tippen oder heben Sie die Hinterhand der Tiere, die zu stoppen, um die Wiederaufnahme der laufenden Förderung (siehe Anmerkung 3.2). Sie den Timer für vorübergehende Unterbrechungen läuft nicht ab.
- Identifizieren und remove Maus, die zu laufen verweigern. Hinweis: Dies auf dem Datenblatt. Je nach Ihrer experimentellen Design, können Mäuse, die sich weigern an einem anderen Tag erneut getestet werden
HINWEIS: Einige Mäuse vollständig ablehnen zu laufen. Solche Mäuse wird in kurzen Stößen laufen, dann stoppen zu pflegen oder "Pedal", das heißt, sitzen auf der Plattform und nutzen ihre Vorderbeine auf dem Band. Die Haltung dieser Mäuse ist gebeugt, mit allen vier Füßen unter das Tier eingepflanzt, um nicht wieder auf dem Laufband durch den Spatel gedrückt halten. Gelegentlich eine Maus wird aggressiv gegenüber der Spatel, wenn nicht bereit zu laufen, beißen die Spatel oder Klettern bis es als eine Möglichkeit der Flucht. Es ist klar, innerhalb der ersten 5 Minuten der Studie, ob die Maus, oder wird sie nicht, laufen. Mäuse, die aus der Analyse laufen ablehnen, aber nicht zählen sie als "sitzende" Mäuse zu entfernen. - Identifizieren erschöpft Mäusen und stoppen Sie den Timer.
HINWEIS: Erschöpfung wird von drei aufeinanderfolgenden Haltestellen und Ablehnung der Wieder definiertSume trotz sanfte Ermutigung, sowie körperliche Anzeichen von Erschöpfung wie erschwerte Atmung und Körperhaltung gespreizt läuft. Mäuse erholen sich von Erschöpfung innerhalb von 30 bis 60 min. - Notieren Sie den Gesamtbetrag der Zeit läuft bei allen Geschwindigkeiten.
- Abhängig von der Versuchsplanung, entweder die Maus zurück in seinen Käfig, oder Verhaltensweisen sofort Nachtrainingszeit Verfahren wie Blut oder Gewebe Sammlung nach den Richtlinien des Instituts.
- Wischen Sie den Gurt sauber und mit einer keimtötenden Tuch nach der Prüfung jeder einzelnen Maus, so dass der Duft des vorherigen Maus nicht beeinflussen Verhalten der nachfolgenden Mäusen getestet.
- Testen Sie die nächste Maus. Verwenden Sie eine frische Spatel für jede Maus. Mäuse, die im selben Käfig aufhalten können nacheinander am selben Tag getestet werden, ohne zusätzliche Akklimatisierung an dem Eingriffsraum.
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Representative Results
Dieses Verfahren zum Messen von Übungsausdauer spiegeln genau die molekularen und Stoffwechselprofil von verschiedenen Stämmen von C57BL / 6 Mäusen, die in der Expression des Zytokins IL-15 16,17 abweichen. Transgene Mäuse, die eine Überexpression von IL-15 (IL-15 TG-Mäuse) eine deutlich Run-to-Erschöpfung Zeiten im Vergleich zu Kontrollen erhöht Wurf, während Mäuse, die IL-15 (IL-15-KO-Mäuse) aufweisen fehlt Laufzeiten deutlich vor Erreichen reduziert Erschöpfung (Abbildung 1A). Veröffentlichte Studien haben gezeigt, dass die Muskeln in Richtung einer oxidativen Phänotyp der IL-15-Tg-Mäusen 16 verschoben wird; Umgekehrt werden die Muskeln in IL-15-KO-Mäusen zu einer weniger oxidativen Phänotyp 17 .Diese Muskel Phänotypen korrelieren mit Ebenen der spontane körperliche Aktivität in einem Strahl-Break-Gerät verschoben und mit Übung Ausdauer mit Hilfe der freiwilligen Run-to-Leistungstest. Wildtyp-Kontrolle C57BL / 6 Mäusen aus zwei verschiedenen Quellen (eigene Kolonie und eines Einkaufs s upplier) zeigen keine signifikant unterschiedlichen Laufzeiten (Abbildung 1A).
Maximale nachhaltige Laufgeschwindigkeit in IL-15-KO-Mäuse (1B) unterschieden sich nur. Streckenlauf (nicht gezeigt) kann ebenfalls berechnet und statistisch analysiert werden können; Die Abtrennung der beiden Parameter (Zeit bis zur Erschöpfung und Geschwindigkeit) liefert weitere Informationen.
Eine unvermeidbare Einschränkung dieser Technik ist, dass einige Mäuse weigern, freiwillig ausführen. Der Anteil der jungen Wildtyp-Kontrollmäuse, die sich weigern zu laufen ist um rund 10% bei 4 Monate alt. Der Anteil der Ablehnungen steigt auf 20% bei 8 Monate alt, und steigt auf mehr als 60% um 16 Monate alt (Abbildung 2). Allerdings ist der Anteil der Ablehnungen in der älteren Altersgruppe in IL-15-TG Mäusen (Abbildung 2) deutlich niedriger.
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Abbildung 1. Repräsentative Daten aus dem freiwilligen Run-to-Leistungstest. (A) Zeit bis zur Erschöpfung, (B) Anhaltlaufdrehzahl. Für beide Platten wurden 4 Stämme C57BL / 6 männlichen Mäusen getestet: WT CON1 (Wildtyp-Wurfgeschwister Kontrollen von in-house transgenen Kolonie); IL-15-TG (Interleukin-15-Überexpression transgenen Mäusen 16, Wurf von WT CON1); WT CON2 (Wildtyp-Kontrollmäusen, im Handel erhältlich); IL-15 KO (Interleukin-15-Knockout-Mäusen 17, im Handel erhältlich). Balken stellen Mittelwert + SEM; n = 7-29 Mäusen pro Gruppe. Die Daten wurden durch Kruskal-Wallis-ANOVA auf den Rängen analysiert; Bars mit verschiedenen Exponenten sind bei P <0,05 signifikant unterschiedlich. Daten aus früheren Publikationen 16,17 nachgedruckt mit Genehmigung der Zeitschrift.
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Abbildung 2. Prozentsatz der Mäuse weigert, freiwillig laufen mit dem Alter zunimmt. Männlich Interleukin-15-Überexpression transgenen Mäusen (IL-15-TG) und Wurfkontrollen, sowohl auf C57BL / 6 Hintergrund wurden in der freiwilligen Run-to-Protokoll getestet Erschöpfung 4, 8, 12 und 16 Monate alt. Balken stellen Anteil der Mäuse in jeder Altersgruppe, die sich weigerte zu laufen (n = 11 bis 29 Mäuse pro Gruppe). Daten wurden von Fisher-Exakt-Test analysiert; Sternchen kennzeichnet einen signifikanten Unterschied bei P <0,05 zwischen Kontrolle und IL-15 TG bei 16 Monaten. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Figur zu sehen.
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Discussion
Beschrieben wird hier ein Verfahren zur freiwilligen Lauf Ausdauer in Mäusen zu bewerten unter Verwendung eines motorisierten Laufband ohne Verwendung eines Schockgitter. Diese Methode kann die Unterschiede zwischen Unterlinien von C57BL / 6 Mäusen, die in der Expression des Zytokins IL-15, was wiederum bewirkt, dass Unterschiede in der Expression von Faktoren, die Übungsausdauer 16,17 zugrunde unterscheiden offenbaren. Im Einklang mit den Grundsätzen der "drei R" in der Versuchstierkunde, kann diese Methode als eine humanere Alternative, oder Verfeinerung, zur Zwangs Übung Protokolle, die einen Schock Gitter 8-11 nutzen verwendet werden. Zwangs Übung kann auch vorstellen die verwirrende Effekte von psychischem Stress und Vermeidungsverhalten 12 auf beiden Laufparameter und das post-exercise-Messungen, wie Serum Zytokine und Hormone.
Eine Begrenzung der Technik ist, dass die Bestimmung des nachhaltigen maximale Laufgeschwindigkeit, Ablehnung zu laufen, und der Endpunkt von exhaustion jeweils subjektiv durch den menschlichen Beobachter beurteilt. Allerdings werden die meisten jungen Mäusen freiwillig laufen, wenn langsam an das Gerät gewöhnt; Darüber hinaus Mäuse zeigen in der Regel klar Verhaltens Zeichen der Ablehnung zu laufen und von dem Erreichen Erschöpfung nach läuft. Dennoch erfolgreiche Durchführung dieses Verfahrens erfordert eine gewisse Beobachtungs Empfindlichkeit der Tiere. Daher wird empfohlen, dass ein einzelner Beobachter, vorzugsweise Behandlung verblindete, für alle Run-to-Erschöpfung Tests innerhalb einer Studie verwendet werden, um ein Vorurteil des Beobachters bei der Bestimmung dieser Parameter zu minimieren. Trotz der etwas subjektiven Natur der Endpunkte zur Bestimmung der Fahrgeschwindigkeit und die Zeit bis zur Erschöpfung, ist diese Methode robust und können deutliche Unterschiede in der Lauf Ausdauer durch Hochregulation 16 oder 17 Löschung von einem einzigen Gen, IL-15 zu detektieren.
Dieses Protokoll wurde mit verschiedenen Unterlinien von C57BL / 6 Mäusen gezeigt, und nicht mit anderen strai getestetns von Labormäusen. C57BL / 6 Mäuse wurden verwendet, da dies die häufigste genetische Hintergrund für transgene und Knockout-Mäusen 18 verwendet. Eine Studie von Lightfoot et. al. zeigten, dass 19 C57BL / 6 Mäusen in der Nieder mittleren Bereich der sportliche Ausdauer unter Inzuchtstämme von Mäusen durchgeführt. Jedoch, dass Studie verwendet wurden gezwungen Laufband mit einer Stoß Gitter und viel höhere Betriebsgeschwindigkeiten, während bei diesem Verfahren sowohl die maximale Dauergeschwindigkeit und der Dauer der Lauf einzelne jeder Maus. Zusätzlich wurden die Daten ausschließlich von männlichen Mäusen hier angezeigt. Während die Technik arbeitet mit weiblichen Mäusen (nicht dargestellt), so werden diese im allgemeinen nicht in Studien von transgenen und Knockout-Mäusen verwendet.
Da in diesem Protokoll läuft freiwillig ist, ist der Verlust der Daten von einigen Mäusen, die sich weigern zu laufen unvermeidbar und sollten berücksichtigt werden, wenn die Schätzung Gruppengrößen auf statistische Signifikanz notwendig. Zusätzlich representative Daten zeigen, dass die Tendenz zu verweigern, steigt mit dem Alter in Wildtyp C57BL / 6 Mäuse laufen. Daher kann diese Technik nicht geeignet für die Bestimmung der Trainingsausdauer in sehr alten Mäusen. Allerdings genetische Manipulation zu IL-15-Expression signifikant zu erhöhen senkte den Anteil der Ablehnungen bei älteren Mäusen, was darauf hindeutet, dass die Weigerung, laufen auch reflektieren verringerte körperliche Leistungsfähigkeit bei älteren Tieren. Freiwillige Trainingshäufigkeit sowie Gehgeschwindigkeit, sinken mit dem Alter in beiden Nagern und Menschen und kann von reflektierenden Rückgänge in Stoffwechselparameter und Muskelmasse 20-22 sein. Dabei wurden die Parameter der Zeit zu Erschöpfung und maximal erreichbare Fahrgeschwindigkeit getrennt in den repräsentativen Daten präsentiert. Streckenlauf (m) kann durch Multiplizieren der Zeit-zu-Erschöpfung von maximal erreichbare Fahrgeschwindigkeit berechnet werden; Allerdings ist diese Maßnahme etwas ungenau aufgrund der Anfangsphase des Versuchs bei etwas niedrigeren Geschwindigkeiten. Einige Modelle von Nagetier Laufbänderhaben digitale Aufnahme Funktionen, die eingestellt werden können, Streckenlauf genau zu berechnen; jedoch stellt die Zeit bis zur Erschöpfung und Geschwindigkeit separat können mehr Informationen zu erhalten.
Die reduzierte Genauigkeit der Endpunkte, Unterschiede in der Laufgeschwindigkeit, und die Komplikation von Mäusen, die in der hier beschriebenen Technik laufen verweigern, werden von der Überlegung, dass die Technik menschlicher und weniger Stress für Mäuse ausgeglichen. Allerdings waren die Blutmarker muriner Stress wie Corticosteron Ebenen nicht bestimmt rigoros zeigen, dass diese Technik weniger belastend als Zwangsausübungs mit einem Schlag Netz. Solche Bestimmungen sind technisch schwierig in akuten Übung Experimente, weil Glukokortikoid Ebenen werden durch die bei der Beschaffung von Blutproben bei Mäusen 23 verwendet Anästhetika verwechselt und durch Übung selbst 24. Eine Studie zeigte, dass 25 chronische gezwungen Übung mit einem Schock Gitter induzierte sowohl psychologische als auch Immunstress inMäuse, während freiwillige Rad läuft (in denen Mäuse konnten sowohl die Dauer und Geschwindigkeit der Laufsteuerung) hatte den gegenteiligen Effekt. Schließen Verhaltens Prüfung der Mäuse, in Verbindung mit ihrer Laufbereitschaft gezeigt und die langen Laufzeiten der freiwilligen Lauf Kämpfe, deuten darauf hin, Mäuse werden nicht übermäßig von der hier beschriebenen Protokoll betont. Darüber hinaus repräsentative Daten zeigen, dieses Protokoll können deutliche Unterschiede in der Laufausdauer durch Einbringen oder Löschen eines einzigen Gen-Produkt in einem Inzuchtstamm 16,17 offenbaren. Daher Dieses Protokoll stellt eine humanere und wissenschaftlich sinnvolle Alternative zu Zwangs Übung zur Bestimmung der Ausdauerübung in Mausmodellen.
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Disclosures
Die Autoren haben keine Interessenkonflikte offen zu legen.
Acknowledgments
Unterstützt von Merit Bewertung # BX001026 aus dem Department of Veterans Affairs (LSQ), und die Nutzung von Ressourcen und Einrichtungen bei VA Puget Sound Health Care System, die transgene Ressourcenkern an der Universität von Washington Nathan Shock Center of Excellence in der biologischen Grundlagen des Alterns (NIA # 5P30AG-013280) und der University of Washington Diabetes Endokrinologie Research Center (NIH # P30 DK-17047). Wir danken Cynthia Pekow DVM und Kari L. Koszdin DVM, VA Puget Sound, vorausgesetzt, hilfreiche Kommentare zum Manuskript.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Open Rodent Treadmill Exer-3/6 | Columbus Instruments, Columbus OH | 1050RM | This catalog number is for models without shock grid. Shock grids can be removed manually from older models (Eco 3/6) |
| Sani Cloth Germicidal Towlettes | PDI- Professional Disposables, Inc., Orangeburg, NY | usually ordered through local facility | Contains 10% isopropyl alcohol; any equivalent product can be used. |
| Tongue depressors | Any local supplier | ||
| Laboratory timer | Any supplier | ||
| IL-15 TG mice* | JAX, Bar Harbor, ME | 011002 | Murine IL-15 transgene expressed from modified human alpha-skeletal actin promotor with altered signal sequence to facilitate secretion. |
| C57BL/6J mice (wild-type)* | JAX, Bar Harbor, ME | 000664 | Control mice for IL-15 TG |
| IL-15 KO mice* | Taconic Farms, Germantown, NY | 4269-M | Homozygous IL-15 "knockout" mice on C57BL/6 background |
| C57BL/6NTac (wild-type)* | Taconic Farms, Germantown, NY | B6-M | Control mice for IL-15 KO |
| *Optional; mouse lines and treatments can be specific to the experimental protocol. |
References
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