Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

Entübasyon-aracılı intratrakeal (IMIT) damlatma: A Noninvaziv, Lung-özel Dağıtım Sistemi

doi: 10.3791/52261 Published: November 17, 2014

Summary

Reaktiflerin Entübasyon aracılı intratrakeal (IMIT) instilasyon solunum yolu hastalıkları, hem de akciğer içine doğrudan tedavi reaktifler aşılamak için bir yöntem incelenmesi için mükemmel, invazif olmayan bir yöntemdir. Bu klinik öncesi test için uygun bir hızlı ve yüksek oranda çoğaltılabilir bir yöntemdir.

Abstract

Solunum hastalığı çalışmalar tipik vekil sistemleri gibi fare modellerinin kullanımını içerir. Bununla birlikte, özellikle üst solunum yollarının (ÜRT) 'de murin ve insan solunum yolu şekli bir çok fizyolojik farklılıklar vardır. Potansiyel olarak, bu hastalıklar çalışma fare modeli olan faydalılığı sınırlandırmakta, burun içi instilasyon teknikler kullanılarak Bazı modellerde, murin burun boşluğunda bu farklılıklar, alt solunum yolunun (MDT), hastalığın ilerlemesi ve sunum üzerinde önemli bir etkiye sahip olabilir. Bu nedenlerden dolayı, RBB tutulumu yokluğunda lrt hastalığı araştırmak amacıyla, farenin akciğerlerinde doğrudan bakteri aşılamak için bir tekniğin geliştirilmesi de avantajlı olacaktır. Biz bu akciğer özel uygulama tekniği entübasyon-aracılı intratraşel (IMIT) instilasyonunu tabirinin. Bu yöntem ile daha invaziv nda geleneksel sırasında oluşabilecek kan, damlatma için potansiyeli en aza indirirÖnal cerrahi intratrakeal enfeksiyon yaklaşımlar ve arızi sindirim sistemi teslim olasılığını sınırlar. IMIT farelerin akciğerine bakterilerin doğrudan dağıtım aracılık katetere, kör bir iğne sokulması ile, soluk borusu içine doğru bir kateter yerleştirme sağlamak için bir ara adım, entübe takip edildiği, bir, iki aşamalı bir işlemdir. Bu yaklaşım, akciğerlerde reaktifi mükemmel dağılımı ile akciğerlere, bir teslimat> 98% etki kolaylaştırır. Bu nedenle, IMIT insan solunum yolu hastalığı araştırmak için belirteci olarak fareler kullanma yeteneği üzerine iyileştirilmesi, doğrudan akciğere lrt hastalık ve tedavi teslim incelemek için yeni bir yaklaşımı temsil etmektedir. Ayrıca, bu iletim sisteminin doğru ve tekrarlanabilirliği de Good Laboratory Practice Standartları (LU) için uygun, hem de akciğer yüksek verim gerçekleştirilmesini gerektiren reaktifler geniş bir iletim yapar.

Introduction

Fareler, solunum hastalıklarının bir sayısız da dahil olmak üzere çok sayıda insan hastalık açıklamalarını modellemek için kullanılmıştır. Yedek hastalık modelleri genellikle tipik olarak önemli fizyolojik veya iki konak modellerinde immün farklılıklar nedeniyle, bir modellenen hastalığın tüm yönlerini özetlemek mümkün değildir. Böylece, model sistemlerinin iyileştirilmesi bir gol suretler daha yakından bir hastalık sürecini ayna veya özgün ana bilgisayar sisteminde görüldüğü gibi yanıt ev sahipliği yapmaya izin yaklaşımlar geliştirmektir. Onlar havasını hangi mekanizma fareler ve insanlar arasında birçok önemli fizyolojik farklılıklar vardır. URT ve LRT boyutları arasında anlamlı rasyometrik farklılıkların bu farklar bulunuyor. Bu fareler> 100 toplam akciğer kapasitesi 1,2 karşı normalize insanlara ÜRT yüzey alanı, kat sahip olduğu tahmin edilmiştir. Bu durumda, fare konka breathi çok daha büyük bir oranını teşvik etmek için solunan havanın çok daha geniş bir filtreleme için izinburun boşluğunun enfeksiyon hastalığın ilerlemesinde önemli bir rol oynar eğer ng, pnömoni çalışmaları üzerinde önemli bir etkiye sahip olabilir.

Çeşitli yaklaşımlar insan gibi solunum yolu hastalığı araştırmak için, farelerin ciğerlerine bakterileri aşılamak için kullanılmıştır. Bu yaklaşımlardan en çok sıvı bir süspansiyon, bir fare, bir ya da her iki burun tatbik edildiği intranazal aşılama vardır. Nispeten basit iken, burundan aşılamadan 3-5 yoluyla lrt damlatma verimliliğini etkileyebilir kullanılan anestezinin damlatılması hacmi ve türü olarak uyarılar. Spesifik olarak, Miller ve diğ. en az 50 ul lrt 6 içine bakteri damlatma ile sonuçlanmadı hacimlerde, Francisella tularensis bu burun içi instilasyon göstermiştir. Anestezi için enjekte ketamin / ksilizin karşıt olarak inhale izofluran kullanırken Onlar daha iyi lrt instilasyonunu gözlendi. Ancak, ExperiencYersinia pestis, intranazal aşılama e izofluran (MBL, yayınlanmamış veriler) kıyasla daha tutarlı bir aşı, ketamin / ksilazin kullanılarak elde edilebilir gösterir. Bu farklılıklar kullanılan patojene veya laboratuar prosedürlerinde, çeşitlilikten dolayı, ama önemlisi bu teknikte olası değişkenliği vurgulamak atfedilebilir. Bundan başka, başlangıç ​​bakteriyel inokulum nispeten düşük bir yüzdesi ciğere erişmesi burun içi instilasyon göstermektedir kısa bir süre sonra hasat akciğerlere bakterilerin büyük sayıda düşündüren (Y. pestis durumunda, sadece% 10 instilasyon 7 1 saat sonra elde edildi) RBB olarak muhafaza edilir (veya mide-barsak kanalında Yutulan) olabilir. Organizma, insan hastalığı ile tutarlı bir şekilde, sıçangil burun boşluğunu kolonize edebilen ise, bazı hastalık modellerinde, ÜRT mukoza bakteri, bu önemli bir çökelme hastalığın ilerlemesinin anlamamıza karıştırıcı etki. Örneğin, in vivo kullanımı </ Em> görüntüleme, bu burun içi instilasyon yöntemiyle 8 ile iletildikleri zaman, insan urt kolonize etmez Burkholderia pseudomallei, sıçangil burun boşluğunun ezici fırsatçı enfeksiyonlara neden olduğu gözlenmiştir.

Farelerin ciğerlerine bakterilerin aşılanması için diğer yöntemler de enfeksiyonlu hastalık araştırmalarında kullanılmıştır. Transoral [sindirim sistemi ve LRT]; ancak, burun damlatılması ile karşılaştırıldığında bu yöntemler çoklu siteleri (örneğin, aerosol [URT ve LRT] enfeksiyon başlatılması için potansiyelini ortadan kaldıracak olmadan daha fazla teknik uzmanlık ve / veya pahalı ekipman gerektiren eğilimindedir ve cerrahi intratraşel [LRT ve kan akışı]). Enfeksiyonun ikincil siteleri ile ilişkili olabilecek olası komplikasyonları göz önüne alındığında, biz UrT atlar ve doğrudan anestezi farelerin ciğerlerine patojeni sunan bir intratraşel yaklaşım geliştirmeye çalıştılar, ama aynı zamanda yanlışlıkla inoculat sınırlarKan akımı veya GI kanalı içine iyon. Bu amaçla, entübasyon-aracılı intratraşel (IMIT) damlatılması önce damlatılmasını uygun kateter yerleştirme doğrulamak için bir ara adım ekleyerek inokulum lrt instilasyonunu garanti cerrahi olmayan bir prosedür olarak geliştirilmiştir. Görsel akciğerlerde inokulum geniş dağılımını göstermektedir, ve P. Bu yöntem, boya instilasyonunu kullanılarak tarif edilmektedir aeruginosa, instilasyon akciğere Bu yöntemin oldukça etkili teslimatı (> aşı% 98) gösterdi. Önemli olarak başlangıçta bakteriyel verilmesi için geliştirilmiş olup, IMIT de için etkin bir araç sunmaktadır: diğer solunum yolu hastalığı modellerinde ii) 'ın özel terapötik teslimat çalışma için çeşitli moleküllerin i) damlatma ve iii) bazik akciğer fonksiyon testleri, hedef dahil akciğere siRNA teslimat.

Protocol

Not Burada açıklanan tüm işlemler gözden ve Louisville Kurumsal Biyogüvenlik Komitesi (protokol # 13-056) ve Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (protokol # 13-064) Üniversitesi tarafından onaylanmıştır.

Boya hazırlanması 1.

  1. % 0.1 seyreltin (ağırlık / hacim) PBS içinde Coomassie Parlak Mavi ve 0.45 uM şırınga filtresi kullanılarak filtre ile sterilize.

Pseudomonas aeruginosa Kültür 2. Hazırlık

  1. İlaçların uygulanmasından önce 15 saat, tek bir bakteri kolonisi ile sıvı kültürü içinde 3 ml inoküle.
  2. Bir karıştırıcıda (200 rpm) ile 37 ° C'de, kültür 15 saat büyütün.
  3. Santrifüj 30 saniye için bir 1.5 ml mikrofüj tüpü 12.000 x g, kültürün 1 mi.
  4. Ortamı çıkarın ve PBS içinde 1 ml pelletini.
  5. PBS içinde bakteriyel stok süspansiyonu 01:10 bir kısım seyreltin ve belirlemek için seyreltilmiş bakteri süspansiyonu OD 600 ölçmekbakteri konsantrasyonu.
  6. IMIT aşılama için 50 ul bir dağıtım hacmi kullanılarak bakteriyel inokulum istenen konsantrasyona getirilebilmesi için PBS içinde Bakteriyel stok süspansiyonu seyreltin.

3. IMIT damlatma

  1. Izofluran anestezi indüksiyon odasına farelerin bir grup yerleştirin ve 2 kullanarak uyutmak -% 3 izofluran / oksijen karışımı.
  2. Sedasyon ilk başlangıcında, dik fareyi tutan, fare ense ve boğaz arkasına sonda iğne ile% 2 lidokain solüsyonu 10 ul yönetmek ve çözüm aşağı epiglot için süzülmesini bekleyin. Anestezi odasına fare dönün.
    1. Lokal anestezik olarak tam etkisini almaya lidokain izin vermek 5 dakika en az izin.
  3. Fareler sedasyon istenen seviyeye geldikten (60 bpm ~ oranı nefes), sedasyon korumak için% 2 izofluran azaltır.
  4. 250 ul gaz geçirmez içine Önyükle'nin boya veya bakteriyel aşı22 G, uzun künt iğne ile hassas şırınga uygun.
    1. İlk şırınga Teflon piston tarafından ölçülen havanın 150 ul kadar çizin. Daha sonra, şırınga gövdesi üzerindeki 200 ul işaretine 150 ul işaretinden Teflon® pistonu ilerletilmesiyle aşı 50 ul belirlemektedir.
      NOT: Örnek entübe fare içine çıktığında, 50 ul süspansiyon akciğerlerde inokülumu dağıtacak 150 ul hava yastığı ile, ilk teslim takip edilecektir.
  5. Indüksiyon odasından bir fareyi çıkarın ve entübasyon platformda sırtüstü yatıyordu. Velcro şerit bağlı bir O-ring ile kesicilerin çengel ve platforma Velcro sabitleyerek platforma fareyi sabitleyin. 45 ° eğim için fareyi kaldırın.
  6. Bir mikro pamuk aplikatör kullanarak, Dominant eli kullanarak, bir dönme hareketi ile dilini çekin.
  7. Nondominant yandan, her iki ma bir entübasyon spekülümleriyle bir faaliyet otoskop uyum kullanındil çekilmesini intain ve glottis görselleştirmek.
  8. Baskın elinizle, (kateter maruz kateter 10 mm silikon kovanı ile uyum) fare trakea içine 10 mm derinliğe kadar kateteri oturma, fareyi entübe 20 G kateter aracılığıyla dişli bir kılavuz tel kullanın. Otoskop / speculum çıkarın.
  9. Fare doğru kısaca renkli bir boya içeren 1/16 "açık bir boru Luer bağlı uzunluğu takarken dominant olmayan elle kateter güvence entübe edildiğini onaylayın.
    NOT: boya hızla nefes cevaben ileri geri göç edecek.
  10. Entübasyon onay Bu noktada kurulmuş değil eğer sonraki adımlara devam etmeyin. Entübasyon başarısız teşebbüs ederse, entübasyon bir ek girişimi için kateter ve kılavuz tel sıfırlayın.
    NOT: Bu fare travma olmaksızın tek oturumda fare ikiden fazla entübasyon girişimi önerilemez olduğunu.
  11. Devamsıvı süspansiyon / hava yastığı içeren hassas şırınga / Künt iğne takarken dominant olmayan elle kateteri sabitleyin.
  12. Doğrudan tek bir sıvı hareket akciğer içine, sıvı / hava dağıtın ve hemen fare iğne / kateter çekilir.
  13. Bir kafes fare dönün ve anestezi kurtarma sağlar.

IMT 4. Teslim Karakterizasyonu

  1. IMIT uygulamasından sonra, uygun bir zaman sonrası aşılamadan CO 2 havasızlık fare euthanize.
  2. Bir diseksiyon gemide ötenazi fare Güvenli ve% 70 EtOH bücür şişe kullanarak göğüs ve karın ıslatın.
  3. Akciğerlerde bir görüntüleme maddesi dağılımının değerlendirilmesi ise, steril bir teknik kullanılarak hayvandan ciğerleri çıkarın ve görüntüleme için uygun olarak akciğerlere görüntüler.
    NOT:. Akciğerler uygun fiksasyon veya kriyokorunmasında yoluyla ek histolojik boyama teknikleri için hazırlanabilir </ Li>
  4. Enfekte akciğer dokusunun bakteri yükünü değerlendirirken ise, steril tekniği kullanarak hayvandan akciğerleri kaldırmak. Yer akciğerler steril içine 1 oz örnek torba tartılır. Tartın ve numune kabına + akciğer ağırlığı kaydedin.
    1. Her bir numune, çanta + dokulara steril 1 x PBS'de 1 ml ilave edilir. Örnek çanta kapatın.
    2. Örnek çanta + doku üzerinde 25 ml serolojik pipet haddeleme nazik dokuları homojenize.
    3. (Çalışılan LB veya bakteriyel türe uygun şekilde) agar plakası üzerine, akciğer, steril PBS içinde homojenat levha ve seri dilüsyonları oluşturmak:
      1. Daha sonra, agar plakası üzerinde çok kanallı göre, üçlü numuneler plaka çok kanallı pipet ile U tabanlı, 96 oyuklu bir plaka içerisinde altı kat seri seyreltme yapılması.
    4. Gece boyunca 37 ° C'de inkübe edin agar ve ertesi gün koloni oluşturan birim numaralandırmak.

Representative Results

IMIT yöntemi ile aşılanan maddenin dağılımını görselleştirmek için,% 0.1 Coomassie Parlak Mavisi 50 ul bir anestezi fare akciğerlerine damla damla akıtıldı. Fare hemen kurban edilmiş ve akciğerleri steril otopsiden yoluyla uzaklaştırılmıştır. Boyanın tüm akciğer lobları teslim edilmiş olduğu 1 göstermektedir.

IMIT yöntemi ile akciğerlere verilen bakteri miktarının, fareler üç gruba (n = 3), P. üç farklı konsantrasyonları ile akıtıldı belirlemek için aeruginosa (1.21 x 10 8, 1.21x10 7, ve 1.21 x 10 6 koloni oluşturan birim [CFU] 50 ul başına). Hemen IMIT damlatma sonrası, fareler akciğerleri çıkartılmıştır ötenazi uygulandı, ve bakteri sayıları mikroorganizma (Şekil 2) ile numaralandırılır ve karşılaştırıldı. Akıtıldı ve inokulum teslim akciğerinden kazanılan inokulum>% 98 olan, bu yöntem ile son derece verimlidirHayvanlar. Ayrıca, IMIT instilasyon bağımsız olarak aşı (= 0,9951 R2) konsantrasyonunun yüksek oranda tekrar.

Şekil 1,
Resim 1: IMIT instilasyon akciğerlere inokulum dağıtır her loblarda dağıtılmış% 0.1, Coomassie Parlak Mavisi göster mavi boya, 50 ul ile aşılanan farelerden Akciğerler..

Şekil 2,
Şekil 2:. Akciğerler Bakterilerin farelere IMIT instilasyon P. ile akıtıldı aeruginosa ve akciğerlerin içine telkin bakteri sayısı (10 CFU Log - iyileşti) tahmin Aşılama karşılaştırıldı (10 CFU Log - teslim). Her bir halka bir tek farenin (CFU / akciğer her biri için n = 3 temsil ederbakteriyel doz).

Discussion

IMIT İnstilasyon tekrarlanabilir akciğere doğrudan reaktifleri aşılamak için yeteneği var olan solunum hastalığı modellerinde yönelik önemli geliştirmeler sunuyor. Bu IMIT tekniği gerçekleştirir ideal anestezi ve caging lojistik yöneten biri iki araştırmacı, bir takım için ideal bir hızlı yaklaşım ve diğeri. Fare başına 3 dakika - Büyük çalışmaları 2 ortalama süresi taahhüdü ile IMIT kullanılarak yapılabilir. Yaklaşım bir anestezik olarak izofluran kullanımını kolaylaştırır, çünkü, fareler geri kazanımı yoluyla hayvanları izleme hayvancılık süresini azaltarak, anestezi hızla iyileşir.

IMIT yönteminin teknik açıdan en zor yönü fareler entübasyon ilk adımıdır. IMIT gerçekleştirmek için öğrenme Bireyler bu ilk kateter yerleştirilmesi aşamasında ve entübasyon sağlanması boya hareketin görsel onay yoluyla elde edilmiştir odaklanmak edebiliyoruz. Yaklaşımın faydası akciğer-spectüpte İnstilasyon yeni araştırmacı hem güvenini hem de zor bir hayvan entübe girişiminde uzman artar entübasyon teyidi kullanımı ile garanti edilmektedir. Başarılı entübasyon olasılığını optimize kilit unsurları şunlardır: Bir derin sedasyon elde i), ii) ağızda Spekül doğru yerleştirme iii) iyi derinlik yerleştirme, epiglot iyi görselleştirme izin için yeterli çalışma süresi sağlamak için aynaları dil işlem boyunca geri kalır, ve prosedür, rahat ve sürekli bir yaklaşım ile yapılır ve böylece, devirme platformun iv) kullanımı araştırmacının el destek böylece.

IMIT prosedürün sınırlamalar biri IMIT instilasyon etkinlikleri frekansı ile ilişkilidir. Cevapsız entübasyon ile ilişkili potansiyel travma nedeniyle, ikiden fazla entübasyon girişimleri (iki isabetsizlik için) tek oturumda yapılan tavsiye edilmez. IMITkabiliyeti mükemmel bir potansiyel murin akciğer içine terapötik sağlamak için kullanılacak olan, akciğere reajanı çok sık teslimat yararlanabilir Ancak terapötik rejimler IMIT için uygun olmayabilir. Bu IMIT önemli bir travma olmaksızın bir murin akciğer içine reaktifleri teslim etmek için günlük olarak kullanılabilecek bu mümkün olabilir, ancak entübasyon bağlantılı travma çoğunda olduğu gibi, yüksek vasıflı bir araştırmacı tarafından yapılan yalnızca kaçırılmış entübasyon olayla ilişkili olduğu düşünülmektedir . Bu tür yüksek frekanslı IMIT yerel veteriner hekimler ve IACUC ile ele alınmalıdır.

IMIT ek bir potansiyel bir sınırlama entübe olan fare boyutudur. 20 G kateter Bu aralıktaki değerlere sahip farelerin trakea için uygun bir boyutta olduğu bulunmuştur 22 g, - yukarıda tarif edilen IMIT prosedürü yaklaşık 17 fareleri kullanılarak geliştirilmiştir. Büyük kateterler başarılı yaşlı farelerin kullanılmıştır; IMIT m ilk geliştirme> 20 gr arasındadır, BALB / c farelerinde bir 18 G kateter ade kullanımı. Alternatif bir kateter boyutlar kullanılıyorsa da önemlisi, küt iğne kateter lümeni uygun ve sadece kateter ucu ötesine 1 mm uzanan bir uzunluğa kesilmiş olan kaynaklı olmalıdır. 17 g'dan küçük farelerin Entübasyon mümkün olabilir, fakat gerekli uzmanlık nedeniyle tavsiye edilmez, ve daha küçük kateter ve yukarıda tarif edilen daha Spekül kullanımını gerektirecektir.

P. ek olarak birçok solunum patojenlerin verilmesi için IMIT kullandık B. dahil aeruginosa, pseudomallei 9 ve Klebsiella pneumoniae 10. IMIT Model B çalışmalarımız önemli ilerlemeler kaydetmiştir pseudomallei solunum hastalığı, burun aşılama yerine insan hastalığında 9 gözlenen sistemik hastalık bitiş daha farelerin erken, ÜRT-ilişkili morbiditeye neden olduğu tespit sahip. B. pseudomallei Tier 1 selec olduğunubiyosavunma etki t madde, ve, solunum hastalık modelleri Aerosol çıkarmasından için geliştirilmektedir gibi olan modeller silaha patojen için giriş potansiyel biyosavunma ilgili yol. Mevcut aerosol modelleri RBB ve lrt hem de enfeksiyona neden için, aynı potansiyel erken hastalık fenotipi, B. göre olan burun içi model belirledik pseudomallei solunum hastalığı aerosol model için geçerli olabilir. IMIT modelinin bir gelecek uyarlama farelerin sadece akciğer içine hedef Aerosol uygulaması için entübe edildiği entübasyon aracılı aerosol yoluyla (IMAD) olabilir. Mekanik fanlar aerosollaştınlmış, sıvı bazlı ziyade, patojen meydan sunmak için adapte olabilir izofluran anestezisi, korumak için şu anda kullanılabilir.

IMIT akciğere bakterilerin iletimini optimize etmek için bir yöntem olarak, başlangıçta gelişmiş değil, aynı zamanda, fare akciğer içine, diğer reaktifler verilmesi için uygulama sahiptir. Dis olarakyukarıda ele alınan, düşük verimlilik farelerde terkiplerin burun içinden sağlanması, akciğerlerin hedef organı içine reaktiflerin son derece değişken teslimat. Biz IMIT olarak>% 98 dağıtım etkinlik ve multilober dağılımına sahip yaklaşımları için diğer akciğere verilme için mükemmel bir alternatif olduğunu göstermiştir, oysa sıçangil akciğere Pozitron Emisyon Tomografisi (PET) görüntüleme reaktifleri burun içinden sağlanması,% 40 iletim verimliliği 11 elde edildi. Akciğere hedeflenen bir gönderim bu gelişme solunum hastalığının tedavisi için terapötik teslimat tekrarlanabilirliğini artırma potansiyeline sahiptir. I) Çevre akciğer tahriş edici etkisi, ii) akciğer kanseri fenotipik çalışmalar, iii) akciğer özgü siRNA knock-down: IMIT benzer çalışmaları fayda sunabilir.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Rodent, Tilting WorkStand Hallowell EMC 000A3467 Base should be detached when working in a BSC
Operating Otoscope Head Welch Allyn 21700
Otoscope 3.5 V Li Battery Welch Allyn 71900
Mouse Intubation Specula short, Autoclaveable Hallowell EMC 200A3589S
Incisor Loops Hallowell EMC 210A3490A
Cotton fine tip applicator Puritan 871-PC DBL  Used for tongue retraction
I.V. Catheter, 20 G Exel Int 26741 Optional: fit a silicon sleeve with 10 mm exposed catheter surface
Gas tight syringe, 250 ul Hamilton 81120 Used for delivery of liquid inoculum by IMIT
Blunt Needle, 22 G Hamilton 91022 Trim to length to protrude 1 mm from 20 G catheter
Guide wire (Fiber optic wire, 0.5 mm) TheFiberOpticStore.com FOF .50 Cut to 6" length: used as guide wire for intubation
Tuberculin syringe, 1 ml Becton Dickinson 309659 Assemble with fiber optic wire as guide wire
Brilliant Blue R (Coomassie) Sigma B0149
Tygon tubing, 1/16" Saint Gobain ALC00002 
Male Luer 1/16" barb Cole Parmer 45503-22
Female Luer 1/16" barb Cole Parmer 45500-00
Lidocaine, USP Spectrum LI102 pH lidocaine into solution at 2%(w/v) pH7.0
Sample bag, 1 oz Whirl-Pak B01067
U-bottom 96 well plate, sterile Greiner 650161

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Reznik, G. K. Comparative anatomy, physiology, and function of the upper respiratory tract. Environ Health Perspect. 85, 171-176 (1990).
  2. Hoyt, R. F. J., Hawkins, J. V., St. Clair, M. B., Kennet, M. B., et al. Chapter 2. The Mouse in Biomedical Research, Volume 2, Second Edition: Diseases (American College of Laboratory Animal Medicine). Fox, J. G. 2, Academic Press. 23-90 (2007).
  3. Visweswaraiah, A., Novotny, L. A., Hjemdahl-Monsen, E. J., Bakaletz, L. O., Thanavala, Y. Tracking the tissue distribution of marker dye following intranasal delivery in mice and chinchillas: a multifactorial analysis of parameters affecting nasal retention. Vaccine. 20, 3209-3220 (2002).
  4. Eyles, J. E., Spiers, I. D., Williamson, E. D., Alpar, H. O. Tissue distribution of radioactivity following intranasal administration of radioactive microspheres. J Pharm Pharmacol. 53, 601-607 (2001).
  5. Southam, D. S., Dolovich, M., O'Byrne, P. M., Inman, M. D. Distribution of intranasal instillations in mice: effects of volume, time, body position, and anesthesia. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 282, 833-839 (2002).
  6. Miller, M. A., et al. Visualization of murine intranasal dosing efficiency using luminescent Francisella tularensis: effect of instillation volume and form of anesthesia. PLoS ONE. 7, (2012).
  7. Lathem, W. W., Crosby, S. D., Miller, V. L., Goldman, W. E. Progression of primary pneumonic plague: a mouse model of infection, pathology, and bacterial transcriptional activity. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102, 17786-17791 (2005).
  8. Warawa, J. M., Long, D., Rosenke, R., Gardner, D., Gherardini, F. C. Bioluminescent diagnostic imaging to characterize altered respiratory tract colonization by the Burkholderia pseudomallei capsule mutant. Front Microbiol. 2, 133 (2011).
  9. Gutierrez, M., Pfeffer, T. L., Warawa, J. M. Type 3 Secretion System cluster 3 is a critical virulence determinant for lung-specific melioidosis. Submitted. (2014).
  10. Fodah, R. A., et al. Correlation of Klebsiella pneumoniae comparative genetic analyses with virulence profiles in a murine respiratory disease model. PLoS ONE. In revision, (2014).
  11. Soto-Montenegro, M. L., et al. Assessment of airway distribution of transnasal solutions in mice by PET/CT imaging. Mol Imaging Biol. 11, 263-268 (2009).
Entübasyon-aracılı intratrakeal (IMIT) damlatma: A Noninvaziv, Lung-özel Dağıtım Sistemi
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Lawrenz, M. B., Fodah, R. A., Gutierrez, M. G., Warawa, J. Intubation-mediated Intratracheal (IMIT) Instillation: A Noninvasive, Lung-specific Delivery System. J. Vis. Exp. (93), e52261, doi:10.3791/52261 (2014).More

Lawrenz, M. B., Fodah, R. A., Gutierrez, M. G., Warawa, J. Intubation-mediated Intratracheal (IMIT) Instillation: A Noninvasive, Lung-specific Delivery System. J. Vis. Exp. (93), e52261, doi:10.3791/52261 (2014).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter