Abstract
Använda modeller laboratorie mus är de molekylära vägar som ansvarar för de metabola fördelarna med uthållighetsträning börjar definieras. Den vanligaste metoden för bedömning av övningen uthållighet i möss utnyttjar tvingas köra på en motoriserad löpband utrustad med en stöt rutnät. Djur som slutar springa skjuts av den rörliga löpbandet på ett rutnät som ger en elektrisk fotchock; att undkomma negativ stimulans, mössen återvänder till att köra på bältet. Däremot kan undvikande beteende och psykisk stress på grund av användning av en chock apparat störa kvantifiering av rinnande uthållighet, samt förbrylla mätningar av exercise serumhormon och cytokinnivåer. Här visar vi och validera en förfinad metod för att mäta köra uthållighet i naiva C57BL / 6 laboratoriemöss på en motoriserad löpband utan att använda en chock rutnät. När möss preacclimated till löpbandet, de kör frivilligt med gånghastigheter specifika för varje mouse. Användning av chocken nätet ersätts av försiktig uppmuntran av en mänsklig operatör med hjälp av en tungspatel, tillsammans med känslighet för den frivilliga vilja att köra på den del av musen. Tydliga endpoints för att kvantifiera gångtid till utmattning för varje mus definieras och återspeglas i beteendemässiga tecken på utmattning, såsom utspärrade hållning och ansträngd andning. Denna metod är ett humant förfining som också minskar störande effekterna av stress på experimentella parametrar.
Introduction
Fetma, insulinresistens och typ 2-diabetes är inbördes metabola sjukdomar som utövar djupgående effekter på hälsan hos både USA och i hela världen populationer 1-4. Endurance motion kan förebygga samt behandla dessa förhållanden 5,6. Vidare är bedömningen av gånghastighet och uthållighet utnyttjas kliniskt som diagnostiska test för svaghet, sarkopeni, och konsekvenserna av andra sjukdomar såsom kronisk obstruktiv lungsjukdom, i mänskliga ämnen 7.
De biokemiska vägar som ligger bakom de positiva effekterna av uthållighetsträning på kroppssammansättning och insulinkänsligheten börjar belysas med hjälp av genetiskt eller farmakologiskt modifierade möss som visar förbättrade eller minskade fysisk kapacitet 8-11. Dock har många sådana studier utnyttjade motoriserade löpband utrustade med chock galler för att tvinga möss att köra 8-11. Djur som slutar springa skjuts avden rörliga löpbandet på ett rutnät som ger en elektrisk fotchock; att undkomma negativ stimulans, mössen återvänder till att köra på bältet. Sådana förfaranden får införa psykisk stress och undvikande beteende som påverkande faktorer som påverkar experimentella parametrar 12. Andra metoder för att mäta uthållighet, såsom kvantifiering av ambulatorisk aktivitet med hjälp av en balk-break apparat eller kvantifiering av in-buren hjul igång, kan komma på skam genom module dygnsrytm, ångest, oavsiktlig träning eller mat söker beteende 12-16. Dessutom är dessa förfaranden kräver samma hölje, en annan källa till psykisk stress för möss. Därför behövs en direkt mätning av motion uthållighet inte förvirrad av stress.
För att undanröja dessa farhågor har vårt laboratorium utvecklat och validerat en metod för att bedöma maximal framkomlighet och ihållande rinnande hastighet i otränade, naiva möss med hjälp av en motoriserad löpband inte equipped med en chock rutnät. Utrymmet i slutet av bandet, där chock rutnätet bosatt oftast, blir då en plattform för möss till vila, och ger en plats för möss som vägrar att köra för att sitta fram ur apparaten. Möss uppmuntras att köra genom en mänsklig observatör som använder försiktigt packas eller röra med en tungspatel, tillsammans med känslighet för den frivilliga vilja att köra på den del av musen. Denna metod har använts för att kvantifiera skillnader i utövandet uthållighet mellan genetiskt modifierade och styra C57BL / 6 möss som skiljer sig i uttryck av muskeln härledd cytokin interleukin-15 (IL-15) 16,17. Denna metod är ett humant förfining som minskar störande effekter av negativ förstärkning som orsakats av användning av en chock rutnät.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Proceduren beskrivs här godkändes av VA Puget Sound Institutional Animal Care och användning kommittén, och i överensstämmelse med ILAR Guide för skötsel och användning av försöksdjur.
1. Experimentellt Framställning
- Bestäm i förväg om blod eller vävnadssamling strax efter träning är nödvändigt, och i så fall bestämma den efterträningsintervall för ledning av sådana förfaranden. Exempel innefattar bestämning av ansträngningsutlöst hormon eller cytokin frisättning ut i cirkulationen (kräver blodinsamling), bestämning av ansträngningsutlöst uttryck av mRNA av intresse (kräver dödshjälp följt av vävnadssamling). Om direkt efter träning blod eller vävnadssamling anges, har material för dessa förfaranden till hands i förfarandet rummet. Ta emot granskningsnämnder godkännande och utföra enligt Kemikalieinspektionens föreskrifter. Inte alla experiment kräver exercise blod eller vävnad EXKLUSIVAom; en enkel jämförelse av rinnande uthållighet kan vara allt som behövs.
- Bestäm i förväg på experimentella grupper och exercise förfaranden för möss (se beskrivning ovan).
- Placera löpbandet på ett stadigt bord i ett tyst rum tillägnat under de körs försöken till detta förfarande.
- Ställ in löpband för mus stora banor och med en lutning lämplig till protokollet. Lutningen av 5 o används här för att undanröja muskelskada grund excentrisk träning (förlänga muskeln samtidigt som kontraktion) som inträffar under utförsåkning igång.
- Placera en absorberande dyna nedanför löpbandet för att fånga avföring.
2. Acklimatisering av möss till löpband
Bestäm om en "stillasittande" (ingen motion) grupp möss är nödvändigt, och utsätta stillasittande möss till löpbandet utan att köra enligt beskrivningen i steg från 2,1 till 2,5. Ta reda på om 2 eller 4 experimentella grupper krävs,. t.ex. Stillasittande / Motion (2 grupper); Utnyttjade Kontroller / Utnyttjade Behandling (2 grupper, inga stillasittande djur); eller, Stillasittande / Utnyttjade x Kontroll / behandling (4 grupper). Den "behandling" kan vara en transgen eller knockout genotyp, en farmakologisk regim, särskild kost, eller andra experimentella ingrepp.
- Låt musen för att anpassa sig till det förfarande rummet i dess transporterade hem bur, med bur kompisar, för 1 - 2 tim.
- Välj en enda mus och spela tag-nummer; väger musen och spela vikt.
- Placera musen i löpbandet utan att motorn påslagen för acklimatisering, ca 5 min. Slå på strömmen, utan löpbandet kör, och låter musen acklimatisera sig till maskinbuller i ytterligare 5 min.
- Ta bort möss i "stillasittande" grupper (om den används, se not 1) från löpbandet på denna punkt och återlämna dem till deras bur eller bedriva efter motion rutiner enligt den experimentella designen (se not 2).
- Efter acklimatisering, slå bandet till en låg hastighet (10 m / min) när djuret utforskar bältet och inte på plattformen.
- Knacka försiktigt eller lyfta bakdelen på musen med en tungspatel, en till tre gånger, för att uppmuntra motvilliga djuren att stanna på löpbandet och springa.
OBS: De flesta möss kommer att köra lätt, men ibland stannar under korta perioder. När detta inträffar, använd tungspatel för att försiktigt knacka eller lyfta den bakre delen av djuret för att stimulera återupptagande av drift. Ofta behöver mössen behöver inte röras med tungspatel; märker handen med tungspatel kommer emot dem orsakar mössen att köra lite mer. - Starta ett laboratorium timer när musen går med utgångshastighet på 10 m / min.
- Vrid hastighet upp långsamt när musen är överst (uppför änden) av bandet, med ökningar av 1 m / min, med ca en 2 min.
- Vrid hastigheten ner tilltidigare inställning om musen körs flera gånger i korta stötar och inte i en stadig takt.
- Bestäm det största ihållande löphastighet på varje mus (vanligen 14 - 17 m / min för C57BL / 6 möss) genom att justera hastigheten och tittar på musen. Spela denna hastighet.
OBS! Placeringen av djuret på löpbandet Köer utredaren att villigheten hos djuret för att köra med en högre hastighet. Om musen är längst (mark) ände och på väg att köra in i väggen, är det redo att köra med högre hastighet. Om musen körs i stadig takt i mitten av löpbandet kan det vara på sin maximala hastighet, eller kan behöva ytterligare justering, beroende på kvaliteten på körningen.
4. Ändlägen och Möss som Stop
- Använd tungspatel att försiktigt knacka eller lyfta bakdelen av de djur som stannar, för att uppmuntra till återupptagande av drift (se not 3.2). Inte stoppa timern för tillfälliga avbrott i kör.
- Identifiera och Avtagbare-möss som vägrar att köra. Notera detta på databladet. Beroende på din experimentell design, kan möss som vägrar testas på en annan dag
OBS: Vissa möss kommer att helt vägra att köra. Sådana möss kommer att köras i korta stötar, så sluta att rykta eller "pedal", det vill säga sitta på plattformen och använda sina framben på bandet. Den hållningen av dessa möss är böjd, med alla fyra fötterna planterade under djuret att hålla från att tryckas tillbaka på löpbandet med tungspatel. Ibland en mus blir aggressiv mot den tungspatel när ovillig att springa, bita tungspatel eller klättra upp det som ett sätt att fly. Det är tydligt i den första 5 min av rättegången om musen, eller inte, kör. Ta bort möss som vägrar att köra från analysen, men räkna inte dem som "stillasittande" möss. - Identifiera utmattade möss och stoppa timern.
OBS: Konsumtion definieras av tre på varandra följande hållplatser och vägran att taförbrukar kör trots mild uppmuntran, plus fysiska tecken på utmattning, t.ex. ansträngd andning och utspärrade hållning. Möss återhämta sig från utmattning inom 30 till 60 minuter. - Spela den totala mängd tid att köra i alla hastigheter.
- Beroende på experimentell design, antingen tillbaka musen är till sin bur, eller genomföra omedelbara exercise procedurer såsom blod eller vävnadssamling enligt institutionens riktlinjer.
- Torka bältet ren med bakteriedödande servett efter att ha testat varje enskild mus så att doften av den tidigare musen inte påverkar beteendet hos efterföljande möss testades.
- Testa nästa musen. Använd en färsk tungspatel för varje mus. Möss som bor i samma bur kan testas i följd på samma dag utan extra acklimatisering proceduren rummet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Detta förfarande för mätning av motion uthållighet speglar exakt molekylär och metabola profilen av olika stammar av C57BL / 6 möss som skiljer sig i uttryck av cytokin IL-15 16,17. Transgena möss som överuttrycker IL-15 (IL-15 TG möss) uppvisar signifikant ökad run-to-utmattning tider jämfört med kull kontroller, medan möss som saknar IL-15 (IL-15 KO-möss) uppvisar minskade signifikant körtider innan det når utmattning (Figur 1A). Publicerade studier har visat att musklerna förskjuts mot en mer oxidativ fenotyp i IL-15 TG möss 16; omvänt är muskler i IL-15 KO möss flyttats till ett mindre oxidativ fenotyp 17 .Dessa muskel fenotyper korrelerar med nivåer av spontan fysisk aktivitet i en balk-break apparat, och med motion uthållighet med hjälp av frivilliga run till utmattning test. Wild-kontrolltyp C57BL / 6 möss från två olika källor (in-house koloni och en kommersiell s upplier) inte uppvisar signifikant olika körtider (Figur 1A).
Maximal ihållande rinnande hastighet skilde sig endast i IL-15 KO möss (Figur 1B). Avstånd run (visas ej) kan även beräknas och analyseras statistiskt; Men separation av de två parametrarna (tid till utmattning och hastighet) ger mer information.
En oundviklig begränsning av denna teknik är att vissa möss vägrar att köra frivilligt. Andelen unga vildtyp kontrollmöss som vägrar att köra är cirka 10% vid 4 månaders ålder. Andelen avslag ökar till 20% vid 8 månaders ålder, och ökar till mer än 60% av 16 månaders ålder (Figur 2). Dock är andelen avslag i den äldre åldersgruppen signifikant lägre hos IL-15 TG-möss (Figur 2).
oad / 51846 / 51846fig1highres.jpg "width =" 500 "/>
Figur 1. Representativa data från frivilliga run till utmattning test. (A) Tid till utmattning, (B) Ihållande löphastighet. För båda panelerna, var fyra stammar av C57BL / 6 hanmöss testade: WT CON1 (vildtyp kull kontroller från egen transgen koloni); IL-15 TG (interleukin-15 som överuttrycker transgena möss 16, kullsyskon i WT CON1); WT CON2 (vildtyp kontroll möss, erhållas kommersiellt); IL-15 KO (interleukin-15 knockout-möss 17, erhållas kommersiellt). Staplar representerar medel + SEM; n = 7-29 möss per grupp. Data analyserades med Kruskal-Wallis envägs ANOVA på led; barer med olika överskrifter är signifikant olika vid P <0,05. Data omtryckt från tidigare publikationer 16,17, med tillstånd från tidskriften.
es / ftp_upload / 51846 / 51846fig1highres.jpg "width =" 500 "/>
Figur 2 Procentandel möss vägrar att köra frivilligt ökar med åldern. Manliga interleukin-15 som överuttrycker transgena möss (IL-15 Tg) och kull kontroller, både på en C57BL / 6 bakgrund, testades på frivilliga run-to-utmattning protokoll vid 4, 8, 12 och 16 månaders ålder. Bars representerar andel av möss i varje åldersgrupp som vägrade att köra (n = 11-29 möss per grupp). Data analyserades med Fishers exakta test; asterisk betecknar en signifikant skillnad vid P <0,05 mellan kontroll och IL-15 TG vid 16 månaders ålder. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Beskrivs här är en metod för att bedöma frivilliga kör uthållighet i laboratoriemöss med hjälp av en motordriven löpband utan användning av en chock rutnät. Denna metod kan avslöja skillnader bland sub-linjer av C57BL / 6 möss som skiljer sig i uttryck av cytokinet IL-15, vilket i sin tur medför skillnader i uttrycket av faktorer som ligger bakom motion uthållighet 16,17. I enlighet med principerna i "Tre R: s" djur i laboratorium, kan denna metod användas som ett mer humant alternativ, eller förfining, till tvångsträningsprotokoll som utnyttjar en chock rutnät 8-11. Tvingad motion kan också införa störande effekter av psykologisk stress och undvikande beteende 12 på både kör parametrar och efter träning mätningar såsom serum cytokiner och hormoner.
En begränsning av teknik är att fastställandet av ihållande maximal löphastighet, vägran att köra, och slutpunkten för exhaustion vardera bedöms subjektivt av den mänskliga observatören. Men de flesta unga möss springa frivilligt om acklimatiserad långsamt till apparaten; Dessutom möss uppvisar generellt tydliga beteendemässiga tecken på vägran att köra och att ha nått utmattning efter att ha kört. Trots framgångsrik överledning av denna teknik kräver viss observatör känslighet för djuren. Därför rekommenderas det att en enda observatör, företrädesvis behandlings förblindade, att användas för alla de run-to-utmattning tester inom en studie för att minimera observatör bias i fastställandet av dessa parametrar. Trots den något subjektiva karaktär ändpunkterna för bestämning av hastighet och tid till utmattning, är denna metod robust och kan upptäcka tydliga skillnader i rinnande uthållighet på grund av uppreglering 16 eller deletion 17 av en enda gen, IL-15.
Detta protokoll demonstrerades med olika underlinjer C57BL / 6 möss, och testades inte med andra strains av laboratoriemöss. C57BL / 6 möss utnyttjas, eftersom detta är den vanligaste genetiska bakgrunden användes för transgena och knockout-möss 18. En studie av Lightfoot et. al. 19 indikerade att C57BL / 6 möss utförs i låg till medelhög utbud av motion uthållighet bland inavlade stammar av laboratoriemöss. Dock utnyttjade den studien tvingade löpband kör med en chock nätet och mycket högre körhastigheter, medan den här tekniken, både den maximala ihållande hastighet och varaktigheten av löpning är individuell för varje mus. Dessutom var uppgifterna enbart från hanmöss visas här. Medan tekniken fungerar med honmöss (icke visad), är dessa inte generellt utnyttjas i studier av transgena och knockout-möss.
Sedan körs i detta protokoll är frivilligt, är förlust av data från några möss som vägrar att köra oundviklig och bör beaktas vid uppskattningen grupp storlekar som krävs för statistisk signifikans. Dessutom representative data visar att tendensen att vägra att köra ökar med åldern i vildtyp C57BL / 6 möss. Därför denna teknik kanske inte är lämpliga för bestämning av motion uthållighet i mycket gamla möss. Men för att genmanipulation öka IL-15 expression signifikant sänkte andelen avslag i äldre möss, vilket tyder på att vägran att köra kan också bero på minskad fysisk kapacitet hos äldre djur. Frivillig träning frekvens, samt gånghastighet, minskar med åldern på både gnagare och människor, och kan vara reflekterande av nedgångar i metaboliska parametrar och muskelmassa 20-22. I detta avseende har parametrarna för tid till utmattning och högsta ihållande löphastighet separat i de representativa uppgifter. Avstånd run (m) kan beräknas genom att multiplicera tiden till utmattning av högsta ihållande löphastighet; är dock något felaktigt denna åtgärd på grund av den inledande fasen av körningen med något lägre hastigheter. Vissa modeller av gnagar löpbandhar digitala inspelningsfunktioner som kan ställas in för att beräkna avstånd kör exakt; dock kan presentera tiden till utmattning och hastighet separat ge mer information.
Den minskade precision endpoints, skillnader i löphastighet och komplikationen hos möss som vägrar att köra i den teknik som beskrivs här, balanseras av vederlaget att tekniken är mer humant och mindre stressande att möss. Men blodmarkörer för mus stress, t.ex. kortikosteron nivåerna inte var fast besluten att bevisa rigoröst att denna teknik är mindre stressande än påtvingad övning med hjälp av en chock rutnät. Sådana bestäm är tekniskt svårt i akuta träningsförsök eftersom glukokortikoid nivåer förvirrad av bedövningsmedel som används för att erhålla blodprov hos möss 23 och genom träning i sig 24. En studie 25 visade att kronisk tvingade träning med hjälp av en chock rutnät inducerade både psykologiska och immun stress imöss, medan frivillig hjul kör (där möss kunde kontrollera både hastighet och längd av löpning) haft motsatt effekt. Nära beteende undersökning av möss, i kombination med deras visat vilja att springa och de långa löptider frivilliga löpande anfall, föreslår möss inte otillbörligen stressade av det protokoll som beskrivs här. Dessutom representativa data indikerar detta protokoll kan avslöja tydliga skillnader i kör uthållighet på grund av införande eller borttagning av en enda gen produkt inom en inavlad stam 16,17. Därför utgör detta protokoll en mer human och vetenskapligt användbart alternativ till tvångs övning för bestämning av motion uthållighet i musmodeller.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har inga intressekonflikter att lämna ut.
Acknowledgments
Stöds av Merit Review # BX001026 från Department of Veterans Affairs (LSQ), och användning av resurser och anläggningar på VA Puget Sound Health Care System, de transgena Resource Kärna vid University of Washington Nathan Shock Center of Excellence i Basic Biology of Aging (NIA # 5P30AG-013.280), och University of Washington Diabetes Endocrinology Research Center (NIH # P30 DK-17047). Vi tackar Cynthia Pekow DVM och Kari L. Koszdin DVM, VA Puget Sound, förutsatt hjälp kommentarer på manuskriptet.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Open Rodent Treadmill Exer-3/6 | Columbus Instruments, Columbus OH | 1050RM | This catalog number is for models without shock grid. Shock grids can be removed manually from older models (Eco 3/6) |
| Sani Cloth Germicidal Towlettes | PDI- Professional Disposables, Inc., Orangeburg, NY | usually ordered through local facility | Contains 10% isopropyl alcohol; any equivalent product can be used. |
| Tongue depressors | Any local supplier | ||
| Laboratory timer | Any supplier | ||
| IL-15 TG mice* | JAX, Bar Harbor, ME | 011002 | Murine IL-15 transgene expressed from modified human alpha-skeletal actin promotor with altered signal sequence to facilitate secretion. |
| C57BL/6J mice (wild-type)* | JAX, Bar Harbor, ME | 000664 | Control mice for IL-15 TG |
| IL-15 KO mice* | Taconic Farms, Germantown, NY | 4269-M | Homozygous IL-15 "knockout" mice on C57BL/6 background |
| C57BL/6NTac (wild-type)* | Taconic Farms, Germantown, NY | B6-M | Control mice for IL-15 KO |
| *Optional; mouse lines and treatments can be specific to the experimental protocol. |
References
- Hill, J. A., Wyatt, H. R., Reed, G. W., Peters, J. C. Obesity and the environment: where do we go from here? Science. 299 (5608), 853-855 (2003).
- Kahn, S. E., Hull, R. L., Utzschneider, K. M. Mechanisms linking obesity to insulin resistance and type 2 diabetes. Nature. 444 (7121), 840-846 (2006).
- Van Gaal, L. F., Mertens, I. L., De Block, C. E. Mechanisms linking obesity with cardiovascular disease. Nature. 444 (7121), 875-880 (2006).
- Pischon, T., Nothlings, U., Boeing, H.
- Benton, C. R., Wright, D. C., Bonen, A. PGC-1α-mediated regulation of gene expression and metabolism: Implications for nutrition and exercise prescriptions. Appl. Physiol. Nutr. Metab. 33 (5), 843-862 (2008).
- Handschin, C., Spiegelman, B. M. The role of exercise and PGC1alpha in inflammation and chronic disease. Nature. 454 (7203), 463-469 (2008).
- Vasunilashorn, S., et al. Use of the Short Physical Performance Battery score to predict loss of ability to walk 400 meters: analysis from the InCHIANTI study. J. Gerontol. A Biol. Med. Sci. 64 (2), 223-229 (2009).
- Wang, Y. X., et al. Regulation of muscle fiber type and running endurance by PPARδ. PLoS Bio. 2 (10), e294 (2004).
- LeBrasseur, N. K., et al. Myostatin inhibition enhances the effects of exercise on performance and metabolic outcomes in aged mice. J. Gerontol. A Biol. Med. Sci. 64 (9), 940-948 (2009).
- Burch, N., et al. Electric pulse stimulation of cultured murine muscle cells reproduces gene expression changes of trained mouse muscle. PLoS ONE. 5 (6), e10970 (2010).
- Li, L., et al. Mitochondrial biogenesis and peroxisome proliferator-activated receptor-γ coactivator-1α (PGC-1α) deacetylation by physical activity. Diabetes. 60 (1), 157-167 (2011).
- Knab, A. M., et al.
- He, Y., et al. IL-15 Receptor deletion results in circadian changes of locomotor and metabolic behavior. J. Mol. Neurosci. 41 (2), 315-321 (2010).
- Wu, X., Hsuchou, H., Kastin, A. J., Rood, J. C., Pan, W. Essential role of interleukin-15 receptor in normal anxiety behavior. Brain Behav. Immun. 24 (8), 1340-1346 (2010).
- Pistilli, E. E., et al. Loss of IL-15 receptor α alters the endurance, fatigability, and metabolic characteristics of mouse fast skeletal muscles. J. Clin. Invest. 121 (8), 3120-3132 (2011).
- Quinn, L. S., Anderson, B. G., Conner, J. D., Wolden-Hanson, T. W. IL-15 overexpression promotes endurance, oxidative energy metabolism, and muscle PPARδ, SIRT1, PGC-1α, and PGC-1β expression in male mice. Endocrinology. 154 (1), 232-245 (2013).
- Quinn, L. S., Anderson, B. G., Conner, J. D., Wolden-Hanson, T., Marcell, T. J. IL-15 is required for post-exercise induction of the pro-oxidative mediators PPARdelta and SIRT1. Endocrinology. , (2013).
- Ward, J. M., Anver, M. R., Mahler, J. F., Devor-Henneman, D. E. Chapter 13, Pathology of mice commonly used in genetic engineering (C57BL/6; 129; B6,129; and FVB/N). The Pathology of Genetically Engineered Mice. Ward, J. M., Mahler, J. F., Maronpot, R. R., Sundberg, J. P. , Iowa State University Press. Ames, IA, Chapter. 161-179 (2000).
- Lightfoot, J. T., Turner, M. J., Debate, K. A., Kleeberger, S. R.
- Turner, M. J., Kleeberger, S. R., Lightfoot, J. T. Influence of genetic background on daily running-wheel activity differs with aging. Physiol. Genomics. 22 (1), 76-85 (2005).
- Haight, T. J., van der Laan, M. J., Manini, T., Tager, I. B. Direct effects of leisure-time physical activity on walking speed. J. Nutr. Health Aging. 17 (8), 666-673 (2013).
- Studenski, S. Gait speed and survival in older adults. JAMA. 305 (1), 50-58 (2011).
- Jacobsen, K. R., Kalliokoski, O., Teilmann, A. C., Hau, J., Abelson, K. S. The effect of isoflurane anaesthesia and vasectomy on circulating corticosterone and ACTH in BALB/c mice. Gen. Comp. Endocrinol. 179 (3), 406-413 (2012).
- Sellers, T. L., Jaussi, A. W., Yang, H. T., Heninger, R. W., Winder, W. W. Effect of the exercise-induced increase in glucocorticoids on endurance in the rat. J. Appl. Physiol. 65 (1), 173-178 (1988).
- Cook, M. D., et al. Forced treadmill exercise training exacerbates inflammation and causes mortality while voluntary wheel training is protective in a mouse model of colitis. Brain Behav. Immun. 33, 46-56 (2013).
